蔡　青，張文潔，趙舒武，王　蓉，許蓬娟，賀美瑜，劉　暢，肖　杏，孫梓翔（天津中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，天津300193）

補(bǔ)陽還五湯對(duì)奧沙利鉑致神經(jīng)病理痛模型大鼠的干預(yù)作用*

蔡青，張文潔，趙舒武，王蓉，許蓬娟，賀美瑜，劉暢，肖杏，孫梓翔
（天津中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，天津300193）

［目的］研究通過建立奧沙利鉑致大鼠慢性神經(jīng)病理痛模型，選擇補(bǔ)陽還五湯為代表方揭示其對(duì)奧沙利鉑致神經(jīng)病理痛的干預(yù)作用。［方法］選取健康清潔級(jí)雄性成年大鼠60只，隨機(jī)分為4組?？瞻讓?duì)照組、奧沙利鉑組、補(bǔ)陽還五湯對(duì)照組和補(bǔ)陽還五湯治療組。檢測4組大鼠熱痛閾值并監(jiān)測大鼠體質(zhì)量變化。［結(jié)果］第2周補(bǔ)陽還五湯治療組熱痛閾值與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。補(bǔ)陽還五湯可拮抗奧沙利鉑化療大鼠引起的熱痛閾值和體質(zhì)量的變化。［結(jié)論］補(bǔ)陽還五湯治療奧沙利鉑所致神經(jīng)病理痛符合中醫(yī)學(xué)的基本理論，該方具有廣闊的應(yīng)用前景。

補(bǔ)陽還五湯；神經(jīng)病理痛；奧沙利鉑；熱痛閾值

奧沙利鉑是結(jié)直腸癌化療的一線藥物，然而卻會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)嚴(yán)重的急性和慢性周圍神經(jīng)病變，并且常常呈現(xiàn)神經(jīng)病理性疼痛［1-2］?；颊呓?jīng)歷多個(gè)療程的治療后，表現(xiàn)出周圍神經(jīng)慢性病變，其主要臨床癥狀特點(diǎn)是上下肢端麻木感和感覺遲鈍，甚至可有患者出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)功能障礙。慢性神經(jīng)病變是臨床奧沙利鉑化療的劑量限制性毒性，往往導(dǎo)致化療的中斷，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量［3-4］。中醫(yī)腫瘤學(xué)者研究認(rèn)為化療所致神經(jīng)病理痛歸屬“血痹”和“痹證”范疇［5-6］。氣虛血瘀是本病發(fā)生發(fā)展基本病理基礎(chǔ)，應(yīng)以益氣活血為基本治則［7-9］。補(bǔ)陽還五湯若論治法，補(bǔ)氣為主，活血通絡(luò)為輔［10-11］。本實(shí)驗(yàn)通過建立奧沙利鉑致大鼠慢性神經(jīng)病理痛模型，選擇補(bǔ)陽還五湯為代表方揭示其對(duì)奧沙利鉑致神經(jīng)病理痛的干預(yù)作用，研究結(jié)果將為防治奧沙利鉑化療致神經(jīng)病理痛提供新思路。

1　材料與方法

1.1補(bǔ)陽還五湯藥液制備將黃芪120g，當(dāng)歸6g，赤芍4.5 g，川芎3 g，地龍3 g，紅花3 g，桃仁3 g等7味藥浸入10倍體積雙蒸水浸泡2 h，常規(guī)制成濃度為6 250 g/L的溶液；高壓滅菌后，4℃保存，用前搖勻（由天津人民醫(yī)院中藥房制備提供）。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方法選取健康清潔級(jí)雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量180～230 g。實(shí)驗(yàn)期間保持自由飲水和進(jìn)食，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為（22±2）℃，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分組，每組15只大鼠?？瞻讓?duì)照組：灌胃給予等量生理鹽水。奧沙利鉑組：給予奧沙利鉑4 mg/（kg·d），每周2次腹腔注射，持續(xù)4周。在造模前1天用電子天平稱量體質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)過程每周2次測量并記錄，根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整奧沙利鉑的劑量。補(bǔ)陽還五湯對(duì)照組：灌胃給予補(bǔ)陽還五湯水煎劑濃縮液50 g/（kg·d）（參照臨床等效劑量的4倍劑量給藥），每日2次，連續(xù)灌胃28 d。補(bǔ)陽還五湯治療組：給予奧沙利鉑方法同前，同時(shí)灌胃補(bǔ)陽還五湯水煎劑50 g/（kg·d）。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法建立奧沙利鉑化療所致慢性神經(jīng)病理痛大鼠模型，通過行為學(xué)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)補(bǔ)陽還五湯干預(yù)作用。行為學(xué)測試均于給藥完畢后1h，在上午9∶00～11∶00之間進(jìn)行；給藥人員不參與行為學(xué)測試。每次測試前大鼠有30 min適應(yīng)測試環(huán)境和測試者。觀測時(shí)間持續(xù)至第1次給藥后4周。

