桂 萍，張 婷，汪德清

（中國人民解放軍總醫(yī)院輸血科，北京　100853）

即刻法和Levey-Jennings法在ELISA檢測HBsAg中的比較

桂 萍，張 婷，汪德清

（中國人民解放軍總醫(yī)院輸血科，北京100853）

目的 將2013年8月至2014年4月底每次ELISA法檢測HBsAg試驗(yàn)的前20次質(zhì)量控制數(shù)據(jù)分別用即刻法和Levey-Jennings法分析，探究這兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)及適用情況。方法 對半年的質(zhì)控數(shù)據(jù)先用即刻法統(tǒng)計分析，計算得到每組數(shù)據(jù)的x，CV，s，SI上限及SI下限，并將得到的SI上限，SI下限與SI界值表比較，若SI上限，SI下限均小于n2s，則表明試驗(yàn)在控，若有一值處于n2s和n3s之間，則為告警，若有一值大于n3s，則處于失控，對于失控和告警的數(shù)據(jù)都需舍去離散程度最大值，并查找原因，重新進(jìn)行測定。同時對同批號質(zhì)控物和同試劑的前20次質(zhì)控數(shù)據(jù)進(jìn)行計算得到，s，并以x，x±3s建立質(zhì)控框架圖，將隨后數(shù)據(jù)繪入Levey-Jennings質(zhì)控圖中，大于x+3s或小于x-3s的質(zhì)控值視為失控狀態(tài)，需查找原因，重新測量。結(jié)果 發(fā)現(xiàn)有兩組數(shù)據(jù)在即刻法和Levey-Jennings法中呈現(xiàn)出不同的結(jié)果。即刻法中告警的數(shù)據(jù)在Levey-Jennings法中可以處于在控狀態(tài)，而Levey-Jennings法失控的數(shù)據(jù)在即刻法中可能在控。結(jié)論 即刻法和Levey-Jennings法適用不同條件下的檢測，對于檢測頻率較低的樣本，即刻法顯得更為合適。對于HBsAg來看，Levey-Jennings法更合適適用。

實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控； 質(zhì)控圖； 即刻法

DOI：10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.04.030

收稿日期：2016-02-16；修回日期：2016-03-03

作者簡介：桂萍，女，本科。研究方向：臨床輸血。E-mail：376505769@qq.com

通訊作者：汪德清，男，博士，主任醫(yī)師。E-mail：deqingw@vip.sina.com

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是我國比較常見的血液傳染病，因此對無常獻(xiàn)血者進(jìn)行HBV相關(guān)指標(biāo)的檢測，是控制HBV經(jīng)輸血傳播的重要環(huán)節(jié)［1］。目前檢測HBV標(biāo)志物乙肝表面抗原（HBsAg）的主要方法為ELISA法，進(jìn)行檢測實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的目的就是為了保證檢測結(jié)果數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及所發(fā)出報告可靠。目前ELISA實(shí)驗(yàn)室多采用兩種質(zhì)控方法，一種為即刻法，另一種為Levey-Jennings法。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)：“即刻法”，只需在常規(guī)條件下對同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次，即可對第3次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控，不足之處是需要對每次測定的結(jié)果進(jìn)行計算，而且靈敏度稍差［2］；Levey-Jennings質(zhì)控圖，該方法已成為廣義質(zhì)量管和評價日常檢測數(shù)據(jù)的有效工具，也是最簡單、最有效的統(tǒng)計技術(shù)之一，但是檢測的次數(shù)較多或者在實(shí)驗(yàn)條件有變動時需要重新計算［3］。本文通過對2013 年8月至2014年4月底ELISA法檢測HBsAg試驗(yàn)質(zhì)量控制數(shù)據(jù)的計算比較，發(fā)現(xiàn)其中有兩組數(shù)據(jù)在各使用兩種方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析的情況下所得到的結(jié)果不同。

材料與方法

1 試劑、質(zhì)控品及儀器

HBsAg檢測試劑，AB-HBV，試劑批號：D166710，D217110，由雅培公司提供，在有效期內(nèi)使用。HBsAg檢測標(biāo)準(zhǔn)指控品：康徹斯坦，試劑批號：201301001-01，201401002，其含量均為0.2IU，均在有效期內(nèi)使用。使用STAR前加樣系統(tǒng)和FAME全自動酶免分析儀進(jìn)行檢測。

