不同卵巢腫瘤組織中KI-67、P53、C23、EGFR蛋白的表達變化及其意義

張玨，蔡鴻寧，高晗，鄒苗，吳緒峰

(湖北省婦幼保健院，武漢430070)

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不同卵巢腫瘤組織中KI-67、P53、C23、EGFR蛋白的表達變化及其意義

張玨，蔡鴻寧，高晗，鄒苗，吳緒峰

(湖北省婦幼保健院，武漢430070)

目的觀察不同卵巢腫瘤組織中Ki-67核抗原(Ki-67)、野生型P53抑癌基因(P53)、核仁蛋白(C23)、血管內(nèi)皮生長因子受體(EGFR)蛋白的表達變化，并探討其意義。方法 行手術(shù)治療的卵巢腫瘤患者139例，其中卵巢良性腫瘤46例、卵巢交界性腫瘤35例、卵巢癌58例，術(shù)中留取腫瘤組織及正常卵巢組織，采用免疫組化法檢測Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白。結(jié)果正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、卵巢交界性腫瘤組織、卵巢癌組織中Ki-67蛋白陽性表達率分別為0、11.1%、74.5%、88.5%，P53蛋白陽性表達率分別為0、2.2%、28.6%、72.4%，C23蛋白陽性表達率分別為6.7%、19.6%、71.4%、91.4%，EGFR蛋白陽性表達率分別為43.3%、60.9%、88.6%、94.8%，不同卵巢腫瘤組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽性表達率高于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢癌組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織(P均<0.05)；卵巢交界性腫瘤組織中P53蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。卵巢癌組織中P53與C23、P53與EGFR、Ki-67與C23、Ki-67與EGFR表達均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.220、0.195、0.231、0.217，P均<0.05)。結(jié)論 Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、卵巢交界性腫瘤組織、卵巢癌組織中表達逐漸增高，Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白的異常表達可能參與了卵巢癌的發(fā)病。

卵巢腫瘤；卵巢癌；核仁蛋白；野生型P53抑癌基因；血管內(nèi)皮生長因子受體；Ki-67核抗原

卵巢癌起病隱匿，70%的患者確診時已屬晚期，5年生存率僅為10%[1]。盡管經(jīng)過多年研究，卵巢癌基因靶向治療呈現(xiàn)出較好前景，但卵巢癌的高度異質(zhì)性給治療造成困難，影響效果[2,3]。目前關(guān)于Ki-67核抗原(Ki-67)、野生型P53抑癌基因(P53)、核仁蛋白(C23)、血管內(nèi)皮生長因子受體(EGFR)與卵巢癌關(guān)系的研究較多[4～6]，但結(jié)論不盡相同，對于四項指標聯(lián)合檢測也少有報道。為此，本研究觀察了不同卵巢腫瘤組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白的表達變化，探討四種蛋白在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制，現(xiàn)報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料2012年1月～2014年12月在湖北省婦幼保健院行手術(shù)治療的卵巢腫瘤患者139例，年齡17～72歲、中位年齡46歲，其中卵巢良性腫瘤46例、卵巢交界性瘤35例、卵巢癌58例。所有病例均經(jīng)術(shù)后病理檢查證實。另取同期行卵巢切除且經(jīng)病理檢查證實無卵巢惡性腫瘤患者的正常卵巢組織30例份作為對照，患者一般情況良好，無術(shù)后并發(fā)癥。

1.2Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白檢測采用免疫組化Elivision二步法。濃縮型Ki-67、P53、C23、EGFR兔抗人單克隆抗體購自Sigma公司，Elivision super試劑盒及DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)公司。染色操作步驟按試劑盒說明書進行。Ki-67抗體稀釋度為1∶200，P53抗體稀釋度為1∶200，C23抗體稀釋度為1∶100，EGFR抗體稀釋度為1∶200。用已知陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。EGFR定位于細胞膜或細胞質(zhì)，Ki-67、P53、C23定位于細胞核，以細胞出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為蛋白表達陽性，計算陽性細胞百分比，陽性細胞百分比≤10%為陰性、>10%為陽性。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表達變化不同卵巢腫瘤組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽性表達率高于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢癌組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織(P均<0.05)；卵巢交界性腫瘤組織中P53蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。詳見表1。

