趙為民　劉　林　方　法　楊新輝　王海江

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胃腸外科,烏魯木齊,830011)

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黃芪注射液對(duì)Ⅲ期胃癌的療效及對(duì)機(jī)體免疫功能的影響

趙為民劉林方法楊新輝王海江

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胃腸外科,烏魯木齊,830011)

摘要目的:觀(guān)察黃芪注射液對(duì)Ⅲ期胃癌的療效,并探討其對(duì)機(jī)體免疫功能的影響。方法:將我院2008年1月至2010年11月60例Ⅲ期胃癌患者隨機(jī)分為對(duì)照組和觀(guān)察組,并將同期30例健康體檢者設(shè)為健康對(duì)照組。2組Ⅲ期胃癌均接受胃癌根治術(shù),并在術(shù)后常規(guī)給予化療,以30 d為1個(gè)療程,觀(guān)察組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用黃芪注射液30 mL加入0.9%氯化鈉溶液250 mL中靜脈滴注,1次/d,連續(xù)治療30 d。治療結(jié)束后2組胃癌患者的生活質(zhì)量(Karnofsky評(píng)分)及累積生存率。檢測(cè)3組患者外周血Th1、Th2細(xì)胞百分比變化。結(jié)果:1)黃芪注射液可以明顯提高Ⅲ期胃癌患者的生活質(zhì)量,同時(shí)提高患者的累積生存率。2)胃癌患者Th1/Th2比值明顯低于健康對(duì)照組,經(jīng)過(guò)治療后2組患者Th1/Th2比值均有所下降,其中觀(guān)察組下降的趨勢(shì)更明顯(P<0.05)。結(jié)論:Ⅲ期胃癌患者體內(nèi)出現(xiàn)CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào),黃芪注射液可以通過(guò)糾正CD4+T細(xì)胞的水平達(dá)到提高患者生活質(zhì)量的目的。

關(guān)鍵詞Ⅲ期胃腫瘤;黃芪注射液;Th1/Th2

胃癌具有極高的臨床發(fā)病率,其死亡率亦是高居癌癥死因第2位,是人類(lèi)生命健康的主要?dú)⑹帧６鄶?shù)癌癥患者確診時(shí)已處于中晚期,早期胃癌患者術(shù)后5年生存率接近90%[1],而中晚期胃癌患者目前尚未達(dá)到根治目標(biāo),因此如何提高中晚期胃癌患者術(shù)后生存率一直是胃癌臨床研究的熱點(diǎn)話(huà)題。近年來(lái)中醫(yī)以其抗癌效應(yīng)較強(qiáng)、安全性良好的優(yōu)勢(shì)被醫(yī)學(xué)界所重視。黃芪具有補(bǔ)益氣血的功效,是諸多醫(yī)家治療癌癥術(shù)后的良藥。黃芪注射液是由黃芪中提取的有效成分精制而成,我們?cè)谂R床實(shí)踐研究中發(fā)現(xiàn)黃芪注射液可以提高癌癥患者的生活質(zhì)量,為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)制,本團(tuán)隊(duì)進(jìn)行了一系列研究,具體情況報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料將2008年1月至2010年11月60例Ⅲ期胃癌(根據(jù)第7版TNM分期)且接受胃大部分切除術(shù)者納入研究,所有患者均為本院初次就診并經(jīng)組織病理學(xué)確診。60例患者隨機(jī)分為對(duì)照組和觀(guān)察組,每組各30例,2組患者的病理類(lèi)型、組織分級(jí)、年齡、病程等一般情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。同時(shí)選擇同期健康體檢者30例設(shè)為健康對(duì)照組。本研究方案經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審查批準(zhǔn),所有受試對(duì)象均知情同意。

1.2納入、排除及剔除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn):1)年齡<75歲且為初治患者;2)Karnofsky評(píng)分≥70;3)組織病理學(xué)確診的胃癌,并參照FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)處于IIIa期至IIIc期者;4)無(wú)心、腦、腎等重大臟器疾病者,且無(wú)轉(zhuǎn)移;5)簽署知情同意書(shū)者。

