李文楷，徐永吉，陸遠富，劉　杰（遵義醫(yī)學院基礎(chǔ)藥理教育部省部共建重點實驗室，貴州遵義　563003）

阿托伐他汀誘導肝臟Cyp7a1和時鐘基因的表達

李文楷，徐永吉，陸遠富，劉杰
（遵義醫(yī)學院基礎(chǔ)藥理教育部省部共建重點實驗室，貴州遵義563003）

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-4-26 11：06網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160426.1106.060.html

他汀類藥物是羥甲戊二酰輔酶A（HMGCR）選擇性抑制劑，是臨床防治冠心病的重要藥物［1-2］。研究表明，阿托伐他汀能升高肝臟中膽固醇7羥化酶（Cyp7a1）的表達，改變體內(nèi)膽汁酸代謝［3］，并可能與其長期使用所致肝臟不良反應有關(guān)［4］。Cyp7a1表達受時鐘基因的調(diào)控，具有晝夜節(jié)律性［5］。本研究采用長期給予臨床劑量阿托伐他汀，觀察其對小鼠肝Cyp7a1基因和時鐘基因表達的影響。

Tab 1　Effect of atorvastatin on liver index，ALT，AST，TBA and inflammation-associated genes expression（±s，n=10）

Tab 1　Effect of atorvastatin on liver index，ALT，AST，TBA and inflammation-associated genes expression（±s，n=10）

*P＜0.05 vs control

Group　Liver index　ALT　AST　TBA　Egr1　mCK Control　49.2±1.28　36.7±0.48　44.4±0.68　22.9±0.19　100±30.7　100±10.5 Atorvastatin　49.3±1.42　35.3±0.84　55.3±0.61*23.3±0.20　178±56.4　128±11.2

Tab 2　Effect of atorvastatin on Cyp7a1，F(xiàn)XR and circadian rhythm-related genes expression（±s，n=10）

Tab 2　Effect of atorvastatin on Cyp7a1，F(xiàn)XR and circadian rhythm-related genes expression（±s，n=10）

*P＜0.05 vs control

Group　Cyp7a1　Bmal1　Clock　Cry1　Per2　Dbp　Nr1d1 Control　100.0±19.3　100.0±27.3　100.0±13.5　100.0±7.3　100.0±23.8　100.0±32.1　100.0±21.4 Atorvastatin　286.3±40.8*　300.4±54.5*　177.8±26.3*127.3±8.7　65.7±12.2　82.9±25.4　113.2±14.1

1　材料與方法

1.1藥品、試劑和實驗動物阿托伐他汀，Topfond Pharmaceutical Limited by Share Ltd；TRIzol、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，寶生物工程（大連）有限公司；SYBR Green，百樂中國公司。

♂昆明種小鼠，（20±2）g，由第三軍醫(yī)大學實驗動物中心提供，飼養(yǎng)于遵義醫(yī)學院SPF程控環(huán)境（許可證號：SYXK 黔2014-003），維持光照8∶00～20∶00。隨機分為對照組和阿托伐他汀組，阿托伐他汀組每天早上9∶00 ig給予10 mg ·kg-1阿托伐他汀，每天1次，連續(xù)90 d。最后1次給藥1 h后收集血和肝組織。

1.2肝毒性檢測血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽汁酸（TBA）用試劑盒測定。稱取肝濕重，計算肝指數(shù)。取肝大葉組織，切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察肝組織的病理變化。

1.3實時熒光定量PCR檢測相關(guān)基因mRNA表達肝組織50 mg采用TRIzol提取總RNA，用Nanodrop測總RNA的濃度與質(zhì)量，進行逆轉(zhuǎn)錄，用SYBR Green PCR擴增（40循環(huán)），以β-actin作為內(nèi)參，用相對定量法進行分析。

2　結(jié)果

阿托伐他汀組小鼠體重、肝重、肝指數(shù)、ALT、總膽汁酸、肝臟病理切片均與正常對照組無明顯差異。AST有一定程度的升高，但屬正常范圍。阿托伐他汀組炎癥基因Egr1和mCK表達較對照組小鼠略有升高，但差異無統(tǒng)計學意義（Tab 1）。

阿托伐他汀組小鼠肝組織中Cyp7a1的表達明顯高于對照組（P＜0.05）。阿托伐他汀能夠增加核心基因Bmal1和Clock的表達（P＜0.05），但對負反饋基因Cry1、Per2以及與膽酸代謝相關(guān)的目標基因Dbp、Nr1d1的表達無明顯作用（Tab 2）。

