余納　蔡小燕　林小軍　唐莼　葉靜華　李偉念

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·基礎(chǔ)研究論著·

蒽貝素對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠IL-6和IL-17A的影響

余納蔡小燕林小軍唐莼葉靜華李偉念

目的探討蒽貝素治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)的可能作用機(jī)制。方法選取Lewis雌性大鼠建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)模型，將造模成功的大鼠隨機(jī)分為CIA模型組、甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組 4組，另設(shè)正常對(duì)照組，每組各8只大鼠。其中甲氨蝶呤組予甲氨蝶呤0.5 mg/kg、每周2次，蒽貝素20 mg/kg組和40 mg/kg組分別予每日1次相應(yīng)劑量蒽貝素灌胃，正常對(duì)照組及CIA模型組灌服等體積溶媒。共給藥21 d，期間每周評(píng)估大鼠足趾腫脹程度，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)行腹主動(dòng)脈取血，ELISA法測(cè)血清IL-6和IL-17A含量，比較各組間的差異。結(jié)果治療第14日， CIA大鼠雙側(cè)足趾均較正常對(duì)照組大鼠腫脹(P均<0.01)；隨著治療時(shí)間的延長，甲氨蝶呤組與蒽貝素20 mg/kg組和40 mg/kg組大鼠的鼠爪腫脹較CIA模型組明顯好轉(zhuǎn)(P均<0.01)，甲氨蝶呤組與蒽貝素20 mg/kg組和40 mg/kg組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。影像學(xué)觀察，CIA模型組出現(xiàn)骨質(zhì)疏松、關(guān)節(jié)間隙模糊、狹窄，甲氨蝶呤組與蒽貝素20 mg/kg組和40 mg/kg組存在輕度骨質(zhì)疏松，足趾小關(guān)節(jié)間隙清楚，尚未變窄。治療后，甲氨蝶呤組與蒽貝素20 mg/kg組和40 mg/kg組血清IL-6和IL-17A水平均低于CIA模型組(P均<0.01)，其中甲氨蝶呤組與蒽貝素20 mg/kg組和40 mg/kg組血清IL-6水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，蒽貝素組20 mg/kg組和40 mg/kg組的血清IL-17A水平均低于甲氨蝶呤組(P均<0.05)，但甲氨蝶呤組與蒽貝素20 mg/kg組和40 mg/kg組血清IL-6和IL-17A水平與正常對(duì)照組比較差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論蒽貝素可能通過抑制Th17細(xì)胞分化信號(hào)通路中相關(guān)靶點(diǎn)，降低血清IL-6和IL-17A，緩解關(guān)節(jié)炎癥狀。

蒽貝素；膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎；甲氨蝶呤；白介素-6；白介素-17A

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種病因不明的自身免疫性疾病，其病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥、血管翳的形成及關(guān)節(jié)軟骨、骨組織破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能障礙，是患者喪失勞動(dòng)力和致殘的主要原因之一[1]。1980年以來，甲氨蝶呤作為抗RA的基礎(chǔ)藥物在臨床廣泛應(yīng)用，但也有報(bào)道其療效欠佳及患者不耐受的情況[2]。隨著分子免疫學(xué)的發(fā)展，對(duì)T細(xì)胞的研究越來越深入，眾學(xué)者指出CD4+T細(xì)胞應(yīng)分為輔助性T細(xì)胞1(Th1)、Th2、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)和Th17細(xì)胞4大亞群，其中Th17/Treg細(xì)胞亞群失衡在RA發(fā)病中具有重要的作用，且以Th17細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)[3]。以Th17細(xì)胞作為靶點(diǎn)的藥物研究已成為近年抗RA藥物研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)。有文獻(xiàn)報(bào)道，蒽貝素具有抑制炎癥因子表達(dá)、促進(jìn)凋亡及抗腫瘤等藥理作用[4-6]。最新研究指出，蒽貝素可抑制Th17細(xì)胞分化信號(hào)通路中相關(guān)靶點(diǎn)[7-8]。目前，筆者尚未見蒽貝素應(yīng)用于RA治療的相關(guān)報(bào)道。故本研究以膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA) 大鼠為模型，觀察蒽貝素對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)炎癥及血清中IL-6、IL-17的影響，初步探討蒽貝素治療RA的可能作用機(jī)制。

