王菲++李向飛++李鵬飛

摘要：研究了團頭魴幼魚飼料中維生素B2的最適需求量及維生素B2水平對團頭魴幼魚生長性能、體組成、抗氧化功能和腸道消化酶活性的影響。試驗采用單因子濃度梯度法，將魚隨機分為6組，投喂不同水平的維生素B2，分別為166、2.83、4.29、6.15、8.37、11.28 mg/kg的半純合飼料，每日3次，飽食投喂12周。結果表明，飼料中維生素B2水平對團頭魴幼魚餌料系數(shù)、存活率和形體指標均無顯著影響。當飼料中維生素B2水平從1.66 mg/kg升至 6.15 mg/kg 時，團頭魴幼魚的增質量率和特定生長率均顯著增加；當維生素水平進一步升高時，則顯著下降。飼料中維生素B2水平對團頭魴幼魚全魚的水分、粗蛋白和粗灰分水平均無顯著影響。團頭魴幼魚全魚粗脂肪水平在飼料中維生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg時則顯著升高；當維生素B2水平進一步升高時，則顯著下降。當飼料中維生素B2水平從1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg時，團頭魴幼魚肝臟中超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性和還原型谷胱甘肽的含量，以及腸道淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性均顯著升高，當維生素B2水平進一步升高時，則顯著下降；丙二醛含量變化趨勢則與之相反。根據(jù)團頭魴幼魚增質量率、肝臟維生素B2沉積量和肝臟D-AAO活性進行回歸分析結果，團頭魴幼魚飼料中維生素B2最適添加量分別為5.21、4.65、6.02 mg/kg。

關鍵詞：團頭魴；維生素B2；生長性能；體組成；抗氧化；腸道酶活性

中圖分類號： S963.73+1文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2016）05-0319-05

維生素B2，又稱核黃素，是動物必需的水溶性維生素之一，參與機體內氧化還原反應、細胞代謝和呼吸鏈反應[1]。研究表明，魚類缺乏維生素B2一般會呈現(xiàn)食欲減退和生長緩慢的癥狀[2]。鮭屬魚類缺乏維生素B2時，除了生長緩慢，眼睛還會出現(xiàn)畏光、白內障、出血及角膜新生血管等癥狀[3-5]，大鱗大麻哈魚（Oncorhynchus tshawytscha）、虹鱒（Salmo gairdneri）還會出現(xiàn)體色變深和身體平衡失調等情況[4，6]；然而，Woodward在虹鱒幼魚缺乏維生素B2試驗中并未發(fā)現(xiàn)以上癥狀，但缺乏維生素B2的幼魚卻表現(xiàn)出嚴重的鰭部侵蝕、體色變淺和高死亡率的情況[7]。此外，同種魚類維生素B2的缺乏亦有不同表癥。例如，斑點叉尾（Ietalurus punetaus） 缺乏維生素B2時會出現(xiàn)單側或2側的白內障[8]，Murai等發(fā)現(xiàn)維生素B2的缺乏僅會導致斑點叉尾生長遲緩和體長變短[9]。研究表明，維生素B2缺乏癥具有明顯的特異性，且與魚類的種類、生長階段、環(huán)境、食性等有著密切的聯(lián)系。魚類飼料原料中的維生素B2水平并不能滿足魚類生長的需要，必須額外添加一定量的維生素B2進行補充[1-2]，充分說明維生素B2對魚類生長的必要性。

Chen等發(fā)現(xiàn)，缺乏維生素B2會削弱草魚（Ctenopharyngodon idella）幼魚鰓部的抗氧化能力[10]；Yates等研究表明，維生素B2可提高大鼠（Rattus norvegicus）的胃腸道功能[11]；Li等也在對建鯉（Cyprinus carpio var. Jian）的研究中得出，飼料中添加維生素B2會促進其幼魚消化能力的增強[12]。前人研究指出，魚類的生長和其抗氧化功能及腸道酶活性密切相關[10，13]，目前，尚未有文獻直接指明飼料維生素B2水平與團頭魴（Megalobrama amblycephala）幼魚抗氧化功能和腸道酶活性的關系，因此本試驗開展團頭魴幼魚營養(yǎng)需求相關方面的研究。

