常紅星，竇　霞

（1.甘肅省武威市第二人民醫(yī)院，甘肅　武威　733000；2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，甘肅　蘭州　730000）

甘肅紋黨參指紋圖譜研究*

常紅星1，竇霞2

（1.甘肅省武威市第二人民醫(yī)院，甘肅武威733000；2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，甘肅蘭州730000）

研究紋黨參的指紋圖譜。應(yīng)用高效液相色譜法。通過指紋圖譜的分析研究，可以作為黨參質(zhì)量控制的方法。

黨參；紋黨參；指紋圖譜

黨參為桔?？浦参顲odonopsis pilosula（Franch）Nann.f。具有補(bǔ)中益氣，健脾益肺的功能，用于脾肺虛弱，氣短心悸，食少便溏，虛喘咳嗽，內(nèi)熱消渴［1］。黨參的商品有西黨、東黨、潞黨、條黨及白條黨（紋黨）。

指紋圖譜技術(shù)自20世紀(jì)70年代出現(xiàn)發(fā)展至今，已經(jīng)得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，目前由最初的研究階段進(jìn)入到實(shí)際應(yīng)用階段。并且，這項(xiàng)技術(shù)從總體上對(duì)中藥的質(zhì)量控制起到了推動(dòng)作用。中藥指紋圖譜由于其能夠從整體上來表征中藥的內(nèi)在特征，目前被國際上公認(rèn)為控制天然藥物質(zhì)量的有效手段之一［2］，為真正實(shí)現(xiàn)中藥走向世界提供了極為有利的質(zhì)量保證。

我們用高效液相色譜法對(duì)甘肅產(chǎn)紋黨參進(jìn)行了指紋圖譜研究該研究結(jié)果對(duì)紋黨參道地性研究也具有重要意義。

1　儀器與試藥

1.1實(shí)驗(yàn)儀器

LC-20AD高效液相色譜儀 （日本島津公司）：SPD-M20D二極管陣列檢測(cè)器；BP210S電子分析天平（Sarlorius公司）；SK7200H超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；IECMicromax離心機(jī) （美國ThermoElectron公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)材料

黨參，產(chǎn)于甘肅渭源縣，由蘭州市冠蘭中藥飲片廠提供，經(jīng)楊錫倉主任中藥師鑒定為來源于桔?？频狞h參；黨參炔苷對(duì)照品：（批號(hào)：110796-200514，購買自中國生物制品藥品檢定所）。乙腈（色譜純），水（超純水），其余試劑均為分析純。

2　色譜條件及檢測(cè)波長的選擇

2.1色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 （色譜柱：Thermo Hypersil Gold-C18：150×4.6mm，5μm）；流速為1mL？min-1；以乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，洗脫程序見表1：

表1　色譜條件

2.2檢測(cè)波長選擇

黨參中主要成分黨參炔苷最大吸收波長為268nm。［3］為全面反映樣品中的主要成分，經(jīng)218 nm、230nm、245nm、275nm、300nm五個(gè)波長測(cè)定指紋圖譜的比較分析（如圖1～6所示），由于在268nm波長的指紋圖譜中，較好地體現(xiàn)各主要峰，且各峰分離度好，基線較平穩(wěn)，故確定268nm波長下為黨參指紋圖譜的檢測(cè)波長。

圖1　218nm波長所測(cè)指紋圖譜

圖2　230nm波長所測(cè)指紋圖譜

圖3　245nm波長所測(cè)指紋圖譜

圖4　268nm波長所測(cè)指紋圖譜

圖5　285nm波長所測(cè)指紋圖譜

圖6　300nm波長所測(cè)指紋圖譜

2.3指紋圖譜系統(tǒng)適應(yīng)性及延長時(shí)間檢測(cè)，如圖7～10所示。

圖7　黨參炔苷參照物指紋圖譜

圖9　空白溶劑指紋圖譜

圖10　延長時(shí)間120分鐘指紋圖譜

2.3.1參照物溶液的制備

取黨參炔苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含50μg的對(duì)照品溶液，即得［4］。