材料與方法

一、材料

1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

50只SPF級(jí)Lewis雌性大鼠，購于北京維通利華公司，許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001，體質(zhì)量170～190 g，飼養(yǎng)于中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院中藥與海洋藥物實(shí)驗(yàn)室；SPF級(jí)動(dòng)物房溫度控制在(23±2)℃，12 h晝夜循環(huán)。本實(shí)驗(yàn)方案通過該實(shí)驗(yàn)單位的動(dòng)物倫理委員會(huì)審查，遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理原則。

2. 主要試劑與儀器

主要試劑：蒽貝素(純度>98%)，廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院提供；甲氨蝶呤(每片2.5 mg)，上海信誼藥廠有限公司生產(chǎn)，批號(hào)036150603；牛Ⅱ型膠原(CⅡ)，完全弗氏佐劑(CFA) 和不完全弗氏佐劑(IFA)，購自美國Chondrex公司；IL-6和IL-17A ELISA 試劑盒購自上海欣博盛生物科技有限公司。主要儀器：濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司YLS-7C足趾容積測(cè)量儀，奧地利CliniBio 128C-340全自動(dòng)酶標(biāo)儀，日本Mikasa HF100HA高頻全自動(dòng)動(dòng)物X光機(jī)。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1. 動(dòng)物模型的制備

所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(8只)和CIA模型組(42只)。將4 g/L的CⅡ與等量CFA或IFA混合，用組織勻漿器乳化，制備好的乳劑(CⅡ終濃度為2 g/L)置4℃保存?zhèn)溆谩３醮蚊庖?第1日)取CⅡ及CFA，CIA模型組每只大鼠分3點(diǎn)皮內(nèi)注射，即背部(靠近尾部)左右2點(diǎn)分別注射0.2 ml，尾根部注射0.1 ml；第7日采用同樣的方法，取CⅡ及IFA皮下注射0.1 ml加強(qiáng)免疫1次，注射部位為尾部基底3 cm處。正常對(duì)照組大鼠同時(shí)在相同部位注射等體積的生理鹽水。

2. 動(dòng)物分組及給藥

初次免疫后第14日，挑選成模大鼠32只[炎癥評(píng)分>2分，評(píng)分依據(jù)大鼠每爪臨床癥狀評(píng)分：正常為0分、輕微的紅腫(單趾)為1分、紅腫(大于1趾)為2分、關(guān)節(jié)紅腫為3分、關(guān)節(jié)和全爪紅腫且關(guān)節(jié)不能彎曲為4分，每側(cè)關(guān)節(jié)最高4分，每只大鼠炎癥評(píng)分最高為16分]，隨機(jī)分為CIA模型組、甲氨蝶呤組、蒽貝素低劑量組和高劑量組，每組8只大鼠。依據(jù)蒽貝素的急性毒性實(shí)驗(yàn)及抗RA藥效的預(yù)實(shí)驗(yàn)確定本研究中蒽貝素的給藥劑量分別為20、40 mg/kg[9]。由于蒽貝素為對(duì)苯醌類物質(zhì)，不溶于水，本研究將其混懸于0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)進(jìn)行灌胃給藥，每日1次；甲氨蝶呤組的給藥劑量參考文獻(xiàn)[10]設(shè)為0.5 mg/kg，每周2次。正常對(duì)照組和CIA模型組每日給予0.5%CMC-Na 0.1 ml/kg。治療從初次免疫后第14日開始，連續(xù)治療3周，于第36日處死大鼠。

