IL—6和TNF—α在子宮內膜異位癥不孕患者血清中水平的變化及意義研究

代洪波　張艷

[摘要]目的：探討子宮內膜異位癥（EMS）不孕患者血清中白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平變化及其與EMS發(fā)病的關系。方法：選取我院術后病理診斷為EMS合并不孕癥患者65例作為觀察組，另外選取我院產科門診體檢健康的育齡婦女65例作為對照組，采用放射免疫法對TNF-α及IL-6進行檢測，觀察兩組患者血清中TNF-α及IL-6水平變化。結果：觀察組的TNF-α、IL-6水平分別為（33.48±5.70）ng/L、（30.84±5.37）ng/L，對照組的TNF-α、IL-6水平分別為（16.39±4.74）ng/L、（14.71±3.28）ng/L，觀察組明顯高于對照組，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；Ⅰ～Ⅱ期患者的TNF-α、IL-6水平分別為（23.54±4.72）ng/L、（14.74±3.90）ng/L，Ⅲ～Ⅳ期患者的TNF-α、IL-6水平為（38.56+6.93）ng/L、（22.78±4.18）ng/L，Ⅲ～Ⅳ期患者明顯高于I～Ⅱ期患者，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P

[關鍵詞]子宮內膜異位癥；不孕癥；腫瘤壞死因子-α；白細胞介素-6

[中圖分類號]R711.74 [文獻標志碼]A

子宮內膜異位癥（endometriosis，EMS）是指具有活性的子宮內膜腺體、間質組織出現(xiàn)在子宮內膜以外部位而引起的疾病，以宮骶韌帶及卵巢最為常見，又稱為內異癥，是育齡期婦女常見的婦科疾病。其臨床特點表現(xiàn)為進行性加重的盆腔疼痛及粘連，和惡性腫瘤一樣，具有侵襲性及轉移性，是導致育齡婦女不孕的重要原因之一。研究表明，大約45%的婦女患有子宮內膜異位癥，而患有此病的婦女中有30%會出現(xiàn)不孕癥狀。子宮內膜異位癥的發(fā)病機制尚不明確，經血逆流學說是為大家所接受的理論機制，近年來的臨床相關研究表明子宮內膜異位癥的發(fā)生與免疫因素有關，研究者們發(fā)現(xiàn)子宮內膜異位癥患者血清中出現(xiàn)了腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及白細胞介素-6（IL-6）的升高。本研究通過檢測子宮內膜異位不孕癥患者血清中TNF-α及IL-6水平，旨在研究TNF-α及II-6與子宮內膜異位不孕癥的關系。

1 資料和方法

1.1 一般資料

病例來源于我院2012年3月至2015年3月收治的子宮內膜異位不孕癥患者65例。病例納入標準：（1）符合《婦產科學》（第8版）子宮內膜異位癥的診斷標準；（2）有進行性痛經史：（3）盆腔檢查可觸及結節(jié)或合并有囊性腫物者；（4）經腹或腹腔鏡手術可見組織粘連、紫藍色病灶等；（5）術后病理確診為子宮內膜異位癥；（6）患者臨床資料完整，符合醫(yī)學倫理學要求，患者知情同意，簽署知情同意書。排除標準：（1）免疫性、結核性、代謝性及內分泌疾?。唬?）近期內服用激素進行治療史；（3）復發(fā)性子宮內膜異位癥；（4）合并有血液系統(tǒng)疾病及腫瘤患者。將65例子宮內膜異位不孕癥患者設為觀察組，另外選取我院產科門診體檢健康的育齡婦女65例作為對照組。觀察組：根據(jù)美國生育協(xié)會修正（AFS）標準：Ⅰ～Ⅱ期32例，年齡23～37歲，平均（32.4±3.5）歲；Ⅲ～Ⅳ期33例，年齡24～40歲，平均（33.2±3.9）歲。對照組：年齡25～38歲，平均年齡（33.7±2.8）歲。兩組患者在年齡等一般資料方面無統(tǒng)計學差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 治療方法

術前禁食12h，手術時進行椎管內麻醉，采用保守性手術方法，保留患者子宮及其附件，采用腹腔鏡切除局部病灶，分離粘連組織，修復創(chuàng)傷組織。

1.3 實驗檢測原理

人TNF-α實驗檢測原理：此檢測試劑盒采用雙抗體夾心法來測定標本中人TNF-α的水平，將純化后的人抗體包被微孔板，將抗原（待檢測的樣品）依次加入包被單孔的微孔中，然后加入被過氧化物酶標記的羊抗人抗體，使二者充分進行結合，形成所謂的抗原抗體復合物，此復合物即為酶標抗體復合物，在進行充分洗滌之后，往抗原抗體復合物中加入顯色劑四甲基聯(lián)苯胺。在酶的催化作用下，四甲基聯(lián)苯胺會變成藍色，經過酸化后，藍色轉變成黃色。樣品含量水平與復合物顏色深淺呈正相關。最后在納米波長下用酶標儀測定吸光度值，然后通過與標準曲線進行對比，來計算TNF-α的濃度。

