劉啟勝楊志花盧學(xué)兵羅　昱焦陽(yáng)

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論著

食管癌患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞免疫功能的檢測(cè)及臨床意義

劉啟勝1楊志花2盧學(xué)兵1羅昱1焦陽(yáng)1

目的分析食管癌患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞免疫功能的檢測(cè)及臨床意義。方法以87例食管癌患者為觀察組，以80例健康者為對(duì)照組。分別對(duì)兩組對(duì)象的外周血NK細(xì)胞（CD56）和T淋巴細(xì)胞（CD 3、CD4、CD8）的水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果觀察組患者外周血CD 56、CD8水平均高于對(duì)照組（P＜0.05）；CD3、CD4水平均低于對(duì)照組（P＜0.05）。觀察組患者不同腫瘤分期中，CD56、CD8水平呈遞增趨勢(shì)，即Ⅰ期＜Ⅱ期＜Ⅲ期（P＜0.05）；在CD3、CD 4水平呈遞減趨勢(shì)，即Ⅰ期＞Ⅱ期＞Ⅲ期（P＜0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者的NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論食管癌患者存在細(xì)胞免疫功能下降，且下降趨勢(shì)與腫瘤病情進(jìn)程密切相關(guān)。

食管癌；NK細(xì)胞；T淋巴細(xì)胞；免疫功能

【Abstract】Objective To detectand analyze clinical significance of NK cells and T lymphocytes immune function in the patients w ith esophageal cancer.Methods The study included 87 patients with esophageal cancer（observation group）and 80 healthy persons（control group）.The level of the NK cells（CD56）and the T lymphocytes（CD3，CD4 and CD8）of the peripheralblood in two groupswere detected.Results The levelof CD56 and CD8 in observation groupwashigher than controlgroup（P＜0.05）.However，the levelof CD3 and CD4was lower in observation group（P＜0.05）.According to different tumor staging，CD56 and CD8 showed increasing trend，Ⅰ＜Ⅱ＜Ⅲ（P＜0.05），while CD3 and CD4 showed decreasing trend，Ⅰ＞Ⅱ＞Ⅲ（P＜0.05）.There wasno statistically significantdifference on the levelof NK cellsand T lymphocytes whether the patientswith lymphaticmetastasisor not（P＞0.05）.Conclusion Patientswith esophageal cancer had a decreaseof immunologic function，whichwas closely related to tumor progression.The detection of NK cellsand T lymphocyteswasmeaningful for the condition judgmentand treatmentp lan in esophageal cancer.

【Keywords】Esophageal cancer；NK cells；T lymphocytes；Immune function

隨著臨床醫(yī)學(xué)對(duì)腫瘤疾病發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，腫瘤免疫學(xué)研究報(bào)道證實(shí)，細(xì)胞免疫作為機(jī)體抗腫瘤的主要途徑，機(jī)體細(xì)胞免疫功能異常是腫瘤發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)，也是影響疾病發(fā)展及預(yù)后的關(guān)鍵因素［1］。NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞亞群作為反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)，通過(guò)對(duì)二者的監(jiān)測(cè)來(lái)判斷腫瘤患者免疫功能的變化，為臨床治療措施的制定及預(yù)后的判斷提供參考依據(jù)已成為臨床關(guān)注的熱點(diǎn)。食管癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，近年來(lái)隨著人們生活環(huán)境的變化以及飲食習(xí)慣的改變，其發(fā)病率呈逐漸升高趨勢(shì)，成為威脅人類生存質(zhì)量的重要疾病。本文以我院收治的87例食管癌患者為研究對(duì)象，探討患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞免疫功能的變化及意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

一、臨床資料

選擇我院2014年3月至2015年3月期間收治的87例食管癌患者為觀察組，所有患者均經(jīng)手術(shù)病理確診。其中，男46例，女41例；年齡45～75歲，平均（61.425.66）歲；所有患者的采樣均于未進(jìn)行手術(shù)、放化療等治療前進(jìn)行。另選擇同期于我院行健康體檢的80例健康者為對(duì)照組，男42例，女38例；年齡45～75歲，平均（62.01±5.04）歲。研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)：①無(wú)先天性免疫缺陷病者；②近2周內(nèi)未使用過(guò)激素及免疫調(diào)節(jié)劑史者；③自愿參與本次研究者。在性別、年齡方面，兩組對(duì)象比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