3　討論

本實驗結(jié)果顯示，長期給予臨床劑量阿托伐他汀安全性較高，不引起明顯的肝功能異常，但可增加Cyp7a1的表達。

肝臟膽酸代謝和Cyp7a1基因的表達均呈現(xiàn)晝夜節(jié)律性［5-6］。時鐘基因調(diào)控的機制主要包括核心基因 Clock、Baml1的表達，負反饋基因Per、Cry和Nr1d1的反饋調(diào)節(jié)和目標基因Dbp的表達［7］。我們的實驗結(jié)果顯示，長期灌胃給予阿托伐他汀后能升高小鼠肝組織中核心基因Clock和Bmal1的表達，而對負反饋基因 Cry1、Per2以及目標基因Dbp、Nr1d1無明顯作用。

時辰藥理學是藥物作用的一個新靶點，為阿托伐他汀的藥理研究提供了一個新的關(guān)聯(lián)。

［1］張玲玲，金英，隋海娟.阿托伐他汀對Aβ1-42誘導的大鼠AD模型保護作用及其機制研究［J］.中國藥理學通報，2014，30（2）：270-4.

［1］Zhang L L，Jin Y，Sui H J.Protective effects of atorvastatinon Aβ1-42-induced AD model rats and its mechanism［J］.Chin Pharmacol Bull，2014，30（2）：270-4.

［2］李敏，孫玲，李紅玲，孫黔云.阿托伐他汀減輕氧化型低密度脂蛋白導致的人微血管內(nèi)皮細胞活化和損傷［J］.中國藥理學通報，2014，30（5）：679-83.

［2］Li M，Sun L，Li H L，Sun Q Y.Atorvastatin attenuates activation and injury of human microvascular endothelial cells induced by oxidized low density lipoprotein［J］.Chin Pharmacol Bull，2014，30 （5）：679-83.

［3］Fu Z D，Cui J Y，Klaassen C D.Atorvastatin induces bile acidsynthetic enzyme Cyp7a1 by suppressing FXR signaling in both liver and intestine in mice［J］.J Lipid Res，2014，55（12）：2576-86.

［4］曾含清，張瓊，彭文興.阿托伐他汀致肝損傷的機制［J］.藥物不良反應雜志，2012，14（4）：232-6.

［4］Zeng H Q，Zhang Q，Peng W X.Mechanism of atrovastatin-induced liver injury［J］.Adverse Drug React J，2012，14（4）：232 -6.

［5］Noshiro M，Usui E，Kawamoto T，et al.Multiple mechanisms regulate circadian expression of the gene for cholesterol 7alpha-hydroxylase（Cyp7a），a key enzyme in hepatic bile acid biosynthesis［J］. J Biol Rhythms，2007，22（4）：299-311.

［6］Ma K，Xiao R，Tseng H T，et al.Circadian dysregulation disrupts bile acid homeostasis［J］.PLoS One，2009，4（8）：e6843.

［7］Dallmann R，Brown S A，Gachon F.Chronopharmacology：new insights and therapeutic implications［J］.Annu Rev Pharmacol Toxicol，2014，54：339-61.

Atorvastatin induces hepatic expression of Cyp7a1 and Bmal1 and Clock in mice

LI Wen-kai，XU Yong-ji，LU Yuan-fu，LIU Jie
（Dept of Pharmacology and Key Lab for Basic Pharmacology of Ministry of Education，Zunyi Medical College，Zunyi Guizhou 563003，China）

阿托伐他??；安全性；膽汁酸代謝；Cyp7a1；生物鐘；Bmal1；Clock

atorvastatin；safety； bileacidmetabolism；Cyp7a1；circadian rhythm；Bmal1；Clock

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.05.030

2015-12-07，修稿日期：2016-01-22

國家自然科學基金資助項目（No 81160415）

李文楷（1990-），男，碩士生，研究方向：藥代動力學與藥物毒理學，E-mail：liwenkai1990@126.com；劉杰（1953-），男，博士，教授，碩士生導師，研究方向：藥物代謝與毒理學，通訊作者，E-mail：JieLiu@zmc.edu.cn

A

1001-1978（2016）05-0739-02中國圖書分類號：R-332；R322.47；R344.81；R394.2；R972.6