人IL-6實驗檢測：原理同人TNF-α實驗檢測原理。

1.4 標本采集方法

所有患者入院后在清晨進行空腹采血，抽取外周靜脈血4mL置于無菌試管內，在室溫下放置，并避免溶血，以免影響檢測的準確性，所有血清樣本以3 000 r/min的速度離心5min后，棄去沉淀，取上清液置于-80℃的冰箱中凍存。采用放射免疫法對TNF-α及IL-6進行檢測，IL-6 ELISA試劑盒購于美國尚柏生物醫(yī)學技術有限公司（生產批號：150521），TNF-α放射免疫試劑盒購于北京三博生物工程有限公司（生產批號：150526），所有操作均嚴格按照試劑盒的說明進行。

1.5 統(tǒng)計學分析

使用SPSS19.0軟件包進行統(tǒng)計學分析，計量資料用（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用x²檢驗，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者TNF-α及IL-6水平比較

觀察組的TNF-α水平明顯高于對照組，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；觀察組的IL-6水平明顯高于對照組，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。見表1。

2.2 不同分期子宮內膜異位癥不孕患者TNF-α及IL-6水平比較

Ⅲ～Ⅳ期患者的TNF-α水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；Ⅲ～Ⅳ期患者的IL-6水平明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。見表2。

2.3 子宮內膜異位癥不孕癥患者手術前后TNF-α及IL-6水平比較

手術前患者TNF-α水平明顯高于手術后患者，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；手術前患者IL-6水平明顯高于手術后患者，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。見表3。

3 討論

育齡期婦女是子宮內膜異位癥的高發(fā)人群，子宮內膜異位癥病理學性質為良性，但是如果長期存在會增加女性惡性腫瘤的發(fā)病率，給患者的家庭帶來了沉重的經濟負擔，嚴重影響患者自身的生活質量。近年來子宮內膜異位癥的發(fā)病率不斷上升，與現(xiàn)代女性頻繁流產是分不開的，流產容易破壞子宮內膜。子宮內膜異位癥引起患者不孕的具體機制及原因尚不明確，公認的理論機制為經血倒流。大部分孕齡期婦女可以通過內分泌調節(jié)將經血里夾雜的子宮內膜清除掉，但小部分人因自身體質較弱或外界環(huán)境影響而引起內分泌紊亂，從而無法清除子宮內膜，殘留下來的子宮內膜會在盆腔部位種植，發(fā)生免疫應答，刺激血管增生，并進展為子宮內膜異位病灶。近年來研究表明細胞因子、多種炎癥因子、酶類均參與了這一異常種植過程，并參與了病灶形成及發(fā)展過程，但其具體作用機制尚不明確。

TNF-α是由NK細胞、巨噬細胞、中性粒細胞等產生，具有改變內皮細胞特性、殺傷腫瘤細胞、促進血管增生、調節(jié)代謝等功能，同時研究者們還發(fā)現(xiàn)TNF-α能夠誘導IL-6、IL-8等炎性因子表達，當機體出現(xiàn)異常的子宮內膜時，發(fā)生異位的內膜組織可以作為抗原刺激機體產生細胞和體液免疫應答，引起血液中的淋巴細胞和巨噬細胞增多，進而引起炎性因子釋放增加。TNF-α促進血管增生作用體現(xiàn)在其可促進子宮內膜細胞粘附及子宮內膜細胞增殖，有助于維持女性正常月經周期及排卵功能，TNF-α的異常增高可引起患者不孕、早產、流產等疾病的發(fā)生，其與抗精子抗體聯(lián)系密切。IL-6是一種來源于單核細胞、羊膜細胞、纖維細胞、滋養(yǎng)層細胞、上皮細胞等的糖蛋白，參與機體的創(chuàng)傷愈合和炎癥反應，其表達增高與盆腔局部粘連及輸卵管損傷具有相關性。同時還能參與炎癥瘢痕形成，刺激成纖維細胞增生，引起輸卵管阻塞導致不孕等。多數(shù)臨床研究表明子宮內膜異位癥患者血清中的IL-6明顯高于正?；颊?，有人認為是由于子宮內膜處于分泌期，從而導致IL-6水平增高，可能與激素含量升高有關；亦有研究表明IL-6可以刺激P450芳香酶表達，導致異位內膜發(fā)生種植，其在卵泡中的表達也會相應增高，引起卵泡發(fā)育不良及受精卵分泌受限，從而導致不孕癥。

本研究結果表明，觀察組的TNF-α、IL-6水平明顯高于對照組，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）：Ⅲ～Ⅳ期患者的TNF-α、IL-6水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；手術前患者TNF-α、IL-6水平明顯高于手術后患者，兩組比較具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。表明子宮內膜不孕癥患者的TNF-α、IL-6水平明顯高于正?；颊撸⑶遗c疾病分期情況具有相關性，在進行手術治療后，患者TNF-α、IL-6水平顯著降低。Gallicchio等對子宮內膜不孕癥患者血清中TNF-α、IL-6水平進行研究發(fā)現(xiàn)，二者具有相關性，與本研究結果一致。

綜上所述，IL-6及TNF-α可能參與了子宮內膜不孕癥病情的發(fā)生及進展過程，通過對患者IL-6及TNF-α水平進行測定將有助于臨床醫(yī)生判斷子宮內膜異位癥不孕患者的病情發(fā)展情況及預后。

（收稿日期：2015-07-15）endprint