團頭魴是中國重要的草食性淡水經濟魚類[14]。近年來，團頭魴的養(yǎng)殖量迅速增長[15]，但針對團頭魴營養(yǎng)需求的研究還很有限。目前，團頭魴的營養(yǎng)需求研究主要集中在三大營養(yǎng)物質、氨基酸和脂溶性維生素等方面[16-20]，而水溶性維生素的研究尚較缺乏。本試驗著重探討了團頭魴幼魚的適宜維生素B2需求量及其對魚體抗氧化功能和腸道酶活性的影響，以期為團頭魴維生素營養(yǎng)需求資料的完善提供理論基礎，并為營養(yǎng)飼料配方提供科學依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗飼料

本試驗采用單因子設計，配制6組半純合飼料，分別添加維生素B2水平為0、2、4、6、8、10 mg/kg[12]（飼料中維生素B2實際水平為1.66、2.83、4.29、6.15、8.37、11.28 mg/kg）。試驗飼料以進口的秘魯魚粉、酪蛋白和明膠為蛋白源，以豆油和魚油為脂肪源（按照1 ∶1的比例添加），以玉米淀粉為糖源，以微晶纖維素作為填充物，以羧甲基纖維素鈉為黏結劑[14]。飼料原料先粉碎，按照配方稱重后將各原料逐級均勻混合，充分混合后加入一定量的水再混合，然后用小型制粒機加工成粒徑為2 mm左右的顆粒飼料，常溫風干后置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆肹14，16，18]。飼料組成及營養(yǎng)成分見表1。

1.2試驗團頭魴及養(yǎng)殖管理

試驗魚養(yǎng)殖于南京農業(yè)大學浦口試驗基地室內流水系統(tǒng)中，馴化14 d，其間投喂不含維生素B2的基礎飼料，馴化后挑選體格健壯、規(guī)格整齊、體質量為（41.52±0.15）g的幼魚288尾，隨機分成6組，每組4個重復，每個重復12尾。每日飽食投喂3次（時間分別在07：30、11：30、16：30），養(yǎng)殖期為12周。試驗期間，全程微流水循環(huán)（1.5 L/min），水溫控制在 25～30 ℃，pH值為7.0～7.5，全天24 h充氧。

1.3指標測定方法

1.3.1生產性能統(tǒng)計和樣本采集養(yǎng)殖結束后，將魚饑餓24 h采樣。統(tǒng)計每缸的尾數(shù)并稱總質量，從中隨機取出6尾魚逐尾稱質量和測量體長，其中2尾魚冰凍保存用以測定全魚體組成，另外4尾魚置于冰盤上解剖，取出內臟團稱質量。然后，分離出肝臟，用預冷的0.85%生理鹽水清洗，用濾紙吸干并稱質量，將其置于-70 ℃冷凍保存，用于抗氧化功能的測定；取腸道中段，并用生理鹽水沖洗腸道內部清除內容物，將其置于-70 ℃冷凍保存，用于腸道酶活性的測定。

