高華娟，何文勝，黃玉仙

(福建生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，　福建 福州350002)

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福建產(chǎn)山藥資源的腺苷含量比較研究

高華娟，何文勝，黃玉仙

(福建生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建 福州350002)

摘要目的：評價不同福建山藥種質(zhì)資源的品質(zhì)。方法：采用高效液相色譜法測定福建產(chǎn)山藥腺苷含量。結(jié)果：不同種質(zhì)山藥腺苷含量差異極顯著，腺苷含量最高的是福建邵武(0.2163%)；參薯類10份樣品未能檢出。結(jié)論：不同種質(zhì)來源的山藥腺苷含量差異顯著，為選種和開發(fā)優(yōu)質(zhì)的山藥品種提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞山藥；腺苷；比較分析

山藥是人所共知的滋補佳品。山藥中含有淀粉、蛋白質(zhì)、游離氨基酸等營養(yǎng)成分以及多糖、尿囊素、腺苷等多種活性成分及化合物[1-3]。腺苷對糖、脂肪代謝，核酸、蛋白質(zhì)的合成等起著重要的調(diào)節(jié)作用，在冬蟲夏草質(zhì)量評價中，被作為主要指標性成分[4]。腺苷作為山藥中的有效成分之一，可以作為山藥及山藥相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量標準的指標性成分，在揭示山藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)方面具有十分重要的意義。

在福建省，山藥種質(zhì)資源十分豐富，并有悠久的種植歷史[5]，歷來在民間應(yīng)用普遍[6]，但是質(zhì)量參差不一，影響了福建省山藥的品質(zhì)與品牌[7]，但有關(guān)福建山藥腺苷方面的報道較少，因此，迫切需要開展福建山藥質(zhì)量的評價研究。本文對源自我省的72份山藥樣品進行研究，檢測、比較評價不同種質(zhì)資源及各類群間腺苷含量，為當前我省山藥腺苷含量標準的建立提供更多科學(xué)數(shù)據(jù)，為開發(fā)和選用優(yōu)質(zhì)的山藥品種提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試材料

本試驗72份材料來自福建省25個縣區(qū)，所用山藥種質(zhì)資源均由福建省三明市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所提供，材料編號及來源地見表1。供試材料通過3年時間觀察，參考《中國植物志》(1985年版)、《福建植物志》(1995年版)等相關(guān)文獻，并經(jīng)福建農(nóng)林大學(xué)張大鵬教授鑒定可分為4類山藥，其原植物分別是薯蕷(D.oppositeThunb.)、參薯(D.alataLinn.)、山薯(D.fordiiPrain et Burkill)和褐苞薯蕷(D.persimilisPrain et Burkill)。

表1　供試山藥種質(zhì)資源

樣品預(yù)處理：對采收的塊莖除去非藥用部分，清水洗干凈，切成厚約0.5 cm薄片，并迅速在60℃條件下干燥至恒重，磨粉，過40 目篩，密封裝袋并冷藏。參照《中國藥典》2010 年版一部附錄IX H法測定山藥水分，含水量為10.64%。

1.2主要試劑

腺苷(中國藥品生物制品檢定所，批號1131668-26929)，乙腈、甲醇等為國產(chǎn)分析純。

1.3主要儀器

高效液相色譜儀(DAD檢測器，Agilent-1200， 美國Agilent公司)，MIUI-Q型超純水器(廈門精藝興業(yè)科技有限公司)，KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，電子天平(AR2130, 美國奧豪斯)，微量天平(CP225D, 德國賽多利斯)，超聲波提取器(KQ-500E型，昆山市超聲儀器有限公司)，低速大容量多管離心機(LXJ-ⅡB，上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.4色譜條件

色譜柱：Daisogel SP-ODS-BP C18柱(5μm, 250 mm×4.60 mm)；流動相：乙睛-水(體積比為5：95)；檢測波長：260 nm；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃。參照《中國藥典》2010年版一部附錄VI 中D項高效液相色譜法，分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀。

1.5對照品溶液制備

精密稱取干燥恒重的腺苷對照品4.62 mg，置25 mL容量瓶中，用15%甲醇溶解、定容至刻度，搖勻，精確吸取2 mL置20 mL容量瓶中，加15%甲醇溶解，定容至刻度，搖勻制成濃度為0.01848 mg·mL-1，即得腺苷對照品溶液。

1.6供試品溶液的制備

取不同種質(zhì)資源的山藥粉末約1.0 g，精密加入15%甲醇10 mL，稱重，搖勻，超聲提取30 min后，放冷，再稱定質(zhì)量，不足部分用15%甲醇補足，搖勻，取上清液0.5 mL，0.45 nm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.7標準曲線制備

分別精密吸取腺苷對照品溶液1、5、10、15、20、25 μL，微孔濾膜過濾，按“1.4色譜條件”測定峰面積，并以對照品的量X(μg)為橫坐標，峰面積 (mAU)為縱坐標，繪制標準曲線，進行線性回歸，得回歸方程Y=3 811.9X-5.962 4，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9。

圖1　腺苷對照品的HPLC圖譜

圖2　安遠Ⅰ山藥樣品腺苷的HPLC圖譜

1.8方法學(xué)考察

(1) 精密度：精密吸取同一濃度的供試品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，記錄色譜峰面積，測得腺苷峰面積積分值RSD為1.1%。

(2) 穩(wěn)定性：取同一份供試品溶液，在上述色譜條件下，分別于0，4，8，12，16，24 h進行分析，測得腺苷峰面積積分值RSD為0.91%，表明供試溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

(3) 重復(fù)性：取同一批山藥樣品，按供試品制備項下的方法重復(fù)制備6份，進行測定，測得腺苷峰面積積分值RSD為0.9%，表明本方法重復(fù)性良好。

