外周血及蛻膜組織中CD4⁺CD25⁺調(diào)節(jié)性T細胞比例和炎癥因子原因不明復發(fā)性流產(chǎn)的關系研究

樓向明　劉文華　費小陽

[摘要]目的：探究外周血及蛻膜組織中CD4⁺CD25⁺調(diào)節(jié)性T細胞比例以及相關炎癥因子對原因不明復發(fā)性流產(chǎn)的影響。方法：選取2014年5月至2015年5月就診于我院門診的原因不明復發(fā)性流產(chǎn)（URSA）患者90例為觀察組，并選取同期在婦產(chǎn)科門診手術室的行人工流產(chǎn)手術的正?；颊?0例為對照組：分析兩組患者的一般資料、外周血及蛻膜組織中CD4⁺CD25⁺調(diào)節(jié)性T細胞比例、調(diào)節(jié)性T細胞特異調(diào)節(jié)因子Foxp3和EBi3的表達以及血清炎癥因子（包括TNF-α、IL-2、IL-6、IL-10）水平，研究其相關性。結果：與正常妊娠組相比，反復流產(chǎn)組外周血及蛻膜組織中Treg細胞比例明顯降低，F(xiàn)oxp3和EBi3因子mR-NA的表達水平明顯降低，且無論URSA患者或者是正常對照組，蛻膜中各因子的表達均高于外周血中的表達，外周血TNF-α、IL-2水平明顯升高，而IL-6和IL-10水平要明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論：蛻膜中各因子的表達均高于外周血中的表達提示妊娠過程的主要免疫反應部位是“母-胎界面”，Treg細胞比例、Treg細胞因子和Th2型因子IL-6、IL-10水平可能參與妊娠的維持，調(diào)控“母-胎界面”局部免疫耐受。對于復發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病過程具有一定的影響作用。

[關鍵詞]CD4⁺CD25⁺調(diào)節(jié)性T細胞；原因不明復發(fā)性流產(chǎn)；炎癥因子

[中圖分類號]R714.21 [文獻標志碼]A

近年來，復發(fā)性流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）的發(fā)病率正在逐年增加，RSA是指連續(xù)發(fā)生2次及2次以上的自然流產(chǎn)，其發(fā)生率在1%～5%左右，使得患者的身心健康、日常生活和工作都受到極大的負面情緒影響。RSA主要與解剖、內(nèi)分泌、感染、遺傳以及外界環(huán)境等因素相關，然而臨床上仍有50%的復發(fā)性流產(chǎn)原因不明，稱為原因不明性復發(fā)性流產(chǎn)（un-explmned recurrent spontaneous aboartion，RSA），免疫微環(huán)境失調(diào)在其中扮演重要的角色。研究表明，Th1型因子（如IL-2、TNF-α等）和Th2型因子（如IL-6、IL-10等）構成了蛻膜局部細胞因子網(wǎng)絡，CD4⁺T輔助細胞亞群中Th1/Th2細胞的比例在免疫平衡的維持中起重要作用。CD4⁺CD25⁺調(diào)節(jié)性T細胞（Treg細胞）主要發(fā)揮免疫負調(diào)節(jié)的作用，起抗炎和維持自身免疫耐受的作用，F(xiàn)oxp3和EBi3是Treg細胞的特異性調(diào)節(jié)因子，對Treg細胞的發(fā)育和免疫抑制功能的維持具有重要作用。本研究通過檢測URSA患者和正常早孕婦女外周血Th1型因子和Th2型因子水平、外周血及蛻膜組織中Treg細胞比例的變化以及Foxp3和EBi3的表達水平，探討相關性，為URSA的治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例來源于2014年5月至2015年5月就診于我院門診的URSA患者90例和同期在婦產(chǎn)科門診手術室的行人工流產(chǎn)手術的正常患者90例。URSA病例納入標準：（1）年齡<40歲；（2）有2次或2次以上自然流產(chǎn)史；（3）夫婦雙方身體健康，且復發(fā)性流產(chǎn)病因經(jīng)普通檢查無法明確：（4）入組患者均知情同意。排除標準：（1）內(nèi)分泌和免疫相關疾??；（2）器質(zhì)性病變及感染性因素；（3）家族遺傳病及近親結婚史；（4）服用藥物或有害物質(zhì)接觸史。對照組病例納入標準：（1）年齡<40歲：（2）妊娠小于12周；（3）B超檢查證實胚胎發(fā)育正常。（4）夫婦雙方身體健康。排除標準：（1）既往無自然流產(chǎn)以及死胎史（2）患有器質(zhì)性病變、內(nèi)分泌和免疫相關疾病；（3）感染性疾病以及肝腎疾病病史。觀察組：年齡20～38歲，平均（27.5±3.1）歲，流產(chǎn)次數(shù)2～7次，平均（3.1±1.2）次，流產(chǎn)時平均孕周（8.1±0.8）周，月經(jīng)第3d性激素五項水平正常；對照組：年齡19～39歲，平均（28.4±3.5）歲，平均孕周（7.9±1.5）周，月經(jīng)第3d性激素五項處于正常水平。經(jīng)統(tǒng)計學分析，兩組患者的年齡、孕周、月經(jīng)第3d性激素五項等一般資料均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

用抗凝管抽取兩組患者外周靜脈血，離心分離血清與血細胞，收集兩組患者行人工流產(chǎn)術時取出的蛻膜，酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法（ELISA）法測定血清炎癥因子（包括TNF-α、IL-2、IL-6、IL-10）水平，逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應法（RT-PCR）檢測患者外周血及蛻膜組織中Foxp3和EBi3因子mRNA的表達，雙熒光標記流式細胞技術檢測外周血及蛻膜組織中Treg細胞比例。