2 數(shù)據(jù)來源

中國人民解放軍總院輸血科化驗(yàn)組2013年8月至2014年4月ELISA檢測HBsAg室內(nèi)質(zhì)量控制數(shù)據(jù)。

3 實(shí)驗(yàn)方法

方法一：按改良即刻法［1］進(jìn)行計算，先在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件下，測定兩次質(zhì)控值，從第三次開始，每次計算其平均值x，CV及其標(biāo)準(zhǔn)差s，按公式SI上限=計算，將所得結(jié)果與SI界值表相比較，當(dāng)SI上限和SI下限都小于其界值表中n2s的值時，說明其結(jié)果可靠處于在控，可以繼續(xù)進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)其中有一個值大于界值表的n2s且小于n3s時，該狀態(tài)處于警告，當(dāng)其中有一個值大于n3s時，則說明該質(zhì)控結(jié)果處于失控狀態(tài)，對于失控和警告狀態(tài)的值，選擇舍去一個離散程度最大的值［1］。

方法二：按Levey-Jennings法測定。該方法需連續(xù)測定20次的質(zhì)控值，計算出其平均值x，以及標(biāo)準(zhǔn)差s，按westgard的3s標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷，即以x，x±3s作圖建立一個質(zhì)控框架圖，將同批質(zhì)控品和檢測試劑測定的結(jié)果描入上述所做的質(zhì)控圖中，當(dāng)描入的質(zhì)控值大于x+3s或小于x-3s時，即說明該質(zhì)控值已處于失控狀態(tài)，對于這樣的值，需要尋找失控的原因，并重新測定該值。

結(jié) 果

表1和表2均為即刻法結(jié)果，圖1是按表1數(shù)據(jù)所做的L-J法質(zhì)控圖（x=0.337，s=0.018），圖2是按表 2數(shù)據(jù)所做的L-J法質(zhì)控圖（x=0.797，s= 0.129）。

從表1可以看出，在即刻法中，第18組數(shù)據(jù)（質(zhì)控值為0.322）處于警告狀態(tài)，而在L-J法（圖1）中該數(shù)值大于x-3s（0.281）處于在控狀態(tài)；而在即刻法中第9組數(shù)據(jù)（質(zhì)控值為0.397）在即刻法中處于在控，而用L-J法時卻處于失控狀態(tài)。

從表2可以看出，即刻法中的第3組數(shù)據(jù)（質(zhì)控值為0.691）處于警告狀態(tài)，而在L-J法（圖2）中該20組數(shù)據(jù)大于x-3s（0.49）處于在控狀態(tài)。

表1　即刻法對前20次質(zhì)控實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的結(jié)果

表2　即刻法對前　20次質(zhì)控實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的結(jié)果

討 論

即刻法的連續(xù)測定三次，即可對以后的數(shù)據(jù)進(jìn)行在控與失控的判斷，操作方便，試劑的浪費(fèi)少，能夠降低成本，節(jié)約時間［4］。但也正由于只有三次，前三個數(shù)值的準(zhǔn)確性顯得相當(dāng)重要，很容易被其他外在原因影響，使得前三點(diǎn)失控，每次測定一個新的質(zhì)控數(shù)據(jù)，就會產(chǎn)生一組新的數(shù)據(jù)，使得當(dāng)時在控的數(shù)據(jù)出現(xiàn)告警或失控的狀況［5-6］。且在做回顧性分析的時候，就會發(fā)現(xiàn)，很多即刻法在控的點(diǎn)，用L-J法就會處于失控的狀態(tài)，對于失控的質(zhì)控點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)具有滯后性。由于樣本極少，極易出現(xiàn)抽樣誤差。即刻法不能做質(zhì)控圖，只能判斷單個點(diǎn)的在控與否，對連續(xù)上升或下降趨勢的質(zhì)控點(diǎn)不能進(jìn)行判斷，靈敏度不夠好，超出20次后就必須轉(zhuǎn)化成L-J質(zhì)控法分析。

L-J法測定20組數(shù)據(jù)，根據(jù)數(shù)據(jù)進(jìn)行計算，繪制出質(zhì)控圖。通過質(zhì)控圖，能夠明確的了解每個數(shù)據(jù)的在控失控情況，而且其樣本多，對于質(zhì)控點(diǎn)的判斷更加合理科學(xué)，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。但是一般ELISA試劑的有效期較短，更換頻繁，如果用L-J法進(jìn)行試驗(yàn)，就要對同一批號試劑連續(xù)做20次實(shí)驗(yàn)，對于試劑浪費(fèi)較多，并且如果前20次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)出現(xiàn)離散程度較大的值會對后續(xù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的判斷產(chǎn)生影響。L-J法原本為生化實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)控方法，在生化實(shí)驗(yàn)室具有溯源性，而在ELISA實(shí)驗(yàn)室中由于其報告指標(biāo)s/CO為比值，沒有溯源性［7］。

