馬寶林，林吳用Δ，高麗麗

(1.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院 神經(jīng)外科，福建 廈門 361022；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，福建 福州 350108)

依達(dá)拉奉對(duì)大鼠腦出血后腦水腫及脂質(zhì)過(guò)氧化的影響

馬寶林1，林吳用1Δ，高麗麗2

(1.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院 神經(jīng)外科，福建 廈門 361022；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，福建 福州 350108)

目的 探討依達(dá)拉奉對(duì)大鼠腦出血后腦水腫及腦組織氧化損害的影響。方法 選取健康雄性清潔的SD大鼠150只,隨機(jī)分為假手術(shù)組、對(duì)照組、治療組，每組50只，分別于術(shù)后0.5、1、2、3、4 d 5個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)每組中不同10只進(jìn)行觀察。采用立體定向自體血注入法制作大鼠腦出血模型，檢測(cè)3組并比較各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量變化、丙二醛(MDA)含量變化及超氧化物歧化酶活力情況。結(jié)果 假手術(shù)組和治療組術(shù)后1～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；對(duì)照組在術(shù)后2 d腦水腫達(dá)到最高值；假手術(shù)組、治療組術(shù)后0.5～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織MDA含量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；假手術(shù)組、治療組術(shù)后0.5～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織SOD活力均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論 依達(dá)拉奉能明顯改善腦出血大鼠血腫周圍腦組織水腫，減輕腦出血大鼠腦組織氧化損害。

依達(dá)拉奉；腦出血；丙二醛；超氧化物歧化酶

近年來(lái)腦出血成為危害人們健康的常見(jiàn)疾病之一，其發(fā)病率極高，占我國(guó)急性腦血管病的三分之一左右，且病死率較高[1-2]。腦水腫是腦出血后重要的病理生理改變之一，且在一定時(shí)間內(nèi)是可逆的，在此時(shí)間內(nèi)進(jìn)行有效治療能使受損腦組織恢復(fù)功能。丙二醛是氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，其水平變化可間接反應(yīng)組織中氧自由基水平變化。超氧化物歧化酶是一種金屬酶，廣泛存在于生物體內(nèi)，是機(jī)體內(nèi)的氧自由基清除劑，代表機(jī)體抵抗、清除自由基的能力。依達(dá)拉奉是一種新型的抗氧化劑，具有清除自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用，因此，可以減輕腦水腫和腦組織損傷[3-4]。有文獻(xiàn)報(bào)道，少量依達(dá)拉奉治療腦出血療效較好[5-6]。因此，本研究通過(guò)立體定向自體血注入法制作腦出血模型，對(duì)比檢測(cè)依達(dá)拉奉治療各時(shí)間點(diǎn)的血腫周圍腦組織含水量變化、丙二醛含量變化及超氧化物歧化酶活力情況，分析探討依達(dá)拉奉對(duì)腦出血后腦組織氧化損害的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取由廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的健康雄性清潔的SD大鼠150只，體質(zhì)量250 g。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組：隨機(jī)均分為3組，假手術(shù)組、腦出血對(duì)照組和腦出血治療組，每組50只，分別于術(shù)后0.5、1、2、3、4 d 5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，對(duì)每組中不同10只進(jìn)行觀察。

1.2.2 腦出血模型制作：采用立體定向自體血注入法造模[7]。步驟如下：①將大鼠頭部固定在腦立體定向儀上，用3.3 mL/kg的水合氯醛0.825 mL腹腔麻醉；②頂部中線皮膚切1 cm口，然后在前囟前0.2 mm，右側(cè)旁開(kāi)中線3 mm處鉆孔；③在尾動(dòng)脈吸取新鮮血液70μL左右，迅速插入已開(kāi)鉆孔內(nèi)；④3min完成50μL的血入腦，防止血液流出需留針5 min，然后用骨蠟封閉顱骨上的鉆孔，縫合切口并消毒；⑤假手術(shù)組除不注入血液外，操作同上。

模型成功判斷標(biāo)準(zhǔn)：按Bederson[8]的評(píng)定方法，提起尾巴，正常側(cè)前肢向地面伸展，癱瘓側(cè)前肢回收屈曲于腹下或向癱瘓側(cè)推大鼠時(shí)大鼠向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn)。