(4) 回收率：取已知腺苷含量的山藥粉末樣品約0.5 g，精密稱定，加入新配制濃度為0.2 mg·mL-1的對照品溶液5 mL，按供試品制備方法制備，共6份，測定含量見表2，計算回收率為100.6%，RSD為0.05%。

表2　腺苷加樣回收率

1.9樣品測定

72樣品分別按“1.4色譜條件”測定峰面積，并根據(jù)標準曲線計算樣品的腺苷含量。

2結(jié)果與分析

72份福建山藥種質(zhì)資源包含了薯蕷、褐苞薯蕷、參薯、山薯4個類群，為進一步了解山藥腺苷含量是否與栽培地區(qū)有關(guān)，對其進行方差分析和多重比較，見表3和表4。

表3　福建山藥種質(zhì)資源腺苷含量方差分析

表4　福建山藥種質(zhì)資源腺苷含量差異分析

注：小寫字母不同表示差異顯著，大寫字母不同表示差異極不顯著。

在72份資源中，其中32號(泰寧Ⅲ)、33號(建陽Ⅴ)、34號(安溪Ⅱ)、35號(清流Ⅲ)、37號(福安Ⅰ)、38號(將樂Ⅲ)、39號(德化Ⅳ)、41號(云霄Ⅰ)、42號(云霄Ⅱ)、43號(云霄Ⅲ)、45號(漳州Ⅱ)、46號(上杭Ⅰ)等10份樣品資源未測定出腺苷，全部為參薯群。對余下60份福建山藥資源腺苷含量的差異分析結(jié)果表明：不同種質(zhì)資源間的腺苷含量差異很大，名列前三的分別為53號(邵武Ⅰ，0.2163%)；67號(長?、?，0.2086%)和36號(永春Ⅰ，0.2018%)；該3份資源的腺苷含量與其他所有資源均達到極顯著水平，含量最低的是9號(連城Ⅰ)，僅含0.0352%，是53號(邵武Ⅰ，0.2163%)的1/6。60份資源腺苷的平均含量為0.1096%。

3討論

從測定結(jié)果可以看出，供試的72份福建產(chǎn)山藥不同資源間的腺苷含量差異很大，含量最高的是53號(邵武Ⅰ，0.2163%)，12份參薯類群供試品在本實驗中均未檢出腺苷，參薯在2006年版《福建省中藥材標準》中作為“福建山藥”來源之一[8]，是“福建山藥”的主流種，具有高產(chǎn)、適應(yīng)性廣、栽培容易等特點[9]。腺苷，對糖、脂肪代謝，核酸、蛋白質(zhì)的合成等起著重要的調(diào)節(jié)作用，腺苷含量目前是評價冬蟲夏草質(zhì)量優(yōu)劣的一個重要指標，2010年版《中華人民共和國藥典》冬蟲夏草項下明確規(guī)定其含量不能低于0.010%[10]。除參薯類供試品外，在60份檢出腺苷的供試品中腺苷含量均高于冬蟲夏草腺苷規(guī)定含量，含量最高的53號(邵武Ⅰ，0.2163%)是冬蟲夏草腺苷規(guī)定量的20倍多，含量最低的是9號(連城Ⅰ，0.0352%)是冬蟲夏草腺苷規(guī)定量的3倍多。腺苷作為山藥中的有效成分之一，可以作為山藥及山藥相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量標準的指標性成分，在揭示山藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)方面具有十分重要的意義。

福建省山藥種質(zhì)資源豐饒，種植歷史悠久，是我國山藥主要原產(chǎn)地及重要生產(chǎn)地之一。該省山藥種植面積近30 000 hm2[5,11]，其中漳州云霄馬鋪鄉(xiāng)山藥種植面積就達到800 hm2，種植戶多達3 000多戶。所以研究山藥不同種質(zhì)資源腺苷含量具有實際意義，本研究用HPLC方法對72份福建產(chǎn)山藥種質(zhì)資源進行腺苷含量評價，為建立山藥質(zhì)量標準提供更多科學(xué)數(shù)據(jù)，為選擇培育、開發(fā)和應(yīng)用優(yōu)質(zhì)的山藥品種提供了科學(xué)依據(jù)。

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Comparative Analysis of Adenosine Contents in the Rhizoma Dioscoreae from Fujian Province

Gao Huajuan， He Wenshenɡ， Huanɡ Yuxian

(Fujian Vocational College of Bio-engineering, Fuzhou 350002, China)

AbstractObject: To evaluate the quality in the Rhizoma Dioscoreae from different germplasm resources in Fujian province. Methods: The adenosine contents of these medicinal materials were determined by the methods of High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Results: The adenosine contents in the different germplasm resources had significant difference. The highest content was 0.2163%, which from Shaowu city in Fujian province. But adenosine in ten samples ofD.alataLinn.types was not detected. Conclusion: The adenosine contents in the different germplasm resources had significant difference, which provided the scientific basis for development and seed selection of high-quality Rhizoma Dioscoreae varieties in Fujian province.

Key wordsRhizoma Dioscoreae; adenosine; comparative analysis

收稿日期：2015-06-12

基金項目：福建省教育廳基金項目(JB13316)—不同山藥種質(zhì)資源的腺苷含量比較研究；福建省科技項目計劃(2014Y2008)階段性研究成果之一。

作者簡介：高華娟(1981—)，女，講師。研究方向：中藥與天然產(chǎn)物。E-mail:27011630@qq.com

doi：10.3969/j.issn.1006-9690.2016.01.007

中圖分類號：S632.1

文獻標識碼：A

文章編號：1006-9690(2016)01-0024-04