生產性能的計算公式如下：

增質量率（WGR）=（mt-m0）/m0×100%；

特定生長率（%/d）=[ln（mt）-ln（m0）]/t×100%；

餌料系數(shù)（FCR）=F/（mt-m0）；

肥滿度（CF）=mt（g）/體長3（cm3）×100%；

肝體比（HSI）=肝臟質量（g）/全魚質量（g）×100%；

臟體比（VSI）=內臟質量（g）/全魚質量（g）×100%；

成活率（SR）=試驗結束時總尾數(shù)/試驗開始時總尾數(shù)×100%。

式中：m0為魚體初質量，g；mt為魚體末質量，g；F為攝食量，g；t為飼養(yǎng)天數(shù)，d。

1.3.2樣品測定飼料原料和團頭魴幼魚全魚概略養(yǎng)分測定參考AOAC的方法[21]。將飼料和全魚稱質量后置于培養(yǎng)皿中，在（105±2） ℃的烘箱中烘至恒質量測定水分水平。粗蛋白（N×6.25）水平采用全自動凱氏定氮儀（FOSS KT260，瑞士）測定；粗脂肪水平采用索氏抽提法測定（2050；FOSS Tector）；將樣品置于電爐上炭化后，在馬福爐中于（550±20） ℃ 下灼燒5 h后測得飼料和全魚中粗灰分水平；飼料總能采用氧彈測熱儀（Parr 1281，美國）測定。

飼料及團頭魴幼魚肝臟中維生素B2水平參考Callmer等的方法[22]測定。肝臟組織勻漿液的制備及酶活性的測定：將肝臟準確稱質量，以1 ∶4（組織 ∶生理鹽水）的比例加入預冷的生理鹽水后冰浴勻漿，然后于3 000 r/min離心10 min，收集上清液并存放于4 ℃冰箱。待測肝臟D-氨基酸氧化酶（D-amino acid oxidation，D-AAO）活性參考Woodward的方法[23]進行測定。肝臟超氧化物歧化酶（SOD）活性按照Jin等描述的方法[24]測定；還原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平參照Zhang等的方法測定[25]；過氧化氫酶（CAT）活性測定參考Jiang等的方法測定[26]。

腸道組織勻漿液的制備及酶活性的測定：將腸道準確稱質量，按1 ∶9（組織 ∶生理鹽水）加入預冷生理鹽水后冰浴勻漿，制成20%組織勻漿，然后于3 000 r/min離心10 min，收集上清液并存放于4 ℃冰箱。腸道蛋白酶采用福林-酚法[27]測定；淀粉酶和脂肪酶活性參考Furné等的方法[28]測定。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件分析，結果以“平均值±標準誤”表示。先進行單因素方差分析，采用Tukey氏法做多重比較分析組間差異顯著程度，顯著水平設定為P<0.05。

2結果與分析

2.1飼料維生素B2水平對團頭魴幼魚生長性能和形體指標的影響

飼料中維生素B2水平量對團頭魴幼魚餌料系數(shù)、存活率和形體指標均無顯著影響（表2）。當飼料中維生素B2水平從1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg時，團頭魴幼魚的增質量率和特定生長率均顯著增加；而當維生素水平進一步升高時，又顯著下降。以飼料中維生素B2水平為橫坐標，團頭魴幼魚增質量率為縱坐標進行雙折線回歸分析，得出y=4.032 7x+64.532（r=0.978 0）和y=-0.643 2x+88.905（r=0.943 2） 2個方程式。對其求解，得出當飼料中維生素B2水平為 5.21 mg/kg 時，團頭魴幼魚有最大增質量率（圖1）。

2.2飼料維生素B2水平對團頭魴幼魚肝臟維生素B2沉積量和D-氨基酸氧化酶活性的影響當飼料中維生素B2水平由1.66 mg/kg升至8.37 mg/kg時，團頭魴幼魚肝臟中維生素B2沉積量顯著增加；當維生素B2水平進一步升高時，則無顯著差異。飼料中維生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg時，團頭魴幼魚肝臟D-AAO 活性顯著增加；當維生素B2水平進一步升高時，則顯著下降（表3）。

2.3飼料維生素B2水平對團頭魴幼魚全魚體組成的影響

飼料中維生素B2水平對團頭魴幼魚全魚的水分、粗蛋白和粗灰分均無顯著影響（表4）。當飼料中維生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg時，團頭魴幼魚全魚粗脂肪含量顯著增加；當維生素B2水平進一步增加時，則顯著下降。

