曹殿潔，楊　華

(安徽新華學(xué)院，安徽合肥 230008)

?

牛乳摻堿和亞硝酸鹽檢測(cè)試劑盒研究

曹殿潔，楊華

(安徽新華學(xué)院，安徽合肥 230008)

[摘要]本文利用溴麝香草酚藍(lán)指示劑、苯磺酸檢測(cè)牛乳中摻堿和亞硝酸鹽，研制出一種廉價(jià)、便捷、穩(wěn)定的牛乳摻假檢測(cè)試劑盒，結(jié)果確定了2個(gè)摻假檢測(cè)項(xiàng)目中檢測(cè)試劑的濃度、用量和檢測(cè)下限。本方法簡(jiǎn)便、快速，可用于牛乳摻假的快速檢測(cè)。

[關(guān)鍵詞]牛乳；摻假；試劑盒

牛奶是營(yíng)養(yǎng)成份全、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、容易被人體消化和吸收的液體食品[1]。牛奶中含有豐富的活性鈣，具有抑制腫瘤、鎮(zhèn)靜安神、美容養(yǎng)顏、促進(jìn)幼兒大腦發(fā)育、幫助減肥等功能。目前，隨著乳品行業(yè)的迅速發(fā)展，我國(guó)乳源的質(zhì)量安全問(wèn)題日漸凸顯[2]，尤其是鮮乳摻假現(xiàn)象普遍，摻假手段不斷變換，這些行為嚴(yán)重?cái)_亂了乳品市場(chǎng)，損害了乳品消費(fèi)者的切身利益，制約了乳品工業(yè)的健康發(fā)展。

本文通過(guò)對(duì)市場(chǎng)與乳品行業(yè)的深入調(diào)查，以常見(jiàn)的摻假成分堿和亞硝酸鹽為研究對(duì)象[3-7]，以減少樣品、試劑用量，便于現(xiàn)場(chǎng)簡(jiǎn)便操作、攜帶為研究目標(biāo)，進(jìn)行方法篩選、條件優(yōu)化，從而建立檢測(cè)體系，使之能夠達(dá)到快速定性鑒別牛乳中摻假物質(zhì)的目的。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1實(shí)驗(yàn)材料與試劑

伊利純牛奶；蒸餾水；溴麝香草酚藍(lán)；無(wú)水碳酸鈉；無(wú)水乙醇；亞硝酸鈉；酒石酸；無(wú)水苯磺酸；N-1-萘乙二胺鹽酸鹽。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器

HH-S恒溫水浴鍋(國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠)；FA2004型電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)；DHG-9011A恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海三發(fā)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1牛乳中摻入堿性物質(zhì)的檢測(cè)

牛乳容易腐敗變酸，而添加Na2CO3、NaHCO3等堿性物質(zhì)可以使變酸的牛奶pH值提高。鮮乳中摻入堿性物質(zhì)可使溴麝香草酚藍(lán)指示劑由黃變藍(lán)，隨著摻堿量的不同，顏色變化依次為黃→黃綠→綠→藍(lán)，根據(jù)顏色的不同可以判斷摻入堿性物質(zhì)的量。

2.1.1確定摻堿牛乳最低檢測(cè)值

精確稱取Na2CO3配制假樣性摻堿牛乳溶液，濃度范圍為0～8.0 mg·mL-1。量取假樣性摻堿牛乳溶液3.0 mL，滴加1.0 g·L-1指示劑溶液3滴，靜置數(shù)秒，觀察奶樣環(huán)層顏色變化。結(jié)果如表1所示，第4號(hào)試管中摻堿濃度為0.6 mg· mL-1，加入指示劑后顏色由黃變綠，所以確定摻堿牛乳最低檢測(cè)值為0.6 mg·mL-1。

表1　牛乳加堿量與環(huán)層顏色變化情況

2.1.2選擇最佳指示劑濃度

精確稱取溴麝香草酚藍(lán)，用95%的乙醇配制指示劑溶液，濃度范圍0.6～1.0 mg·mL-1。量取假樣性摻堿牛乳溶液3.0 mL，分別滴加指示劑溶液3滴，靜置數(shù)秒，觀察奶樣環(huán)層顏色變化。結(jié)果如表2所示，考慮到顯色靈敏度和節(jié)約試劑成本，確定指示劑濃度為1.0 g·L-1，足以保證顯色的效果和反應(yīng)靈敏度。

表2　指示劑濃度使摻堿牛乳變色的最低摻堿量

2.1.3牛乳摻堿檢測(cè)試劑盒設(shè)計(jì)

牛乳摻堿檢測(cè)試劑盒包括比色卡一份，檢測(cè)指示劑一份，小試管一個(gè)和塑料滴管一個(gè)。依據(jù)表1的環(huán)層牛奶顏色制作得到相對(duì)應(yīng)的比色卡，如圖1所示?？紤]到試劑長(zhǎng)期使用及貯存穩(wěn)定性，溶液試劑的包裝材料選為棕色聚氯乙烯塑料瓶。

圖1　牛奶摻堿性物質(zhì)快速檢測(cè)比色卡

2.2牛乳中摻入亞硝酸鹽的測(cè)定

牛乳容易腐敗，而添加NaNO2等亞硝酸鹽類(lèi)物質(zhì)可以作為防腐劑來(lái)提高牛乳的保質(zhì)期，牛乳中摻入亞硝酸鹽類(lèi)物質(zhì)的檢測(cè)是利用苯磺酸為指示劑的顯色反應(yīng)[8]。亞硝酸鹽與苯磺酸在弱酸性條件下重氮化，然后與N-1-萘乙二胺鹽酸鹽(簡(jiǎn)稱萘乙二胺)發(fā)生偶合反應(yīng)，生成紫紅色螯合物，顏色的深淺與亞硝酸鹽的含量成正比。