2.3.2供試品溶液的制備

取紋黨參約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，超聲30min，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，即得。（因含量測(cè)定研究中考察過本品供試品制備方法，故本研究中不再重復(fù)。）

2.3.3精密度試驗(yàn)

取紋黨參，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品，連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定。結(jié)果表明，各供試品溶液中共有峰的保留時(shí)間及各主要峰 （占總峰面積5%以上）的峰面積基本保持一致（RSD＜3%），以第1次進(jìn)樣所得指紋圖譜做為對(duì)照?qǐng)D譜計(jì)算相似度，結(jié)果相似度均不小于0.95，符合指紋圖譜的相關(guān)技術(shù)要求。表明該方法精密度良好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)考察

取紋黨參，按正文中供試品溶液制備方法制備供試品溶液，每隔3h測(cè)定一次指紋圖譜，共測(cè)6次，以0h所得指紋圖譜為對(duì)照，計(jì)算相似度，各指紋圖譜相似度結(jié)果均不小于0.99，符合指紋圖譜相關(guān)技術(shù)要求（應(yīng)不小于0.95）。表明供試品溶液15h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)

取紋黨參，按正文中供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，同法制備供試品溶液6份，依法測(cè)定，計(jì)算相似度，相似度結(jié)果均不小于0.99，符合指紋圖譜的技術(shù)要求（不小于0.95），說明本方法重復(fù)性良好。

2.3.610批紋黨參的測(cè)定及對(duì)照指紋圖譜的獲得

取10批紋黨參樣品，按正文中供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算相似度，用相似度軟件以這10批樣品指紋圖譜為基礎(chǔ)獲得“共有模式”作為黨參對(duì)照指紋圖譜，如圖11～12所。

圖11　10批紋黨參指紋圖譜共有模式

圖12　10批紋黨參指紋圖譜共有模式

根據(jù)10批紋黨參指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜計(jì)算相似度，根據(jù)多批次數(shù)據(jù)積累，確定紋黨參指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜經(jīng)相似度軟件計(jì)算，相似度應(yīng)不低于0.80。

3　討論

本試驗(yàn)過程中，為全面反映紋黨參的指紋特征，分別選用不同波長檢測(cè)樣品，經(jīng)過在218nm、230 nm、245nm、275nm、300nm五個(gè)波長所測(cè)定指紋圖譜的比較，發(fā)現(xiàn)218nm及230nm基線較差，300nm波長下峰較少，而且峰面積非常小，245nm及275nm基線較平穩(wěn)，峰較多，但是相比較，268nm波長下的峰面積較大，能夠較好地體現(xiàn)樣品各主要峰，且各峰分離度好，基線較平穩(wěn)，故最終確定268nm波長為黨參指紋圖譜的檢測(cè)波長。

通過以上各項(xiàng)試驗(yàn)，指紋圖譜的分析，作為紋黨參主要鑒別手段，可以為紋黨參質(zhì)量控制提供依據(jù)［5］。

［1］ 封士蘭，胡芳弟，劉欣，等.HPLC研究甘肅產(chǎn)白條黨參指紋圖譜［J］.中成藥，2005（07）745-748.

［2］ 邵建強(qiáng).中藥指紋圖譜的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2009（06）994-997.

［3］ 竇霞，甘肅黨參超微粉的制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［D］.南京：中醫(yī)藥大學(xué)，2014（學(xué)位論文）.

［4］ 孫永成，竇霞，尚強(qiáng)，等，桂枝茯苓膠囊（精制）多成分指紋圖譜的研究［J］.世界科學(xué)技術(shù)（中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2010，12 （2）：294-297.

［5］ 武果桃，賀東昌，張李俊，劉紅霞，任杰，孟冬霞.中藥黨參的HPLC指紋圖譜研究［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2009（05）54-56.

p632+.8

2014年度甘肅中醫(yī)學(xué)院中青年科研基金（ZQ2014-31）。