二、方法

分別采集兩組對(duì)象空腹靜脈血2 m L，置入EDTA抗凝的真空采血管中。取抗凝全血0.1m L，加入鼠抗人單克隆CD3-FITC/CD56-PE、CD4-FITC/CD8-PE；雙標(biāo)記抗體20μL（美國(guó)貝克曼公司生產(chǎn)），室溫下孵育25～30m in。采用流式細(xì)胞儀（FCM）對(duì)外周血NK細(xì)胞CD56和T淋巴細(xì)胞CD3、CD4、CD8的指標(biāo)水平進(jìn)行檢測(cè)［2］。

三、觀察指標(biāo)

1.兩組對(duì)象外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)比分析兩組對(duì)象外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值。

2.不同病理特征下觀察組患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

（1）不同病理分期：根據(jù)觀察組患者腫瘤的TNM分期（UICC 2009版）標(biāo)準(zhǔn)將87例患者分為Ⅰ期34例，Ⅱ期28例，Ⅲ期25例；

（2）有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：根據(jù)觀察組患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，將87例患者分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組42例和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組45例。分別對(duì)比分析不同病理特征下觀察組患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果

一、兩組對(duì)象外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

從表1可以看出，觀察組患者外周血CD56、CD8指標(biāo)值均高于對(duì)照組（P＜0.05）；CD3、CD4指標(biāo)值均低于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

二、不同病理特征下觀察組患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

從表2可以看出，不同腫瘤分期其CD56、CD8指標(biāo)值呈遞增趨勢(shì)，即Ⅰ期＜Ⅱ期＜Ⅲ期（P＜0.05）；CD3、CD4則呈遞減趨勢(shì)，即Ⅰ期＞Ⅱ期＞Ⅲ期（P＜0.05）。

三、觀察組有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的指標(biāo)值

從表3可以看出，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者的NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

討論

淋巴細(xì)胞、細(xì)胞因子、共同刺激因子、黏附因子等多種細(xì)胞及因子的失衡是造成機(jī)體細(xì)胞免疫功能紊亂的重要原因，而細(xì)胞免疫功能又在腫瘤免疫機(jī)制中發(fā)揮著主導(dǎo)作用，其功能的紊亂是造成腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵因素［3］。因此，目前通過(guò)對(duì)腫瘤患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能的檢測(cè)為疾病的診斷、治療及預(yù)后判斷提供參考依據(jù)成為臨床研究的熱點(diǎn)。NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞不僅是反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的直接指標(biāo)，也是重要的腫瘤免疫效應(yīng)細(xì)胞，在機(jī)體抗腫瘤機(jī)制中起著重要的作用。

表1　兩組外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對(duì)比（±s，%）

表1　兩組外周血NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對(duì)比（±s，%）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別n CD56 CD3 CD4 CD8觀察組87 18.76±5.28*62.63±4.20*30.54±3.04*37.01±5.21*對(duì)照組80 13.92±3.71 72.55±5.03 38.85±3.27 28.92±4.27 t值-7.163 6.185 9.224 8.157 P值-0.039 0.045 0.042 0.038

表2　觀察組不同分期NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對(duì)比±s，%）

表2　觀察組不同分期NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對(duì)比±s，%）

注：與Ⅰ期比較，*P＜0.05；與Ⅱ期比較，#P＜0.05。

不同分期n CD56 CD3 CD4 CD8Ⅰ期34 14.83±4.02 71.93±4.01 36.86±3.27 30.19±4.21Ⅱ期Ⅲ期28 25 18.82±5.01* 22.81±5.81*#60.23±4.12* 50.82±4.21*#29.12±3.25* 22.71±3.19*#37.91±4.05* 44.66±4.21*#F值-3.852 6.462 3.028 9.242 P值-0.028 0.019 0.033 0.017