2.2.1確定試劑用量

精確稱取NaNO2配制假樣性亞硝酸鹽牛乳溶液，濃度范圍為0.125～1.5 mg·mL-1。采取單因素實(shí)驗(yàn)的方法，以牛乳開(kāi)始變紅為指標(biāo)，改變酒石酸濃度、萘乙二胺濃度和苯磺酸濃度，記錄滴定終點(diǎn)的亞硝酸鹽濃度，優(yōu)化參與反應(yīng)的三種試劑用量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3、表4、表5所示，考慮到顯色靈敏度和節(jié)約試劑成本，確定酒石酸用量為30 g·L-1，萘乙二胺用量為2.0 g·L-1，苯磺酸用量為13 g·L-1，足以保證顯色的效果和反應(yīng)靈敏度。

表3　浸泡液中酒石酸濃度對(duì)結(jié)果影響

注：萘乙二胺濃度1.5 g·L-1，苯磺酸濃度5 g·L-1。

表4　浸泡液中萘乙二胺濃度對(duì)結(jié)果影響

注：酒石酸濃度30 g·L-1，苯磺酸濃度5 g·L-1。

表5　浸泡液中苯磺酸濃度對(duì)結(jié)果影響

注：酒石酸濃度30 g·L-1，萘乙二胺濃度2.0 g·L-1。

2.2.2制備檢測(cè)試紙

將酒石酸∶萘乙二胺∶苯磺酸=30∶2.0∶13(體積比)浸泡液倒入圓盤(pán)中，取一定量的干凈濾紙(5 cm×1 cm)浸泡其中，15分鐘后取出，60 ℃烘箱烘干。試紙片貯存于薄膜復(fù)合袋內(nèi)，封口機(jī)封口，干燥避光存放，試紙貯存穩(wěn)定性至少可達(dá)半年，且不影響反應(yīng)靈敏度。

2.2.3檢測(cè)試劑盒設(shè)計(jì)

將摻亞硝酸鹽奶樣(0、0.125、0.16、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5 g·L-1)涂在制備試紙上，試驗(yàn)結(jié)果如表6所示。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顏色變化制作比色卡，如圖2所示。第5號(hào)試管牛乳顏色開(kāi)始變紅，即用苯磺酸法測(cè)定牛奶中亞硝酸鹽濃度最低可達(dá)0.5 mg·mL-1。

表6　亞硝酸鹽快速檢測(cè)方法檢測(cè)下限的確定

圖2　牛乳摻亞硝酸鹽快速檢測(cè)比色卡

3結(jié)論

本文改良了反應(yīng)試劑的配方比例，整合了反應(yīng)試劑，進(jìn)一步優(yōu)化了試劑盒的測(cè)定精度、成本、時(shí)間與操作步驟，省去了人工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線等步驟，且操作快速簡(jiǎn)便，不需要特殊的儀器設(shè)備，對(duì)檢測(cè)人員沒(méi)有特殊要求、攜帶方便、成本低、對(duì)測(cè)定的環(huán)境條件要求低，為商品檢測(cè)人員對(duì)牛乳市場(chǎng)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)、執(zhí)法提供了方便，也為大眾消費(fèi)者對(duì)牛乳市場(chǎng)的監(jiān)督提供了可能。

[參考文獻(xiàn)]

[1]劉偉娟.牛乳摻偽現(xiàn)狀的調(diào)查綜述[J].食品研究與開(kāi)發(fā),2005,26(3):30.

[2]劉紹軍.牛乳中摻假檢驗(yàn)的新方法[J].食品科技,2000(1):56.

[3]王志琴.牛奶摻堿快速檢測(cè)試紙的研制[J]. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué),2010, 47(8):1651-1655.

[4]吳敏.牛乳中淀粉摻假快速檢測(cè)試紙的研制[J].乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2008(1):18-20.

[5]吳敏.牛乳中糊精摻假快速檢測(cè)試紙的研制[J].食品工業(yè),2007(5):54-55.

[6]張潔.亞硝酸鹽快速檢測(cè)試紙的研制[J].食品安全與檢測(cè),2010,35(8):344-399.

[7]魏峰.牛奶中摻入尿素的兩種快速檢測(cè)方法[J].食品工程,2006(1):58-60.

[8]黃亞?wèn)|.牛乳施假摻雜的監(jiān)測(cè)方法[J].江蘇調(diào)味副食品,2003(3):20-23.

Study on the Kit for the Determination of Alkaline Substance and Nitrite in Milk

CAO Dian-jie,YANG Hua

(Anhui Xinhua University, Hefei Anhui 230008，China)

Abstract:By using bromthymol blue indicator and benzene sulfonic acid , a cheap, convenient and stable detection kit was developed to detect alkali compounds and nitrite in the milk.This research identified the concentration and consumption of detection reagent，which also obtained the detection limit.The methods can be used in the detection of milk adulteration.

Key words:milk; adulteration;kit

[收稿日期]2016-04-11

[基金項(xiàng)目]國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計(jì)劃項(xiàng)目“牛乳摻假檢測(cè)試劑盒研究”(201212216026)。

[作者簡(jiǎn)介]曹殿潔(1981- )，女，副教授，碩士，從事食品安全檢測(cè)與分析研究。

[中圖分類(lèi)號(hào)]S879.1；TS252.7

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2095-7602(2016)06-0068-04