排除及剔除標(biāo)準(zhǔn):1)不符合上述標(biāo)準(zhǔn)者;2)具有免疫缺陷性疾病者;3)出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥者;4)治療過(guò)程不予合作者。

1.3治療方法所有患者均接受胃大部分切除術(shù)后接受常規(guī)化療,亞葉酸鈣200 mg/m2,氟脲苷15 mg/kg,奧沙利鉑130 mg/m2,以30 d為1個(gè)療程。與此同時(shí),觀(guān)察組患者加用黃芪注射液30 mL配0.9%氯化鈉溶液250 mL靜脈滴注,1次/d,連續(xù)治療30例。

1.4觀(guān)察指標(biāo)治療結(jié)束后2組胃癌患者的生活質(zhì)量(Karnofsky評(píng)分)及累積生存率。檢測(cè)3組患者外周血Th1、Th2細(xì)胞百分比變化。

1.5流式細(xì)胞檢測(cè)

1.5.1主要試劑與儀器RPMI 1640培養(yǎng)基(美國(guó)Thermo公司)、胎牛血清(美國(guó)Thermo公司);人淋巴細(xì)胞分離液(天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司);佛波酯(PMA)、離子霉素(Ion美國(guó)Sigma公司)、布雷桿氏菌素A(BFA美國(guó)eBiosclence公司)、破膜劑,酶標(biāo)儀,流式染色緩沖液CD4-FITC、IFN-γ-PE流式抗體(均購(gòu)自美國(guó)eBiosclence公司)、Transwell小室(0.1 μm北京樂(lè)博生物技術(shù)有限公司、流式細(xì)胞儀(Partec GmbH德國(guó)產(chǎn)品型號(hào):YZB/GEM 946-40)。

1.5.2標(biāo)本采集及細(xì)胞分離分別抽取健康對(duì)照組、對(duì)照組組及觀(guān)察組患者治療前后前臂外周抗凝血10 mL,用人淋巴細(xì)胞分離液提取外周血單核細(xì)胞(PBMC,1×106/mL)400 μL,均分為2份,置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中,用于Th1及Th2流式檢測(cè)。

1.5.3Th1、Th2細(xì)胞流式檢測(cè)方法加入刺激劑佛波醇乙酯(PMA)及離子霉素工作液,使其終濃度分別為50 ng/mL、1 μg/mL,置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～6 h,再加入終濃度為2 μg/mL BFA,再次置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h,將培養(yǎng)皿中細(xì)胞收集至EP管,用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗離心收集細(xì)胞,在4 ℃,500×g條件下離心3 min,摒棄上清液。再使用100 μL流式染色緩沖液重懸細(xì)胞30 min后加入CD4-FITC流式抗體各5 μL,避光4 ℃環(huán)境中孵育30 min,再加入流式染色緩沖液1 mL洗滌1次,在4 ℃,500×g條件下離心3 min,摒棄上清液,再加入600 μL破膜劑,避光4 ℃環(huán)境中孵育30 min后預(yù)冷PBS沖洗1次,再用100 μL破膜劑重懸細(xì)胞后加入2 μL藻紅蛋白標(biāo)記的各T淋巴細(xì)胞亞群相對(duì)應(yīng)的標(biāo)記物(IFN-γ-PE、IL-4-APC),避光4 ℃環(huán)境中孵育30 min,再用1 mL破膜劑沖洗1次后使用預(yù)冷PBS 200 μL重懸細(xì)胞,操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各細(xì)胞。

2結(jié)果

2.1Karnofsky評(píng)分及生存率比較完成治療后2組胃癌患者Karnofsky評(píng)分均較治療前有所提高,其中觀(guān)察組提高的趨勢(shì)更為明顯(P<0.05)。對(duì)照組中位生存期40.23,觀(guān)察組為59.12,2組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1及圖1。

圖1　2組生存曲線(xiàn)比較

組別Karnofsky治療前治療后對(duì)照組63.87±2.5272.44±1.93觀(guān)察組62.91±3.6782.55±3.28t4.333.82P0.410.03