3. 檢測(cè)指標(biāo)及方法

足趾容積測(cè)量：沿大鼠踝關(guān)節(jié)處畫線，于第1、7、14、21、28、35日用YLS-7C足趾容積測(cè)量儀測(cè)定大鼠足趾體積，每側(cè)測(cè)量3次，結(jié)果取平均值。測(cè)量值及初次免疫前足趾容積均為左、右足趾之和。以免疫前足趾容積為基礎(chǔ)，每周觀察鼠爪腫脹情況，記錄容積增加的百分比。足趾容積變化情況=(測(cè)量值-初次免疫前足趾容積)/初次免疫前足趾容積×100%。

影像學(xué)檢查：初次免疫后第36日，對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行影像學(xué)檢查，應(yīng)用高頻全自動(dòng)動(dòng)物X光機(jī)拍片，在CR數(shù)字成像系統(tǒng)下觀察大鼠踝關(guān)節(jié)病變情況。

血清IL-6和IL-17A水平的檢測(cè)：采用ELISA法，于實(shí)驗(yàn)第36日，將全部大鼠用10%水合氯醛麻醉，固定后腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min離心15 min，取上清液置于-20℃保存，依照ELISA試劑盒說明書操作步驟檢測(cè)IL-6和IL-17A，反應(yīng)終止后應(yīng)用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度，依據(jù)樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算IL-6和IL-17A水平。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié)　　果

一、各組大鼠一般情況比較

CIA組大鼠在2次免疫后于第10日開始陸續(xù)出現(xiàn)后肢紅腫，逐漸蔓延至前肢，癥狀進(jìn)行性加重，于第19～21日達(dá)到高峰，嚴(yán)重者不能負(fù)重，關(guān)節(jié)炎病變十分明顯，且有精神萎靡、進(jìn)食量減少、輕微脫毛等現(xiàn)象；甲氨蝶呤組大鼠在治療后第6日、蒽貝素20 mg/kg組大鼠在治療后第2日各死亡1只。治療結(jié)束后，各組大鼠后足趾腫脹程度如圖1所示。

圖1　各組大鼠右后足趾腫脹程度比較

A：正常對(duì)照組；B：CIA模型組；C：甲氨蝶呤組；D：蒽貝素20 mg/kg組；E：蒽貝素40 mg/kg組

二、各組大鼠足趾容積變化

治療前(第14日)，各組CIA大鼠雙側(cè)足趾容積均較正常對(duì)照組大鼠增加(F=22.593，P<0.001；正常對(duì)照組 vs. CIA模型組、甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組t分別為8.355、10.665、7.917、10.999，P均<0.001)；第14日初始治療時(shí)，各組CIA大鼠足趾容積比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.106，P=0.956)，隨著治療周期的延長，各藥物治療組(甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組及蒽貝素40 mg/kg組)大鼠較CIA模型組的鼠爪腫脹明顯好轉(zhuǎn)(第21日F=6.062、P=0.003，CIA模型組 vs. 甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組t分別為2.942、3.721、3.308，P均<0.05；第28日F=10.794、P<0.001，CIA模型組 vs. 甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組t分別為4.714、4.964、6.316，P均<0.01；第35日F=6.520、P=0.002，CIA模型組 vs. 甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組t分別為3.665、3.754、5.340，P均<0.01)，但3個(gè)治療組組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(第21～35日，甲氨蝶呤組 vs.蒽貝素20 mg/kg組t分別為0.678、0.559、0.201，P均>0.05；甲氨蝶呤組 vs.蒽貝素40 mg/kg組t分別為0.267、0.709、0.782，P均>0.05；蒽貝素組20 mg/kg vs. 蒽貝素40 mg/kg組t分別為0.420、0.126、0.554，P均>0.05)。