1.2.3 治療方法：假手術(shù)組：造模手術(shù)過(guò)程不注入自體血，造模后立即尾靜脈注射3 mg/kg的氯化鈉溶液0.75 mg，1天1次；對(duì)照組：造模手術(shù)過(guò)程注入自體血50 μL，造模后立即尾靜脈注射3 mg/kg的氯化鈉溶液0.75 mg，1天1次；治療組：造模手術(shù)過(guò)程注入自體血，造模后立即尾靜脈注射3 mg/kg的依達(dá)拉奉0.75 mg，1天1次。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo)[9]：①腦組織含水量：大鼠死后開(kāi)顱取腦，在出血處部位稱取0.1 g濕重腦組織，置于45 ℃烘箱中烘烤，稱干重，公式：腦含水量=(濕重-干重)/濕重×100%；②MDA含量：取近病灶處腦組織0.5 g，用氯化鈉溶液制成體積分?jǐn)?shù)10%的組織勻漿，取上清液用比色法測(cè)定腦組織MDA含量；③SOD活性：取近病灶處腦組織0.5 g，用氯化鈉溶液制成體積分?jǐn)?shù)10%的組織勻漿，取上清液用比色法測(cè)定腦組織SOD活性。

比色法：采用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供DAB顯色劑，南京建成生物工程研究所提供的MDA測(cè)定試劑盒、SOD試劑盒對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)試，不同量的樣品溶液在完全相同的一組比色管中，配成顏色逐漸遞變的標(biāo)準(zhǔn)色階。標(biāo)準(zhǔn)溶液在完全相同條件下顯色，和標(biāo)準(zhǔn)色階作比較，目視找出色澤最相近的作為標(biāo)準(zhǔn)，由其中所含標(biāo)準(zhǔn)溶液的量，計(jì)算確定試樣中待測(cè)組分的含量。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠腦出血后腦組織含水量比較 假手術(shù)組和治療組術(shù)后1～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；對(duì)照組在術(shù)后2 d腦水腫達(dá)到最高值。見(jiàn)表1。

表1 3組腦出血后腦組織含水量比較Tab.1 Comparison of the water content of the brain tissue around the hematoma in 3 groups(±s,%)

*P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.2 3組大鼠血腫周圍腦組織MDA含量比較 假手術(shù)組和治療組術(shù)后0.5～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織MDA含量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 3組MDA含量比較Tab.2 Comparison of MDA content in 3 groups(±s,μmol/L)

*P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.3 3組大鼠血腫周圍腦組織SOD活性比較 假手術(shù)組和治療組術(shù)后0.5～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織SOD活力均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 3組SOD活性比較Tab.3 Comparison of SOD activity in 3 groups(±s)

*P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

3 討論

腦水腫是腦出血后重要的病理生理改變，嚴(yán)重可導(dǎo)致腦出血病情加重或死亡，有實(shí)驗(yàn)顯示腦出血后自由基反應(yīng)加劇、氧化-抗氧化失衡[10]。丙二醛水平變化可間接反應(yīng)組織中氧自由基水平變化和氧化損傷程度。超氧化物歧化酶代表機(jī)體抵抗、清除自由基的能力，當(dāng)氧自由基短期內(nèi)大量生成，SOD在反應(yīng)中被消耗，其活性會(huì)有所下降[11]。依達(dá)拉奉作為一種新型自由基清除劑，具有清除自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用，臨床上常用于缺血性腦血管疾病的治療，對(duì)腦出血后腦水腫療效報(bào)道較少[12]。

為進(jìn)一步分析氧化反應(yīng)與腦出血損傷機(jī)制，本研究采用比色法測(cè)定腦組織丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性的變化。結(jié)果顯示，假手術(shù)組術(shù)后1～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；說(shuō)明大鼠腦出血后血腫周圍組織存在明顯腦水腫，且在術(shù)后2 d腦水腫達(dá)到最高值[13]；假手術(shù)組術(shù)后0.5～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織MDA含量明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；假手術(shù)組術(shù)后0.5～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織SOD活力明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明腦出血后血腫周圍腦組織氧化-抗氧化失衡，產(chǎn)生大量自由基，清除自由基系統(tǒng)受到消耗[14]?？赡苁怯捎谀X損傷區(qū)的炎癥反應(yīng)，激活了浸潤(rùn)于病灶的白細(xì)胞，其吞噬作用產(chǎn)生大量的超氧陰離子等氧自由基[15]。自由基又可引起細(xì)胞損傷造成腦細(xì)胞水腫，進(jìn)一步加重腦水腫[16]。所以應(yīng)用自由基清除劑可減少自由基，從而減輕腦水腫，對(duì)腦出血后腦損傷起一定保護(hù)作用[17]。