1.3 觀察指標

分析兩組患者的一般資料、外周血及蛻膜組織中Treg細胞比例、Treg細胞特異調(diào)節(jié)因子Foxp3和EBi3的表達以及血清炎癥因子（包括TNF-α、IL-2、IL-6、IL-10）水平，詳細記錄后做出對比分析，研究其相關性。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，定性資料采用獨立樣本R×C列聯(lián)表資料的x²檢驗；定量資料，以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用配對設計資料的t檢驗或兩獨立樣本資料的t檢驗，按α=0.05的檢驗水準，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般情況比較

納入樣本為就診于我院門診的URSA患者90和同期在婦產(chǎn)科門診手術室的行人工流產(chǎn)手術的正?；颊?0例。兩組一般資料具有均衡性（P>0.05）。見表1。

2.2 兩組外周血及蛻膜組織中Treg細胞比例比較

與正常妊娠組相比，反復流產(chǎn)組外周血及蛻膜組織中Treg細胞比例明顯降低，蛻膜中Treg細胞比例高于外周血，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。意義（P<0.05）。見表3。

2.3 兩組外周血及蛻膜組織中Foxp3和EBi3因子mRNA的表達水平比較

與正常妊娠組相比，反復流產(chǎn)組外周血及蛻膜組織中Foxp3和EBi3因子mRNA的表達水平明顯降低，蛻膜組織中Foxp3和EBi3因子mRNA表達水平高于外周血，差異有統(tǒng)計學

2.4 兩組外周血及Th1型因子和Th2型炎癥因子水平比較

與正常妊娠組相比，反復流產(chǎn)組外周血TNF-α、IL-2水平明顯升高，而IL-6和IL-10水平要明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

URSA的發(fā)病機制尚未完全闡明，目前存在較多的探索和嘗試性的治療，結果的矛盾導致巨大的爭議。研究表明，妊娠階段是一個特殊的、復雜的生理階段，伴隨著在心理、生理和免疫功能的變化，我們可以將胎兒看作是在母體內(nèi)生長、發(fā)育和成形的一種同種的抗原，并在母體免疫應答的保護作用下生長，一直持續(xù)到胎兒順利地分娩，這種使胎兒不被排斥的現(xiàn)象是由很多因素共同作用產(chǎn)生的效果，分布在母胎界面的T細胞（Th細胞）包括Th1/Th2型細胞因子成為研究者的觀察目標，最近的研究發(fā)現(xiàn)，這種模式不能完全反映體內(nèi)細胞因子網(wǎng)絡，胎兒的植入過程從粘連、定位、血管生成、侵入過程涉及復雜和精確的調(diào)節(jié)。有學者認為，并非僅有Th1/Th2類細胞因子參與了免疫耐受的形成，Treg細胞以及Treg細胞因子對母-胎免疫耐受的形成起著至關重要的作用。

Th1型免疫反應與Th2兩型免疫反應主要調(diào)節(jié)調(diào)控“母-胎界面”局部免疫耐受，將耐受與排斥現(xiàn)象保持在一個相對平衡的狀態(tài)中。在懷孕初期，TNF-α、IL-2作為Th1型細胞因子代表，調(diào)控細胞的增殖、分化、衰老、凋亡細胞增殖以及機體能量代謝，為胎兒的生長發(fā)育提供了相對良好的環(huán)境。At-slan等發(fā)現(xiàn)Th1型細胞因子促進孕婦體內(nèi)的激素合成包括孕酮和人絨毛膜促性腺激素，促進胎盤的植入；然而過高的Th1型細胞因子水平對于胎兒發(fā)育過程也構成威脅性，在很大程度上增加了胚胎植入過程的難度。作為Th2型細胞因子，研究發(fā)現(xiàn)IL-6發(fā)現(xiàn)通過刺激B細胞影響母體的免疫系統(tǒng)降低排斥作用，胚胎進入子宮后，母胎之間適應性與相容性則受到IL-10的調(diào)控。Treg通過細胞間接觸抑制和分泌抑制性細胞因子等抑制傳統(tǒng)T細胞的活化從而維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定并誘導移植物的耐受。Foxp3是Treg細胞的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，對Treg細胞在胸腺內(nèi)的發(fā)育、在外周的分布以及免疫抑制功能的維持具有重要作用，F(xiàn)oxp3含量可以調(diào)控母胎界面免疫耐受的形成，促使妊娠向好的結局發(fā)展。

本研究中發(fā)現(xiàn)，與正常妊娠組相比，反復流產(chǎn)組外周血及蛻膜組織中Treg細胞比例明顯降低，F(xiàn)oxp3和EBi3因子mRNA的表達水平明顯降低，且無論URSA患者或者是正常對照組，蛻膜中各因子的表達均高于外周血中的表達，外周血TNF-α、IL-2水平明顯升高，而IL-6和IL-10水平要明顯降低蛻膜中各因子的表達均高于外周血中的表達提示妊娠過程的主要免疫反應部位是“母-胎界面”，Treg細胞比例、Treg細胞因子和Th2型因子IL-6、IL-10水平可能參與妊娠的維持，調(diào)控“母-胎界面”局部免疫耐受，于復發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病過程具有一定的影響作用。

綜上所述，URSA的發(fā)生和發(fā)展是一個極其復雜和綜合的免疫學過程，我們需要從不同角度如Th1/Th2型細胞因子、Treg細胞以及Treg細胞因子等方面對URSA患者的治療進行更多的研究，從而確立治療URSA的有效方法。

（收稿日期：2015-08-05）