干擾ELISA實(shí)驗(yàn)的因素很多，比如酶標(biāo)板未洗凈，人員操作問題，試劑保存不當(dāng)?shù)榷紩绊憣?shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。對于上述這些原因，首先，筆者認(rèn)為應(yīng)該建立相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系并不斷改進(jìn)，同時對于實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前培訓(xùn)，加強(qiáng)操作能力，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行試驗(yàn)。再者，對失控原因進(jìn)行分析并記錄，保持工作環(huán)境的穩(wěn)定，定時進(jìn)行儀器的保養(yǎng)和維護(hù)。

當(dāng)今最適合ELISA實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制方法并未建立，仍需進(jìn)一步研究。總之，對于檢測次數(shù)少的樣本即刻法更加適合ELISA實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控，L-J法相對于即刻法更穩(wěn)定，其質(zhì)控值在特定條件下，能呈正態(tài)分布，符合統(tǒng)計學(xué)規(guī)律。對于HBsAg檢測的室內(nèi)質(zhì)控，L-J法更合適。

［1］段友紅，程衛(wèi)芳，孟海萍，等.合肥地區(qū)無償獻(xiàn)血者HBV感染調(diào)查及輸血?dú)堄囡L(fēng)險分析.臨床輸血與檢驗(yàn)，2014，16（3）：265-268.

［2］孔巍.論“即刻法”用于ELISA試驗(yàn)檢測HBsAg室內(nèi)質(zhì)控分析.中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)，2015，S1：71-72.

［3］胡伯勝.ELISA法檢測HIV抗體質(zhì)量控制方法的應(yīng)用比較.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（24）：3391-3392.

［4］佘有彬.質(zhì)控“即刻法”在HIV抗體ELISA檢測中的應(yīng)用探討.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，33（24）：3388-3389.

［5］王勝藍(lán)，黃靜.“即刻法”質(zhì)控中出現(xiàn)“告警”時應(yīng)該刪去最大偏離值.中國輸血雜志，2005，18（3）：230-231.

［6］梅傳亮，杜勇.ELISA“即刻法”質(zhì)控圖前3點(diǎn)的探討.中國輸血雜志，2012，25（S）：71.

［7］楊壽旺，李睿，周振達(dá)，等.ELISA質(zhì)控存在的問題探討.中國國境衛(wèi)生檢疫雜志，2011，34（5）：334-336.

（檀葉青編輯）

Comparison Between the Instant Method and the Levey-jennings Method in Detecting HBsAg by ELISA

GUI Ping，ZHANG Ting，WANG De-qing
（Department of Blood Transfusion，Chinese PLA General Hospital，Beijing 100853，China）

Objective To explore the advantages and disadvantages of instant method and Levey-Jennings Jennings. Methods The first 20 quality control datas of HBsAg detected by ELISA from August 2013 to end of April 2014 were analyzed.Data from instant method werestatistically analyzed and calculated，x，CV，s，SIupper limitand SIlower limit，and made SIupperlimit，and SIlower limitcompare with the SI community.If SIupper limitand SIlower limitwereall less than n2s，it indicatedthat the test was in control.If a value was between n2s and n3s，it indicatedan alarm.If a value was greater than n3s，it was out of control.For out of control and alarm data，the data of maximum degree of dispersion wereabandoned，found out the reasons，and then measured again.While the former 20 times QC data with the same batch quality control materialand reagents were calculated x，s，and，establish quality control frames baesd on x±3s.The later data were then drawn into Levey-Jennings control chart.When avalue was greater thanx +3s or less than the controlx-3s，it was considered out of control.There wasa need to find out the reason and remeasure.Results It was found that there were two different results analyzed by instant method and Levey-Jennings.The alarm data in instant method may be incontrol state in Levey-Jennings，however，the data out of control in Levey-Jennings may be controlled in the other set.Conclusion Instant method and Levey-Jennings applies in different conditions，for lower frequency of tested samples，instant method is much more appropriate.For HBsAg，Levey-Jennings method is a better choice.

Laboratory internal quality control； Control chart； Instant method