2.2黃芪注射液能顯著上調(diào)Ⅲ期胃癌患者外周血中Th1/Th2比值對(duì)不同治療組患者外周血進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+IFN-γ+及CD4+IL-4+結(jié)果顯示:2組Ⅲ期胃癌CD4+IFN-γ+均較健康對(duì)照組降低(|t|=4.19,P=0.002<0.05),且彼此間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(|t|=3.92,P=0.228>0.05)。經(jīng)過(guò)治療后2組Ⅲ期胃癌患者CD4+IFN-γ+細(xì)胞百分率均有所提升,但仍低于健康對(duì)照組(|t|=2.71,P=0.03<0.05),其中觀(guān)察組治療后CD4+IFN-γ+細(xì)胞百分率提高的幅度明顯高于對(duì)照組(|t|=5.18,P=0.016<0.05)。2組Ⅲ期胃癌患者治療前后CD4+IL-4-γ+細(xì)胞百分率均與健康對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。經(jīng)過(guò)治療干預(yù)后Th1/Th2比值有所升高,其中觀(guān)察組升高的趨勢(shì)更明顯,具體見(jiàn)圖2、圖3。

圖2　3組CD4+IFN-γ+細(xì)胞百分率變化

圖3　3組CD4+IL-4+細(xì)胞百分率變化

3討論

化療是目前治療Ⅲ期胃癌術(shù)后的主要治療方式,但是化療藥物均具有明顯的不良反應(yīng),如骨髓抑制、外周神經(jīng)毒性等,甚至可導(dǎo)致心腦血管事件發(fā)生,故部分患者因無(wú)法耐受不良反應(yīng)而放棄化療甚至加速死亡[2-4],因此我們認(rèn)為尋求可行的胃癌術(shù)后輔助治療方案具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,化療藥物容易傷津耗氣,對(duì)機(jī)體的氣血、津液及五臟六腑均具有影響。黃芪屬于中藥經(jīng)典的“補(bǔ)藥”,屬于“補(bǔ)藥之長(zhǎng)”,具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、益衛(wèi)固表、托毒生肌、利水消腫等功效,其有效成分黃芪總苷在體內(nèi)動(dòng)物模型[5]實(shí)驗(yàn)中具有逆轉(zhuǎn)免疫抑制作用,因此被視為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。根據(jù)目前臨床研究得知,免疫失調(diào)是腫瘤的主要病理特征之一,病原體持續(xù)刺激下CD4+T細(xì)胞分化成調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞兩類(lèi),介導(dǎo)機(jī)體的免疫,同時(shí)還調(diào)控炎性反應(yīng)的過(guò)程。正常機(jī)體Th1/Th2處于動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài),兩類(lèi)Th細(xì)胞通過(guò)刺激分泌不同的細(xì)胞因子,形成一個(gè)龐大的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò),彼此交叉應(yīng)答又相互制約。Th1及其相關(guān)細(xì)胞因子可對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性而發(fā)揮殺傷作用,同時(shí)介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答,當(dāng)Th1表達(dá)上調(diào)時(shí)細(xì)胞免疫應(yīng)答處于明顯優(yōu)勢(shì),影響了機(jī)體的體液免疫應(yīng)答。Th2及其主要表達(dá)的細(xì)胞因子通過(guò)促進(jìn)機(jī)體抗體的生成而介導(dǎo)體液免疫,當(dāng)Th2處于優(yōu)勢(shì)時(shí)體液免疫較細(xì)胞免疫強(qiáng)勢(shì),從而抑制了Thl細(xì)胞應(yīng)答,導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸。因此當(dāng)表達(dá)優(yōu)勢(shì)偏重于Th1或Th2時(shí)成為T(mén)h1/Th2漂移,Th1/Th2漂移的出現(xiàn)可促發(fā)腫瘤細(xì)胞逃逸機(jī)體免疫的監(jiān)視,從而導(dǎo)致病情發(fā)展惡化[6-14]。