2.4飼料維生素B2水平對團頭魴幼魚肝臟抗氧化功能的影響

當飼料中維生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg時，團頭魴幼魚肝臟中超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽和過表4不同維生素B2水平對團頭魴幼魚全魚組成的影響

維生素B2水平氧化氫酶都顯著升高；當維生素B2水平進一步升高時，則顯著下降。飼料中維生素B2水平由1.66 mg/kg升至 2.83 mg/kg 時，團頭魴幼魚肝臟丙二醛含量顯著降低；當維生素B2水平進一步升高時，則差異不顯著（表5）。

2.5飼料維生素B2水平對團頭魴幼魚腸道消化酶活性的影響

飼料中維生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg時，團頭魴幼魚腸道蛋白酶活性顯著升高，當維生素B2水平進一步升高時，則差異不顯著；飼料中維生素B2水平由1.66 mg/kg 升至6.15 mg/kg時，團頭魴幼魚腸道淀粉酶和脂肪酶活性顯著升高，當維生素B2水平進一步升高時，淀粉酶活性則差異不顯著，而脂肪酶活性顯著下降（表6）。

3討論與結論

3.1飼料維生素B2最適需求量

根據(jù)前人研究，有些魚類缺乏維生素B2會出現(xiàn)眼球出血、畏光等情況[3-5]。Deng等飼喂肉食性魚類雜交鱸（Morone chrysops ♀ × Morone saxatilis ♂） 8周試驗中，出現(xiàn)上述缺乏癥[1]。而本試驗中，團頭魴幼魚卻并未出現(xiàn)此種癥狀。這可能是由于養(yǎng)殖試驗環(huán)境、周期、魚的種類和食性不同所致[1，12]。魚類缺乏維生素B2最為普遍的癥狀便是生長減緩[3-6]，與本試驗結果一致。當飼料中維生素B2水平是1.66 mg/kg 時，團頭魴幼魚末質量、增質量率和特定生長率均最小，與維生素B2水平較多的處理組相比有顯著差異；當維生素B2水平達到6.15 mg/kg時，末質量、增質量率和特定生長率達到最大值，這可能是由于在此條件下，團頭魴幼魚有較高腸道消化酶活性，從而提高其對飼料的利用率[29]。根據(jù)團頭魴幼魚增質量率和飼料中維生素B2水平進行回歸分析，得出團頭魴幼魚維生素B2最適需求量為5.21 mg/kg，比建鯉維生素B2最適需求量4.22 mg/kg[12]偏大，這可能是因為其試驗采用的建鯉幼魚初質量在23.39 g左右，比本試驗所用的團頭魴幼魚小，而小魚對于維生素B2的缺乏較為敏感[1]。

肝臟維生素B2的沉積量也是衡量魚類維生素B2需求量的一個重要指標[30]。通過對團頭魴幼魚肝臟維生素B2沉積量進行回歸分析，飼料中維生素B2最適添加量為 4.65 mg/kg，與Halver在鮭魚6～8 mg/kg[30]和Amezaga在虹鱒4.4～11.4 mg/kg[31]中所得的結果有所差別，這可能是由于魚的種類不同導致肝臟維生素B2沉積量的差異，同時也證明了維生素B2并不會在肝臟中累積。除此之外，Woodward在針對虹鱒的試驗中表明，D-AAO活性是衡量其維生素B2需求量一個更為敏感穩(wěn)定的指標[32]，該論斷也在本試驗中得到驗證。以肝臟D-AAO活性為考量進行回歸分析，得出團頭魴幼魚飼料中維生素B2最適添加量為6.02 mg/kg，與 Serrini 在斑點叉尾研究中所得最適需求量為6 mg/kg結果[33]基本一致，表明團頭魴幼魚維持生理需求的維生素B2水平高于正常生長需要水平。