與CIA模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

三、各組大鼠影像學(xué)檢查情況

正常對(duì)照組大鼠踝關(guān)節(jié)X線片顯示軟組織無腫脹，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)完整，骨質(zhì)無破壞，足趾小關(guān)節(jié)間隙清楚；CIA模型組大鼠足及踝關(guān)節(jié)周圍軟組織腫脹，關(guān)節(jié)間隙模糊、狹窄，骨關(guān)節(jié)邊緣模糊不清骨質(zhì)破壞等；甲氨蝶呤及蒽貝素20 mg/kg組和40 mg/kg組雖存在輕度骨質(zhì)疏松，但足趾小關(guān)節(jié)間隙清楚，尚未變窄。

四、各組大鼠的血清IL-6和IL-17A水平比較

各組大鼠血清IL-6(F=35.595，P<0.001)和IL-17A(F=53.876，P<0.001)水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。甲氨蝶呤及蒽貝素20 mg/kg組和40 mg/kg組血清中IL-6和IL-17A均低于CIA模型組(IL-6：CIA模型組vs.甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組t分別為7.176、6.726、8.536、P均<0.001；IL-17: CIA模型組 vs.甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組t分別為6.079、7.877、8.442，P均<0.001)，但仍高于正常對(duì)照組(IL-6：正常對(duì)照組 vs. CIA模型組、甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組t分別為11.002、-3.961、-4.065、-2.553， P均<0.05；IL-17：正常對(duì)照組 vs. CIA模型組、甲氨蝶呤組、蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組t分別為-14.184、-8.389、-6.048、-5.943，P均<0.001)，見圖4。血清IL-6水平方面，甲氨蝶呤組與蒽貝素20 mg/kg組及蒽貝素40 mg/kg組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(甲氨蝶呤組 vs. 蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組的t分別為-0.229、1.408，P均>0.05)。血清IL-17A水平組間比較，蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組均低于甲氨蝶呤組(甲氨蝶呤組 vs. 蒽貝素20 mg/kg組、蒽貝素40 mg/kg組的t分別為2.056、2.446，P均<0.05)。蒽貝素20 mg/kg和40 mg/kg組血清IL-6和IL-17A水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(IL-6：t=1.589；IL-17A，t=0.307，P均>0.05)。

圖3　各組大鼠影像學(xué)檢查情況

A：正常對(duì)照組；B：CIA模型組；C：甲氨蝶呤組；D：蒽貝素20 mg/kg組；E：蒽貝素40 mg/kg組

圖4　各組大鼠血清IL-6和IL-17A水平比較

與CIA模型組比較，**P<0.01；與甲氨蝶呤組比較，# P<0.05

討　　論

RA是一種復(fù)雜的難治性自身免疫性疾病，具體發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。20世紀(jì)80年代以來，甲氨蝶呤作為抗RA的基礎(chǔ)藥物在臨床廣泛應(yīng)用，但也有報(bào)道其療效欠佳及患者不耐受的情況[2]。隨著分子免疫學(xué)的發(fā)展，對(duì)T細(xì)胞的研究越來越深入，眾學(xué)者指出CD4+T細(xì)胞應(yīng)分為Th1、Th2、Treg和Th17細(xì)胞四大亞群，Th17/Treg細(xì)胞亞群失衡在RA發(fā)病中具有更為重要的作用，且以Th17細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)[3]。新近研究更加細(xì)致明確地闡述了Th17細(xì)胞參與RA病程的可能機(jī)制：①Th17細(xì)胞效應(yīng)因子IL-17刺激滑膜細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)，引起RA炎癥反應(yīng)[11]。②誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的表達(dá)，抑制軟骨細(xì)胞合成，促進(jìn)軟骨降解[12]。③Th17細(xì)胞膜上高表達(dá)的核因子-κB受體活化因子配體(RANKL)可與破骨細(xì)胞前體RANK結(jié)合，從而導(dǎo)致破骨細(xì)胞前體分化為破骨細(xì)胞(RA骨侵蝕的重要因素)[13]。④誘導(dǎo)成骨細(xì)胞及滑膜細(xì)胞表達(dá)RANKL，增強(qiáng)破骨細(xì)胞活性，從而促進(jìn)了破骨細(xì)胞的發(fā)育，引起骨質(zhì)破壞[14]。