表3　觀察組有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對(duì)比（±s，%）

表3　觀察組有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值對(duì)比（±s，%）

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移n CD56 CD3 CD4 CD8有42 18.92±5.14 61.18±4.81 29.18±3.05 38.18±5.29無(wú)45 18.45±5.21 63.47±5.02 32.27±3.22 36.28±5.17 t值-2.183 1.336 1.035 2.035 P值-0.135 0.273 1.532 1.392

本研究采用病例對(duì)照研究的方法，以健康者為對(duì)照，檢測(cè)分析食管癌患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞免疫功能的變化，結(jié)果顯示：①食管癌患者NK細(xì)胞比例呈升高趨勢(shì)，且升高幅度與腫瘤病情的進(jìn)展一致。CD56作為NK細(xì)胞的亞群，與CD3、CD4一起表現(xiàn)出最強(qiáng)的NK細(xì)胞殺傷活性［4］。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者外周血CD56指標(biāo)值均高于對(duì)照組，且隨患者腫瘤分期的增加，其指標(biāo)值越高?？赡苁且?yàn)殡S腫瘤病情發(fā)生及發(fā)展作用機(jī)制的影響，對(duì)人體的免疫系統(tǒng)造成刺激，進(jìn)而促進(jìn)更多NK細(xì)胞的產(chǎn)生以參與抗腫瘤免疫［5］。而這些NK細(xì)胞因腫瘤疾病相關(guān)因素的影響多未發(fā)育成熟，不能進(jìn)入腫瘤組織發(fā)揮抗腫瘤作用，最終于外周血中滯留，造成腫瘤患者外周血NK細(xì)胞比例的上升［6］。②食管癌患者細(xì)胞免疫功能下降，且下降趨勢(shì)與腫瘤病情的進(jìn)展一致。CD3、CD4、CD8均為T淋巴細(xì)胞亞群，其中，CD3為成熟T淋巴細(xì)胞的總和，是反映T淋巴細(xì)胞活性的重要標(biāo)志物；CD4為輔助性T淋巴細(xì)胞，在抗腫瘤免疫機(jī)制中占據(jù)重要地位；CD8為抑制性T淋巴細(xì)胞［7］。本研究結(jié)果顯示，察組患者外周血CD8指標(biāo)值均高于對(duì)照組，CD3、CD4指標(biāo)值均低于對(duì)照組。提示食管癌患者細(xì)胞免疫應(yīng)答受到抑制，尤其是CD4指標(biāo)值的下降，這可能是機(jī)體抗腫瘤免疫功能下降的根本原因。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，在CD8指標(biāo)值上，Ⅰ期＜Ⅱ期＜Ⅲ期；在CD3、CD4指標(biāo)值上，Ⅰ期＞Ⅱ期＞Ⅲ期。即CD3、CD4的下降趨勢(shì)及CD8的升高趨勢(shì)與食管癌患者的腫瘤分期增加趨勢(shì)一致，隨患者腫瘤病情的進(jìn)展，患者細(xì)胞免疫功能不斷下降，機(jī)體抗腫瘤免疫功能亦不斷下降［8］。另外，本研究結(jié)果中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者的NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞指標(biāo)值比較，無(wú)明顯差異；提示，臨床上通過(guò)食管癌患者NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)，并不能作為患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否判斷的依據(jù)。

綜上，食管癌患者存在細(xì)胞免疫功能下降，且下降趨勢(shì)與腫瘤病情進(jìn)程密切相關(guān)，臨床上通過(guò)對(duì)NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)對(duì)食管癌臨床治療方案的制定及病情的判斷具有一定的意義。

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（本文編輯：鄭浩軒）

Detection and clinical significance of NK cells and T lymphocytes immune function in the patients with esophageal cancer

LIUQi-sheng1，YANGZhi-hua2，LUXue-bing1，LUOYu1，JIAOYang1.1）Departmentof clinicallaboratory，DayeHopitalofTraditionalChineseMedicine，Daye435100，Hubei；2）
DepartmentofAnorectal，DayeHospitalofTraditionalChineseMedicine，Daye435100，Hubei

10.3969/j.issn.1672-2159.2016.01.001

435100大冶市中醫(yī)醫(yī)院（1檢驗(yàn)科；2肛腸科）通訊作者：楊志花

（2015-06-12）