生產實踐中一般推薦以增質量率為指標，回歸分析所得最適需求量作為考量，但鑒于魚類對維生素B2的需求量與很多環(huán)境因素相關[1，14]，且日糧中合理的原料配比可以降低其對維生素B2的需求量[32]，所以試驗所得數(shù)據(jù)若要應用于生產，應仔細考慮生產實踐與試驗條件的差異，并進行合理調整。

3.2飼料維生素B2水平對團頭魴幼魚全魚體組成的影響

本試驗結果表明，飼料中維生素添加量對團頭魴幼魚全魚水分、蛋白質和灰分均無顯著影響。根據(jù)以往的研究可知該結果是合理的，魚類全魚體組成中，粗蛋白和粗灰分水平與日糧組成并無直接聯(lián)系，而與其年齡與規(guī)格有關[34-35]。當飼料中維生素B2水平由1.66 mg/kg升至6.15 mg/kg時，團頭魴幼魚全魚粗脂肪水平顯著增加，當維生素B2水平進一步增加時，則又呈顯著下降趨勢，這也與Li等在草魚中所得結果[12]一致。由前人研究可知，維生素B2確實與機體脂肪代謝相關[2]，但其粗脂肪水平的變化是否因為維生素B2水平變化而直接引起的還有待進一步研究。

3.3飼料維生素B2水平對團頭魴幼魚肝臟抗氧化功能的影響

機體在呼吸和細胞代謝過程中會產生氧自由基，當氧自由基及代謝過程副產物過量時，機體會出現(xiàn)不同程度的氧化損傷[14，36]，及時清除過量的自由基可以降低機體氧化損傷的程度。本試驗中當維生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg 時，肝臟MDA含量顯著下降，當維生素B2水平進一步上升時，則差異不顯著。表明維生素B2水平的升高可以在一定范圍內減弱魚體遭受自由基攻擊的程度，減輕魚體的氧化應激損傷[36-38]。當維生素B2水平由1.66 mg/kg升至4.29 mg/kg時，肝臟SOD、CAT活性和GSH含量均呈上升趨勢，并與對照組差異顯著；而當維生素B2水平進一步升高時，則差異不顯著。表明維生素B2水平的升高可以促使CAT活性提高，使之能更好地消除體內過多的過氧化氫，避免多余自由基的產生，從而使細胞免受過氧化損傷；促使SOD和GSH清除自由基的能力增強，減弱自由基對魚體的脅迫程度[36-38]。因此，在飼料中適當升高維生素B2水平可以降低MDA含量，提高SOD、CAT活性，增加GSH含量，進而提高團頭魴幼魚的抗氧化功能。

3.4飼料維生素B2水平對團頭魴幼魚腸道消化功能的影響

腸道是魚類進行消化吸收的主要場所，尤其對無胃魚類來說[12，38]，腸道消化酶參與細胞腔消化，可在一定程度上反映魚類的消化能力，對魚類生長起著重要作用[12，29]。本試驗中隨著維生素B2水平的升高，團頭魴幼魚腸道淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性也顯著增加，但當維生素B2水平進一步升高時，淀粉酶和蛋白酶活性無顯著差異，表明維生素B2可以在一定范圍內提高團頭魴腸道消化酶的活性，從而增強其對營養(yǎng)物質的消化，增加其消化功能，這與Li等對建鯉的研究結果[12]一致。本試驗中腸道酶活性較高的組也有較好的增質量率，進一步證明腸道酶活性對魚類生長起重要作用[29]。

綜上所述，分別根據(jù)團頭魴幼魚增質量率、肝臟維生素B2沉積量和肝臟D-AAO活性進行回歸分析，飼料中維生素B2最適添加水平分別為5.21、4.65、6.02 mg/kg，并且在一定范圍內添加飼料中維生素B2水平可以顯著提高團頭魴幼魚的抗氧化能力，增強腸道消化功能。

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