Th17細(xì)胞在RA的發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用，而且高水平的Th17細(xì)胞表達(dá)可能影響生物制劑的療效。譽(yù)秀華等[15]在臨床緩解期對(duì)RA患者行外周血Th17檢測(cè)，指出RA患者外周血中Th17比例明顯增高，血清中IL-17和IL-6的水平也有明顯提高。傳統(tǒng)的改善病情抗風(fēng)濕藥物療效有限，需要聯(lián)合用藥才能降低Th17細(xì)胞[16]。所以將Th17細(xì)胞作為靶點(diǎn)的藥物研究已成為近年來抗RA藥物研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)。IL-17是誘導(dǎo)Th17產(chǎn)生的最重要細(xì)胞因子，也是一種強(qiáng)有力的炎癥細(xì)胞因子，可以誘導(dǎo)多種促炎因子的產(chǎn)生，比如IL-6、TNF-α、IL-1β等。TNF-α、IL-1β等炎癥因子筆者已在前期研究中分析過，本研究著重IL-17與IL-6的含量變化，探討蒽貝素抗RA的可能藥理作用機(jī)制。

姜姝姝等[17]提出Th17-信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)構(gòu)成了RA促炎癥反應(yīng)的正反饋通路。他們認(rèn)為，STAT3信號(hào)通路在Th17細(xì)胞的分化、致炎過程中扮演著重要的角色。在Th17細(xì)胞分化過程中，致炎因子IL-6能夠誘導(dǎo)STAT3的活化從而激活STAT3通路，IL-6與TNF-α共同促使初始T細(xì)胞向Th17細(xì)胞的分化，活化中的STAT3信號(hào)通路能夠激活維甲酸相關(guān)孤核受體γt(RORγt)的表達(dá)，從而誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分泌IL-6、IL-17等細(xì)胞因子。由Th17細(xì)胞分泌的IL-6、IL-17繼續(xù)參與上述過程，反饋性調(diào)節(jié)JAK/STAT通路，使得整個(gè)RA的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)不斷放大[14]。針對(duì)STAT3作用靶點(diǎn)，劉暢等[18]應(yīng)用關(guān)節(jié)腔注射siRNA干擾沉默STAT3，使膠原誘導(dǎo)大鼠滑膜組織中STAT3 mRNA和蛋白表達(dá)水平降低，可明顯改善CIA大鼠關(guān)節(jié)的組織病理學(xué)表現(xiàn)。

蒽貝素初始作為X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)的有效抑制劑，常被用于抗腫瘤的藥物研究中[19]。隨著腫瘤免疫微環(huán)境概念的提出，Marsh等[20]學(xué)者發(fā)現(xiàn)蒽貝素可降低腫瘤相關(guān)性炎癥因子，如IL-1、IL-6、TNF-α。蒽貝素的藥理作用廣泛，Zhou等[21]將蒽貝素應(yīng)用于膿毒癥模型大鼠，可有效降低促炎性細(xì)胞因子，包括TNF-α、IL-1、IL-6，減輕全身炎癥反應(yīng)，改善器官損傷。在Th17介導(dǎo)的免疫炎癥方面，Dai等[22]建立結(jié)腸炎相關(guān)癌癥(CAC)模型，發(fā)現(xiàn)蒽貝素可抑制結(jié)腸IL-6的表達(dá)和分泌及STAT3的活化，降低CAC小鼠的發(fā)病率及縮小腫瘤體積；通過體外試驗(yàn)證實(shí)，在結(jié)腸癌細(xì)胞中蒽貝素可通過刺激Src同源結(jié)構(gòu)域2蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP2)活性減少兩者組成和IL-6誘導(dǎo)的STAT3活化。

