黃向紅，孟紅燕，陳德文

（1.浙江樹(shù)人大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，浙江 杭州　310015; 2.常州大學(xué)石油化工學(xué)院，江蘇 常州　213100；3.義烏市產(chǎn)品（商品）質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，浙江 義烏　322000）

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高效液相色譜法分離化妝品中7種限用色素

黃向紅1，孟紅燕2，陳德文3

（1.浙江樹(shù)人大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，浙江 杭州310015; 2.常州大學(xué)石油化工學(xué)院，江蘇 常州213100；3.義烏市產(chǎn)品（商品）質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，浙江 義烏322000）

摘要：以乙腈/水為流動(dòng)相，使用C 18色譜柱和紫外檢測(cè)器，建立了同時(shí)分析分散黃3、顏料橙5、蘇丹紅I、II、III、IV、蘇丹藍(lán)II的高效液相色譜方法。外標(biāo)法定量，探討了檢測(cè)波長(zhǎng)和流動(dòng)相對(duì)7種限用色素分離的影響，確定了較佳的色譜分離條件,R SD≤5.21%，回收率為61.91%～106.0%。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；化妝品；色素；分離

隨著生活水平的不斷提高，化妝作為美容方式之一，已經(jīng)成為一種世界流行的時(shí)尚。在化妝品中添加著色劑可以起到美化修容作用[1]，然而，大多數(shù)色素是合成染料，長(zhǎng)期或過(guò)量使用對(duì)人體有一定潛在危害[2]，因此人們對(duì)化妝品成分提出了更高的要求。世界上很多國(guó)家紛紛立法對(duì)化妝品中著色劑的用量加以限制[3]。

目前，對(duì)化妝品中有機(jī)著色劑的測(cè)定主要采用高效液相色譜法（H PLC）[4]、高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法[5]、分光光度法[6]和膠束熒光法[7]等。本研究根據(jù)化妝品的種類，在采用液-液萃取簡(jiǎn)單易行的樣品前處理方法提取后，用H PLC對(duì)7種限用色素同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，探討了檢測(cè)波長(zhǎng)和流動(dòng)相對(duì)色素分離的影響，確定了較佳的色譜分離條件。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器

電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），Agi l ent1200高效液相色譜儀（配有四元高壓泵和紫外檢測(cè)器，安捷倫公司）。

1.2試劑與材料

甲醇、乙腈(色譜級(jí))；色素（w>99%）；超純水。

1.3溶液的制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取一定量的7種色素標(biāo)準(zhǔn)品各10 m g，置于10 m L容量瓶中，用甲醇定容。該貯備液在4℃以下密封冷藏保存，使用時(shí)稀釋至所需濃度。

樣品溶液的配制：準(zhǔn)確稱取樣品5 m g，置于2.5 m L離心管中，用甲醇-離子液體溶液充分搖勻使樣品溶解。

1.4色譜條件

色譜柱：H ypersi lC18柱（4.6 m m×250 m m，粒徑5 μm）；柱溫：室溫；流動(dòng)相：乙腈-水；檢測(cè)波長(zhǎng)475 nm；流速0.80 m L/m i n；進(jìn)樣體積20μL。

1.5計(jì)算

回收率=（加標(biāo)測(cè)定值-測(cè)定值）/加標(biāo)值×100%

2　結(jié)果與討論

2.1色譜條件的確立

2.1.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

波長(zhǎng)選擇是依據(jù)待測(cè)物質(zhì)最大吸收波長(zhǎng)來(lái)決定的。通常，高效液相色譜檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，因而，H PLC中波長(zhǎng)的選擇和紫外波長(zhǎng)選擇一致，均為選擇最大吸收波長(zhǎng)，這樣能保證檢測(cè)的靈敏度和響應(yīng)值最高。掃描分散黃3、顏料橙5、蘇丹紅I、II、III、IV、蘇丹藍(lán)II 7個(gè)色素的紫外吸收光譜，如圖1。從圖1可以看出，7種色素在475 nm附近吸收均較強(qiáng)，單位質(zhì)量吸光度相近，確定將475 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1　7種色素的的紫外吸收光譜

2.1.2流動(dòng)相的選擇

本實(shí)驗(yàn)考察了上述7種限用色素在甲醇/水和乙腈/水流動(dòng)相體系中的色譜分離情況。各標(biāo)準(zhǔn)品色素的分離色譜圖如圖2。由圖2可以看出，在甲醇/水體系中，色譜圖基線不穩(wěn)，各個(gè)峰分離度小，蘇丹藍(lán)Ⅱ沒(méi)有出峰，蘇丹紅IV的保留時(shí)間較晚，與前一個(gè)峰出峰時(shí)間相隔甚遠(yuǎn)。而在乙腈/水中，7種限用色素能夠得到較好的分離結(jié)果，故選擇乙腈/水作為流動(dòng)相。

圖2　7種色素在甲醇/水和乙腈/水流動(dòng)相體系中的色譜分離情況

2.2精密度試驗(yàn)

在上述條件下，對(duì)樣品進(jìn)行平行測(cè)定，7種色素平行測(cè)試的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表1所示，分別為分散黃3：4.87%；顏料橙5：3.07%；蘇丹紅Ⅰ：5.21%；蘇丹紅Ⅱ：3.31%；蘇丹藍(lán)Ⅱ：3.31%；蘇丹紅Ⅲ：3.40%；蘇丹紅Ⅳ：3.12%。(n=8)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：選擇的波長(zhǎng)和流動(dòng)相滿足分離7種限用色素的條件，高效液相色譜精密度高。

2.3準(zhǔn)確度試驗(yàn)

樣品稀釋后加入一定量分散黃3、顏料橙5、蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹藍(lán)Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的混合標(biāo)樣，樣品加標(biāo)色譜圖如圖3所示，回收率為61.91%～106.0%，分離方法可行。

圖3　樣品加標(biāo)色譜圖

3　結(jié)論

選擇的7種限用色素在化妝品著色劑中具有一定的代表性，高效液相色譜法可以有效地分離化妝品色素，該方法精確度和準(zhǔn)確度都比較高，選擇的波長(zhǎng)和流動(dòng)相滿足分離色素的要求，是值得推廣的一種色素測(cè)定方法。

表1　樣品平行測(cè)試的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

參考文獻(xiàn)

[1]李瑋,芮昶,屠海云.高效液相色譜法測(cè)定化妝品中的7種色素[J].分析實(shí)驗(yàn)室,2011,30(12):85-89.

[2]鄭星權(quán),周淑玉,周世偉.化妝品衛(wèi)生檢驗(yàn)手冊(cè).北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2003:17-31，371.

[3]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.化妝品衛(wèi)生規(guī)范[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2007．

[4]M ust af a Soyl ak,Yunus Em re Unsal,Erkan Yi l m az.De鄄termination of rhodamine B in soft drink,waste water and lipstick samples after solid phase extraction[J]. Food and Chemical Toxicology,2011（49）:1796–1799.

[5]Chi en Chun W ang,Adri ana N.M asi,Li l i ana Fernandez．On-line micellar-enhanced spectrofluorimetric deter鄄mination of rhodamine dye in cosmetics[J].Talanta 2008（75）:135–140.

[6]林維宣,孫興權(quán),趙雪蓉.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)化妝品中6種禁用著色劑 [J].色譜, 2012,30（5）:527-532.

[7］盧劍,酈明浩.H PLC法測(cè)定唇彩、口紅中蘇丹紅色素含量[J]．香料香精化妝品,2008（1）:20-22.

doi：10．13752／j．issn．1007－2217．2016．02．006

收稿日期：2016－01－27