張珊珊

哈藥集團(tuán)技術(shù)中心

羅庫溴銨注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法篩選

張珊珊

哈藥集團(tuán)技術(shù)中心

目的通過方法篩選及優(yōu)化建立羅庫溴銨注射液的有關(guān)物質(zhì)的檢查方法。方法結(jié)果結(jié)論所建立有關(guān)物質(zhì)檢查方法可有效分離各雜質(zhì)，方法可行。

羅庫溴銨；有關(guān)物質(zhì)；有效分離

羅庫溴銨為當(dāng)下主流的麻醉藥品，在醫(yī)院麻醉科的占有率呈現(xiàn)出逐年增加趨勢，現(xiàn)已成為手術(shù)麻醉的首選藥物，因其起效快，不良反應(yīng)小，術(shù)后復(fù)蘇比較快，越來越受到醫(yī)生的青睞，同時也被患者所接受［1］。因為羅庫溴銨合成過程復(fù)雜，合成路線長，這樣雜質(zhì)比較多，如雜質(zhì)控制不好可能給患者帶來用藥風(fēng)險，為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們參照相關(guān)文獻(xiàn)并根據(jù)羅庫溴銨原料的合成工藝［2-3］，建立羅庫溴銨注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法，所建立的方法應(yīng)能有效檢出合成過程中的起始物料、中間體及降解產(chǎn)物，相關(guān)詳細(xì)研究結(jié)果如下。

1.實(shí)驗材料

儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀（DAD檢測器），XS105型電子天平，pB-10型pH計。

試劑及試藥：羅庫溴銨雜質(zhì)對照品（A～H），來源為美國藥典委員會；羅庫溴銨對照品來源為中檢院；羅庫溴銨注射液為本公司自制樣品；四甲基氫氧化銨、乙腈及磷酸均為色譜純，水為注射用水。

2.方法與結(jié)果

相關(guān)文獻(xiàn)、進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)、《美國藥典》及《歐洲藥典》羅庫溴銨有關(guān)物質(zhì)檢查方法相同，但沒有明確色譜柱，我們檢查方法與上述方法色譜條件相同，流動相為0.05mol/L的四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)pH值至7.4）：乙腈（9∶1），流速為1.0ml/min，色譜柱柱溫為45℃，檢測波長為210nm，進(jìn)樣量為10ul。

2.1樣品處理色譜柱篩選

取供試品溶液，向其中加入雜質(zhì)A～H及合成過程中起始物料，按照擬定方法進(jìn)行篩選，結(jié)果供試品因為溶液中含有水，在進(jìn)樣時容易出現(xiàn)倒峰，通過篩選，表明現(xiàn)將供試品用氮?dú)獯蹈珊蠹右译嫦♂屵@樣可以避免出現(xiàn)倒峰，通過篩選，表明使用Agela NH2（3.5um，250mm*4.6mm）柱可以保證雜質(zhì)及起始物料與主峰有效分離，雜質(zhì)H與主峰的分離度大于1.5，同時溶劑峰不干擾雜質(zhì)A檢出。

2.2專屬性試驗

羅庫溴銨注射液處方中的輔料為氯化鈉及醋酸鈉，樣品制備時用醋酸調(diào)pH值，根據(jù)處方用量，我們制備相應(yīng)的空白輔料溶液，按照確定方法進(jìn)行考察輔料是否影響雜質(zhì)測定，實(shí)驗結(jié)果表明輔料不干擾雜質(zhì)測定。

2.3耐用性試驗

變換色譜柱柱溫、流速、流動相比例及流動相的pH值，色譜柱柱溫變化為±5℃，流速變化為±0.2ml/min，流動相比例為±5℃，結(jié)果表明柱溫變化時雜質(zhì)與主峰可有效分離，柱溫變化對各雜質(zhì)檢出無影響；流速變化時導(dǎo)致雜質(zhì)H與主峰不能有效分離，因此，將流速控制在1.0ml/min；流動相比例變化為±2%時雜質(zhì)與主峰可有效分離，但當(dāng)流動相比例變化超過2%時，雜質(zhì)H與主峰不能有效分離；流動相的pH值變化±0.1時，對雜質(zhì)檢出及分離無影響，在上述條件變化時通過DAD檢測器監(jiān)測主峰的峰純度，在進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查時應(yīng)注意上述條件變化。