依達(dá)拉奉是一種合成的自由基清除劑，靜脈給藥后可清除腦內(nèi)具有高度細(xì)胞毒性的羥基基團(tuán)，改善腦水腫[18]。本研究顯示，治療組術(shù)后1～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織含水量明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明依達(dá)拉奉提高自由基清除能力，減輕了腦水腫；治療組術(shù)后0.5～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織MDA含量明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，治療組術(shù)后0.5～4 d各時(shí)間點(diǎn)血腫周圍腦組織SOD活力均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明使用依達(dá)拉奉治療后，減少了腦出血后血腫周圍腦組織MDA含量，升高了SOD活力?？赡茉蚴且肋_(dá)拉奉能抑制浸潤(rùn)于病灶部位的白細(xì)胞激活，減少炎癥白細(xì)胞的生成，抑制黃嘌呤氧化酶的活性，減弱白細(xì)胞吞噬作用產(chǎn)生的等氧自由基，從而降低羥自由基的濃度，改善腦水腫，保護(hù)腦出血后腦損傷[19]。

綜上所述，自由基與腦出血后腦水腫形成關(guān)系密切，依達(dá)拉奉治療腦出血大鼠使氧化損害效果明顯，對(duì)腦出血后腦水腫形成有明顯的抑制作用，其治療時(shí)間窗在1 d以內(nèi)，并延續(xù)1 w左右，可能作為治療腦出血后腦水腫的一個(gè)臨床治療方法。

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(編校：苗加會(huì))

Effect of edaravone on cerebral edema and lipid peroxidation in rats of cerebral hemorrhage

MA Bao-lin1, LIN Wu-yong1Δ, GAO Li-Li2

(1.Department of Neurosurgery, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361022, China; 2.Department of Neurology,The second people’s Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350108, China)

ObjectiveTo discusse the effect of edaravone for brain tissue oxidative damage after cerebral hemorrhage through observing the hemorrhage rats back edema and the change of lipid peroxidation.Methods150 healthy and clean male SD rats,were randomly divided to sham operation group,control group,treatment group,50 cases in each group,each group choose five time points,post operative 0.5 day,1 day,2 days,3 days,4 days,observed different 10 rats at each time point.The intracerebral hemorrhage model was made by using the method of stereotactic autologous blood injection.The changes of water content,the content of MDA and the activity of superoxide dismutase were monitored in three groups at different time points.ResultsSurrounding the hematoma in the brain tissue around the hematoma after intracerebral hemorrhage in sham operation group,treatment group of postoperative day 1-4 days each time hematoma surrounding brain tissue water content was significantly lower than that in control group(P<0.05);Control group after 2 days of cerebral edema and reached the highest value;Sham operation group and treatment group of postoperative half of the day to 4 days each time the content of MDA were significantly lower than in control group(P<0.05);Sham operation group and treatment group postoperative half of the day to 4 days each time the brain tissue SOD activity was significantly higher than control group(P<0.05).ConclusionThe effect is obvious that edaravone for cerebral hemorrhage rats brain tissue around hematoma edema,reduce cerebral hemorrhage rat tissue oxidative damage.

Edaravone;cerebral hemorrhage;malondialdehyde;superoxide dismutase

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.08.008

福建省醫(yī)學(xué)創(chuàng)新課題項(xiàng)目(2015-1-85)

馬寶林，男，本科，主任醫(yī)師，研究方向：顱腦損傷，E-mail：690334748@qq.com；林吳用，通信作者，男，本科，主治醫(yī)師，研究方向：顱腦損傷，E-mail：3197234871@qq.com。

R743.34

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