表1　不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表達比較

注：與正常卵巢組織相比，*P<0.05；與卵巢癌組織相比，#P<0.05；與卵巢良性腫瘤組織相比，ΔP<0.05。

2.2卵巢癌組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表達的相關(guān)性卵巢癌組織中，P53、C23蛋白同時陽性表達率為72.4%，P53、EGFR蛋白同時陽性表達率為74.1%，Ki-67、C23蛋白同時陽性表達率為92.2%，Ki-67、EGFR蛋白同時陽性表達率為94.0%。卵巢癌組織中P53與C23、P53與EGFR、Ki-67與C23、Ki-67與EGFR表達均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.220、0.195、0.231、0.217，P均<0.05)。

3　討論

腫瘤發(fā)病是細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的結(jié)果，在這一過程中有多種基因出現(xiàn)異常表達，包括多個癌基因激活和(或)抑癌基因失活。卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中也有多個癌基因和抑癌基因異常表達，但其具體發(fā)生機制尚未完全闡明。

P53基因是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的抑癌基因，因基因產(chǎn)物定位于細胞核，是一種細胞周期相關(guān)蛋白[7,8]。P53蛋白分為野生型和突變型兩種，野生型在正常細胞中呈低水平表達，突變型在腫瘤細胞中常高表達。P53蛋白異常表達與腫瘤細胞轉(zhuǎn)化、增殖及腫瘤細胞惡性表型有關(guān)[9,10]。本研究中，卵巢腫瘤惡性程度越高，P53蛋白陽性表達率越高，提示P53異常表達可能參與了卵巢癌的發(fā)病。

Ki-67是一種與細胞周期相關(guān)的核增殖標志基因，Ki-67表達水平對評價細胞增殖狀態(tài)、研究腫瘤生物學行為有重要意義，Ki-67是判斷腫瘤預后的可靠指標之一[11]。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組織中Ki-67蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織，提示在卵巢腫瘤發(fā)生及進展過程中，Ki-67表達增高，細胞增殖活性逐漸增強。

已有研究證實，C23在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，其在腫瘤細胞及其他快速分裂的細胞中表達增高，而在非分裂細胞或分裂慢的細胞中低表達，因此，C23常被用來評估腫瘤細胞增殖程度，與腫瘤的生物學行為密切相關(guān)[12～14]。本研究中，C23蛋白在卵巢癌組織中的陽性表達率高于正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織，與相關(guān)研究結(jié)果一致；且我們還發(fā)現(xiàn)C23、EGFR蛋白的表達呈現(xiàn)協(xié)同上升趨勢，推測C23參與了腫瘤新生血管的形成及其調(diào)控[14]。

EGFR是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，參與信號轉(zhuǎn)導、細胞周期調(diào)控。正常情況下EGFR表達水平較低，但在病理狀態(tài)尤其是惡性腫瘤組織中過表達[15]。本研究結(jié)果顯示，EGFR陽性表達率隨著卵巢腫瘤級別的升高而增高，提示EGFR異常表達與卵巢腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系。文獻[16]報道EGFR與配體結(jié)合可誘導G0/G1期細胞進入DNA合成期，促使受體激活，可導致細胞無自主性增殖。EGFR高表達對卵巢癌的增殖及浸潤有促進作用，可作為評估卵巢癌細胞增殖活性及患者預后的參考指標。

本研究分析了卵巢癌組織中P53、Ki-67、C23、EGFR蛋白表達的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)四項指標中兩兩表達均呈正相關(guān)關(guān)系。EGFR為細胞信號轉(zhuǎn)導通路的上游因子，推測EGFR與C23具有協(xié)同作用[17]；EGFR的過表達可能先于Ki-67，并對Ki-67的表達有正向調(diào)節(jié)作用[18,19]，且EGFR信號轉(zhuǎn)導途徑所激活的下游轉(zhuǎn)錄因子可能誘導Ki-67的過表達；Ki-67可激活細胞有絲分裂，使當P53基因發(fā)生突變時可改變其他DNA結(jié)合能力，從而削弱Ki-67等細胞增殖相關(guān)基因表達抑制，使細胞過度增殖。我們推測，卵巢癌的發(fā)生發(fā)展可能需要兩種甚至更多癌基因和相關(guān)蛋白的協(xié)同作用，這些協(xié)同作用的機制及對卵巢癌生物學行為的影響尚有待深入研究。

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吳緒峰(E-mail: zwuxufeng@163.com)

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2015-12-28)