1.3.2熱縮足潛伏期用足底刺激測痛儀測定按照已有研究方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別于給藥前和給藥后第7、14、21、28天，將大鼠置于有機(jī)玻璃箱內(nèi)3 mm厚的玻璃板上，適應(yīng)環(huán)境15 min。按儀器操作說明進(jìn)行測試，用熱刺激儀刺激大鼠后肢足底中部皮膚，同時(shí)開始計(jì)時(shí)，出現(xiàn)抬足、舔足，逃避等反應(yīng)時(shí)讀刺激儀上的時(shí)間［12］。照射光源強(qiáng)度適度調(diào)整，控制正常大鼠潛伏期介于10～20 s之間；設(shè)置自動(dòng)切斷時(shí)間為30 s，防止燒傷大鼠皮膚。大鼠雙足分別連續(xù)測量5次，每次間隔5 min，去除極端值后計(jì)算3次平均值，即為大鼠的熱輻射痛閾值［12］。

2　研究結(jié)果

2.1補(bǔ)陽還五湯對(duì)奧沙利鉑致神經(jīng)病理痛模型大鼠體質(zhì)量的影響大鼠給予奧沙利鉑后，模型組大鼠逐漸出現(xiàn)行動(dòng)遲緩，進(jìn)水進(jìn)食顯著減少；除空白對(duì)照組外，其余各組均有3只動(dòng)物死亡，補(bǔ)陽還五湯對(duì)照組為灌胃失誤致死；其他兩組均為不適應(yīng)化療所致。重復(fù)測量的多因素方差分析結(jié)果顯示，大鼠體質(zhì)量隨時(shí)間進(jìn)程差異顯著（F=51.659，P＜0.001）；分組和各測量時(shí)間點(diǎn)間存在交互作用（F=3.516，P＜0.01），提示時(shí)間因素的作用隨分組的不同差異顯著。經(jīng)LSD檢測后發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組與第1周相比，第3周和第4周動(dòng)物體質(zhì)量顯著增加（P＜0.05）。補(bǔ)陽還五湯對(duì)照組，第3周和第4周動(dòng)物體質(zhì)量顯著增加（P＜0.05）。奧沙利鉑組4周內(nèi)體質(zhì)量比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；補(bǔ)陽還五湯治療組第2周體質(zhì)量不增加，反而減少，提示化療藥物的不良反應(yīng)，影響動(dòng)物進(jìn)食；后2周體質(zhì)量又顯著增加，提示補(bǔ)陽還五湯的干預(yù)作用。結(jié)果見表1，圖1。

2.2補(bǔ)陽還五湯對(duì)奧沙利鉑致神經(jīng)病理痛模型大鼠熱痛閾值的影響對(duì)照組熱痛閾值隨時(shí)間呈降低趨勢（見表2，圖2）。經(jīng)重復(fù)測量的多因素方差分析發(fā)現(xiàn)，熱痛閾值基礎(chǔ)值、第1周至4周時(shí)間點(diǎn)間差異顯著（F=21.257，P＜0.001）。第2周熱痛閾值4組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩兩比較顯示，與模型組相比補(bǔ)陽還五湯對(duì)照組熱痛閾值有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，補(bǔ)陽還五湯治療組熱痛閾值與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。重復(fù)測量的多因素方差分析發(fā)現(xiàn)，分組和各測量時(shí)間點(diǎn)間無交互作用（P＜0.297）。

表1　補(bǔ)陽還五湯對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響（±s）Tab.1Effects of Buyang Huanwu decoction on rat body weigh（t±s）g

表1　補(bǔ)陽還五湯對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響（±s）Tab.1Effects of Buyang Huanwu decoction on rat body weigh（t±s）g

注：與第1周相比，*P＜0.05；與第2周相比，**P＜0.01；與第2周相比，##P＜0.01。

組別第1周第2周第3周第4周空白對(duì)照組270.66±13.90 269.55±5.85 310.78±7.85*315.01±9.83**奧沙利鉑組272.97±7.24 268.19±8.01 292.49±10.72 283.91±9.02補(bǔ)陽還五湯對(duì)照組274.83±6.36 274.88±8.49 310.17±9.43*304.47±14.41*補(bǔ)陽還五湯治療組277.82±5.33 263.81±8.05 302.48±8.55*##300.50±6.18*##

表2　補(bǔ)陽還五湯對(duì)神經(jīng)病理痛模型大鼠熱痛閾值的影響（±s）Tab.2Effects of Buyang Huanwu decoction on thermal pain threshold of the neuropathy pain rat mode（l±s）s

表2　補(bǔ)陽還五湯對(duì)神經(jīng)病理痛模型大鼠熱痛閾值的影響（±s）Tab.2Effects of Buyang Huanwu decoction on thermal pain threshold of the neuropathy pain rat mode（l±s）s