2.4專屬性試驗

對供試品進(jìn)行酸破壞、堿破壞、氧化破壞、強(qiáng)光破壞及高溫破壞，同時向供試品中加入起始物料、中間體及各個已知雜質(zhì)，通過DAD檢測器監(jiān)測主峰峰純度，酸破壞為向供試品溶液中加入0.1mol/L鹽酸溶液0.5ml，放置2小時，用堿中和；堿破壞樣品溶液為供試品中加入0.1mol/L的氫氧化鈉溶液0.2ml，放置30min，用酸中和；高溫溶液為取供試品于100℃下放置1小時；強(qiáng)光溶液為取供試品于5000lx條件下放置24小時；氧化破壞為向供試品中加入0.5ml30%的過氧化氫溶液，放置3小時（上述樣品的供試品均為5ml）。同時制備空白輔料的破壞溶液作為空白對照，計算各破壞條件下的回收率。結(jié)果各破壞條件下主峰與雜質(zhì)峰均可有效分離，雜質(zhì)H與主峰分離度均符合規(guī)定，輔料破壞不干擾雜質(zhì)測定，酸、堿、氧化、高溫及強(qiáng)光條件下的峰純度均符合規(guī)定，其回收率分別為98.6%、97.2%、101.5%、98.4%及105.2%。專屬性實(shí)驗結(jié)果表明在高溫條件下樣品不穩(wěn)定，產(chǎn)生雜質(zhì)較多，酸及氧化破壞條件下產(chǎn)生雜質(zhì)較少，堿破壞條件下雜質(zhì)明顯增加，光照條件下雜質(zhì)略有增加。

2.5檢測限與定量限

取羅庫溴銨對照品及雜質(zhì)A～H，分別制成系列濃度溶液，逐步稀釋，以信噪比為3時為檢測限，結(jié)果羅庫溴銨及雜質(zhì)A～H的檢測限分別為9.2、11.5、10.8、13.6、8.7、11.2、5.6、9.7及4.6ng；定量限信噪比為10，結(jié)果羅庫溴銨及雜質(zhì)A～H的等量限分別為28.4、29.8.5、30.1、42.6、25.1、36.1、16.2、28.4及10.8ng。

2.6相對相應(yīng)因子測定

為更準(zhǔn)確測定各雜質(zhì)量，測定雜質(zhì)A～H與羅庫溴銨的相對相應(yīng)因子，結(jié)果表明各個雜質(zhì)與羅庫溴銨的相對相應(yīng)因子均在0.9～1.1之間，表明不用加校正因子進(jìn)行計算。

方法學(xué)試驗結(jié)果表明所建立的有關(guān)物質(zhì)檢查方法可行，可以有效檢出本品合成過程中起始物料及中間體與降解產(chǎn)物（專屬性）。

2.7供試品檢查

對所制備三批供試品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，結(jié)果三批供試品中主要雜質(zhì)為雜質(zhì)A與H，其雜質(zhì)量均小于0.1%，三批供試品總雜質(zhì)均小于0.5%。

3.討論

我們探討羅庫溴銨注射液雜質(zhì)檢查方法，供試品溶液中含有水對測定有干擾，在測定時應(yīng)用氮?dú)獯蹈稍谂湟哼M(jìn)樣，否會影響雜質(zhì)A的檢查。色譜柱的內(nèi)徑對雜質(zhì)檢出特別是雜質(zhì)H與主峰分離度有較大影響，建議固定內(nèi)徑，最好是3.5um；因雜質(zhì)H與主峰不易有效分離，因此有關(guān)物質(zhì)檢查時應(yīng)將雜質(zhì)H與主峰的分離作為系統(tǒng)適用性考察指標(biāo)在有關(guān)物質(zhì)檢查之前先進(jìn)行評價，待符合要求后方可測定；以上為有關(guān)物質(zhì)檢查注意事項。從方法學(xué)試驗結(jié)果可知我們所建立的有關(guān)物質(zhì)檢查方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)，可作為羅庫溴銨注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法。

［1］吳玉軍.腹部手術(shù)患者全麻下持續(xù)輸注維庫溴銨或順式阿曲庫銨肌松作用比較.中外醫(yī)學(xué)研究，2015，13（23）：141-142.

［2］趙凱，侯建平，苑洪忠.羅苦修按有掛物質(zhì)的合成.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2011，42（10）：732-736.

［3］宋更申，姜建國，周麗.HPLC法測定羅庫溴銨注射液的含量及有關(guān)物質(zhì).中國藥房，2010，21（32）：3060-3063.

張珊珊（1984-），女，山東省龍口市人，碩士研究生，中級，作者單位：哈藥集團(tuán)技術(shù)中心，研究方向：藥物質(zhì)量研究。