本研究表明，蒽貝素可有效緩解CIA大鼠的足趾腫脹程度，灌胃治療21 d后，影像學(xué)觀察雖存在輕度骨質(zhì)疏松，但足趾小關(guān)節(jié)間隙清晰；血清中IL-6和IL-17A明顯低于CIA模型組，且蒽貝素組血清IL-17A含量低于甲氨蝶呤組；蒽貝素40 mg/kg組血清IL-6和IL-17A含量較蒽貝素20 mg/kg組均有降低，但比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與劑量間隔較小、未動(dòng)態(tài)連續(xù)監(jiān)測(cè)血液相關(guān)指標(biāo)或炎癥因子反應(yīng)存在多條反饋通路有關(guān)。研究結(jié)果提示，蒽貝素可能通過Th17-STAT3通路，降低異常分泌增多的炎癥因子，緩解關(guān)節(jié)炎癥狀。研究結(jié)果表明，蒽貝素具有一定的抗炎作用，對(duì)治療RA有一定療效，但其具體作用機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。

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(本文編輯：林燕薇)

Effect of embelin on the expression of IL-6 and IL-17A in collagen-induced arthritis rat models

Yu Na, Cai Xiaoyan, Lin Xiaojun, Tang Chun, Ye Jinghua, Li Weinian.

Department of Rheumatology & Immunology, Guangzhou First People’s Hospital, Guangzhou 510180, China

ObjectiveTo evaluate the effect and potential mechanism of embelin in the treatment of rheumatoid arthritis (RA). MethodsLewis female rats were selected to establish collagen-induced arthritis (CIA) models. Then, the rat models were randomly divided into the CIA model, methotrexate, 20 mg/kg and 40 mg/kg embelin groups (n=8 for each group). Another 8 normal rats was as control group. In the methotrexate group, the rats were administered with 0.5 mg/kg methotrexate twice a week. In the embelin groups, intragastric gavage of 20 and 40 mg/kg of embelin was delivered. In the control and CIA model groups, an equivalent quantity of solvent was given. The medicine was administered for 21 d. The degree of toe swelling was evaluated every week. After corresponding medicine administration, blood sample was collected via the abdominal aorta and prepared for measurement of serum levels of IL-6 and IL-17A. The data were statistically compared among different groups. ResultsAfter 14-d treatment, bilateral toe swelling in the CIA model group was significantly more severe compared with that in the control group (all P<0.01). Along with the course of treatment, the symptoms of toe swelling in the methotrexate, 20 and 40 mg/kg embelin groups were evidently alleviated compared with those in the CIA model group (all P<0.01), whereas no statistical significance was noted among methotrexate, 20 and 40 mg/kg embelin groups (all P>0.05). Imaging examination revealed the signs of osteoporosis, indistinct joint space, stenosis in the methotrexate group, and slight osteoporosis, clear joint space but no stenosis was noted in methotrexate, 20 and 40 mg/kg groups. After treatment, the mean serum levels of IL-6 and IL-17A in the methotrexate, 20 and 40 mg/kg embelin groups were significantly down-regulated compared with those in the CIA model group (all P<0.01), whereas no statistical significance was observed in IL-6 levels among the methotrexate, 20 and 40 mg/kg embelin groups (all P>0.05). The mean serum levels of IL-17A in the 20 and 40 mg/kg embelin groups were considerably lower than that in the methotrexate group (both P<0.05).The serum levels of IL-6 and IL-17A in the methotrexate, 20 and 40 mg/kg embelin groups significantly differed from that in the control group (all P<0.05). ConclusionEmbelin can mitigate the symptoms of joint inflammation probably via suppressing the targets in the signaling pathway of Th17 cell differentiation and down-regulating the serum levels of IL-6 and IL-17A.

Embelin; collagen-induced arthritis; Methotrexate; Interleukin-6; Interleukin-17A

10.3969/j.issn.0253-9802.2016.08.004

廣東省中醫(yī)藥局科研課題(20151015)

510180 廣州，廣州市第一人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科

2016-05-07)