本研究通過(guò)流式檢測(cè)手段發(fā)現(xiàn)外周血Th1細(xì)胞百分率明顯較健康對(duì)照組下降,而Th2濃度表達(dá)并未發(fā)生明顯改變,Th1/Th2比值明顯下調(diào),提示了中晚期宮頸癌患者外周血中有Th1介導(dǎo)的細(xì)胞免疫受到明顯抑制,Th1表達(dá)的偏移可能是宮頸癌患者機(jī)體腫瘤細(xì)胞逃逸免疫抑制的機(jī)制之一。同時(shí)有學(xué)者發(fā)現(xiàn)胃癌組織中Th1表達(dá)變化不明顯,Th1/Th2比值并未發(fā)生改變,這說(shuō)明腫瘤逃逸現(xiàn)象在外周血表現(xiàn)的更為活躍,外周血發(fā)揮的抗腫瘤免疫明顯較微弱。有研究顯示當(dāng)腫瘤患者體內(nèi)Th2細(xì)胞逐漸向Th1細(xì)胞轉(zhuǎn)化后集體對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒殺作用增強(qiáng),同時(shí)降低了患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率,這就說(shuō)明了Th1/Th2比值的檢測(cè)是觀(guān)察腫瘤發(fā)展動(dòng)向的良好指標(biāo)。研究中我們對(duì)Ⅲ期胃癌術(shù)后患者進(jìn)行治療干預(yù),發(fā)現(xiàn)2種干預(yù)手段患者Th1細(xì)胞百分率均有所上調(diào),因此Th1/Th2比值均有改善,其中聯(lián)合使用深度熱療的患者改善更為明顯,因此我們認(rèn)為黃芪注射液的介入可調(diào)整Th1/Th2,促使其恢復(fù)Th1/Th2的表達(dá)平衡。

總之,我們認(rèn)為在黃芪注射液可明顯改善Ⅲ期胃癌術(shù)后患者的生活質(zhì)量,其機(jī)制可能與提高機(jī)體免疫防御作用有關(guān)。

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(2015-12-21收稿責(zé)任編輯：王明)

The Effect of Huangqi Injection on Stage III Gastric Carcinoma and its Function on Body's Immunity

Zhao Weimin,Liu Lin,Fang Fa,Yang Xinhui,Wang Haijiang

(GastrointestinalSurgeryDepartmentofTumorHospitalaffiliatedtoXinjinagMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

AbstractObjective:To observe the curative effect of Huangqi injection on stage III gastric cancer and its effects on the body's immune function.Methods:A total of 60 patients in stage III gastric carcinoma admitted in our hospital during January 2009 to January 2014 were randomly divided into the control group and the observation group.Also,30 cases of healthy people were recruited as healthy control group.Both of the two groups had received radical operation and took the conventional EOF scheme chemotherapy after surgery.The observation group was given Huangqi injection 30 mL with 250 mL 0.9% sodium chloride solution by intravenous drip on the basis of conventional treatment,1 time/ day,20 days.After treatment,compared the two groups in the aspects of quality of life (Karnofsky score),peripheral blood mononuclear cells,and the accumulative survival rate.Detected the peripheral blood Th1,Th2,and the cell percentage change of the three groups.Results:1) Huangqi injection could obviously increase the quality of life in the patients in stage III gastric cancer,and simultaneously increase the accumulative survival rate of the patients.2) Th1/Th2 ratio in the patients with gastric cancer was significantly lower than that of the healthy control group.However,Th1/Th2 ratio of the two groups both decreased after treatment,and the descending trend in the observation group was more obvious (P<0.05).Conclusion:For patients in stage III gastric carcinoma,CD4+T cells are abnormal and Huangqi injection can improve the quality of the patients' life by regulating the levels of CD4+T cells.

Key WordsStage III gastric carcinoma; Huangqi injection; Th1/Th2 ratio

基金項(xiàng)目:新疆衛(wèi)生廳醫(yī)療衛(wèi)生科研計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2010075)

作者簡(jiǎn)介:趙為民(1973.03—),男,研究生,副主任醫(yī)師,研究方向:胃腸腫瘤的診治,E-mail:misa2007@126.com 通信作者:王海江(1963.01—),男,博士,主任醫(yī)師,博士研究生導(dǎo)師,研究方向:胃腸腫瘤的診治,E-mail:doctor677@163.com

中圖分類(lèi)號(hào)：R273

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.06.011