注：與奧沙利鉑組相比，*P＜0.05；與奧沙利鉑組相比，**P＜0.01。

組別基礎(chǔ)值第1周第2周第3周第4周空白對(duì)照組16.02±1.76 14.70±1.23 14.33±1.4411.41±0.949.87±0.59奧沙利鉑組16.14±0.59 18.49±1.58 17.20±1.6012.68±0.9311.59±0.85補(bǔ)陽還五湯對(duì)照組16.27±1.02 15.43±1.38 11.08±1.51**9.84±0.87*10.49±1.27補(bǔ)陽還五湯治療組16.09±1.24 18.25±1.73 11.95±1.23*10.22±1.0610.57±0.80

圖2　不同組大鼠熱痛閾值變化趨勢Fig.2The trend of heat pain threshold in different groups of rats within four weeks

3　討論

奧沙利鉑致神經(jīng)病理痛是在化療中常見的毒副反應(yīng)，患者肢體常常發(fā)生疼痛、麻木等不能耐受的癥狀往往中斷化療。奧沙利鉑化療致慢性神經(jīng)病理痛機(jī)制未完全清楚，是非常棘手的臨床問題［13-14］。補(bǔ)陽還五湯是清代名醫(yī)王清任在《醫(yī)林改錯(cuò)》中最早呈現(xiàn)，由黃芪、當(dāng)歸、赤芍、川芎、紅花、地龍組成，該方臨床常用于治療如缺血性腦中風(fēng)、中風(fēng)后遺癥等疾?。?5-16］。隨著該方研究深入，臨床證實(shí)補(bǔ)陽還五湯可用于治療奧沙利鉑所致神經(jīng)病理痛［17-18］。方中重用黃芪，補(bǔ)益元?dú)?，意在氣旺則血行，瘀祛則絡(luò)通，為君藥；大劑量黃芪以求其大補(bǔ)元?dú)?、推?dòng)血液運(yùn)行為君藥，強(qiáng)調(diào)了中醫(yī)學(xué)中“氣為血帥”和“氣行則血行”的理論［19］。諸藥合用，益氣補(bǔ)血與活血行血，使氣旺血行、補(bǔ)而不滯，解毒散結(jié)、活血化瘀而不傷正氣，從而使氣行血行。血痹的病因包括氣血不足之體，外受風(fēng)寒，陽氣不能充于脈，血不能榮于脈，治療當(dāng)使陽氣暢行于脈中，血運(yùn)亦能趨于穩(wěn)態(tài)，筋脈自榮［20］。

本研究結(jié)果表明，給予大鼠奧沙利鉑后，動(dòng)物明顯出現(xiàn)行動(dòng)遲緩，進(jìn)水進(jìn)食顯著減少現(xiàn)象，致使動(dòng)物體質(zhì)量減少，提示補(bǔ)陽還五湯可發(fā)揮一定的干預(yù)作用。補(bǔ)陽還五湯可拮抗奧沙利鉑化療大鼠引起的熱痛閾值的變化。目前奧沙利鉑神經(jīng)毒性的機(jī)制尚不明確，并且也不清楚補(bǔ)陽還五湯通過怎樣的機(jī)制發(fā)揮作用，因此尚需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究以明確奧沙利鉑致神經(jīng)病理痛的發(fā)病機(jī)制以及補(bǔ)陽還五湯的干預(yù)機(jī)制，后續(xù)研究應(yīng)該進(jìn)一步從分子機(jī)制方面進(jìn)行研究，以便更好地指導(dǎo)臨床用藥，減輕腫瘤患者的痛苦。

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（本文編輯：馬英，滕曉東）

Intervention effects of Buyang Huanwu decoction on neuropathic pain oxaliplatin induced in the rat model

CAI Qing，ZHANG Wen-jie，ZHAO Shu-wu，WANG Rong，XU Peng-juan，HE Mei-yu，LIU Chang，XIAO Xing，SUN Zi-xiang
（School of Integrative Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］The aim of the present study was to reveal the intervention of Buyang Huanwu decoction as a representative soup to oxaliplatin-induced neuropathic pain using oxaliplatin induced rat chronic neuropathic pain model.［Methods］Sixty healthy adult male and clean grade rats were randomly divided into four groups including Blank group，oxaliplatin group，Buyang Huanwu decoction control group and Buyang Huanwu decoction treatment group.Body weight measurements and the thermal pain threshold of rats were assessed in rats of the four groups.［Results］The thermal pain threshold of Buyang Huanwu decoction treatment group compared with that in model group was significantly different in second week.Buyang Huanwu decoction can antagonize change of thermal pain threshold and body weight in rats induced by oxaliplatin chemotherapy.［Conclusion］The present experimental study has confirmed Buyang Huanwu treated neuropathic pain oxaliplatin-induced is fully consistent with the basic theory of Chinese medicine.Buyang Huanwu decoction has broad application prospects.

Buyang Huanwu decoction；oxaliplatin；neuropathic pain；thermal pain threshold

R285.5

A

1672-1519（2016）03-0169-03

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.03.11

天津中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院科研啟動(dòng)基金；天津中醫(yī)藥大學(xué)第五屆大學(xué)生科技創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目。

蔡青（1967-），男，博士后，教授，從事腦缺血和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基礎(chǔ)研究。

（2015-11-20）