李鵬姍，雷雪芹,2，徐廷生,2，趙淑娟,2，王攀林

(1.河南科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471003；2.洛陽(yáng)市優(yōu)質(zhì)禽類種質(zhì)資源與遺傳繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 洛陽(yáng) 471003)

?

轉(zhuǎn)基因雞的染色體核型分析

李鵬姍1，雷雪芹1,2，徐廷生1,2，趙淑娟1,2，王攀林1

(1.河南科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471003；2.洛陽(yáng)市優(yōu)質(zhì)禽類種質(zhì)資源與遺傳繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 洛陽(yáng) 471003)

為了研究外源基因p53對(duì)雞自身染色體核型是否有影響，以含有外源基因p53的轉(zhuǎn)基因公雞為試驗(yàn)組，以同種非轉(zhuǎn)基因公雞作為對(duì)照組，通過(guò)外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法和骨髓法，制備了雞染色體標(biāo)本片。在油鏡下隨機(jī)選擇50個(gè)染色體分散良好的細(xì)胞，測(cè)量染色體的條數(shù)、相對(duì)長(zhǎng)度、臂比值和著絲粒指數(shù)，確定并比較轉(zhuǎn)基因雞和非轉(zhuǎn)基因雞的染色體形態(tài)。研究結(jié)果表明：試驗(yàn)組和對(duì)照組公雞的染色體條數(shù)均符合2n=78條，均包括10對(duì)大染色體和29對(duì)微小染色體，且微小染色體基本為端著絲粒染色體。兩組的染色體核型均由 38 對(duì)常染色體和1對(duì)同配型性染色體ZZ組成，1 號(hào)染色體、2號(hào)染色體和1對(duì)性染色體(ZZ)均為中央著絲粒(m)染色體，3號(hào)染色體均為端著絲粒(t)染色體，4號(hào)染色體均為亞中央著絲粒(sm)染色體，6～10號(hào)染色體均為端著絲粒(t)染色體。

轉(zhuǎn)基因雞；非轉(zhuǎn)基因雞；外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法；骨髓法；染色體核型分析

0　引言

由于禽類的生殖特點(diǎn)，導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因禽類的研究技術(shù)滯后于轉(zhuǎn)基因哺乳類動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因雞作為重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物和理想的生物反應(yīng)器，具有廣闊的應(yīng)用前景[1]。從禽蛋中收集和分離轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)較其他方法更容易，且轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物不容易受到污染。在得到轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的過(guò)程中，不會(huì)影響雞自身的生長(zhǎng)發(fā)育和健康，故可以利用轉(zhuǎn)基因雞生產(chǎn)大量藥用蛋白。與哺乳動(dòng)物生物反應(yīng)器相比，雞輸卵管生物反應(yīng)器因其經(jīng)濟(jì)、高效、穩(wěn)定和周期短等多個(gè)潛在優(yōu)勢(shì)，被認(rèn)為是具有開發(fā)前景的生產(chǎn)藥用蛋白的技術(shù)平臺(tái)之一[2]。文獻(xiàn)[3-4]分別用不同的方法成功制備了轉(zhuǎn)基因雞。

p53基因是人體細(xì)胞中的一種抑癌基因，幾乎所有的體細(xì)胞中均可檢測(cè)到p53蛋白的存在[5]。此外，p53基因的成功克隆以及載體的構(gòu)建為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的建立奠定了一定基礎(chǔ)[6]。為了進(jìn)一步確定轉(zhuǎn)入的外源基因p53是否對(duì)雞自身的染色體核型有影響，本文對(duì)體內(nèi)已檢測(cè)出含有外源基因p53的轉(zhuǎn)基因公雞進(jìn)行核型分析，并比較轉(zhuǎn)基因公雞和非轉(zhuǎn)基因公雞的染色體形態(tài)結(jié)構(gòu)，了解轉(zhuǎn)基因雞染色體形態(tài)變化特征。

1　試驗(yàn)材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

成年轉(zhuǎn)基因公雞(經(jīng)檢測(cè)含有外源基因p53)和非轉(zhuǎn)基因公雞由河南科技大學(xué)試驗(yàn)?zāi)翀?chǎng)提供，品種為海蘭褐殼蛋雞。5～10日齡的轉(zhuǎn)基因公雞(經(jīng)檢測(cè)含有外源基因p53)和非轉(zhuǎn)基因公雞由洛陽(yáng)市優(yōu)質(zhì)禽類遺傳繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，品種為海蘭褐殼蛋雞。

1.2主要試劑與儀器

組織培養(yǎng)液1640，北京賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司；植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)和秋水仙堿，北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；超凈工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司；800-電動(dòng)離心機(jī)，金壇市新航儀器廠；數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；雙目顯微鏡，上海彼愛(ài)姆光學(xué)儀器制造公司；恒溫培養(yǎng)箱，上海賀得實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法制備染色體標(biāo)本片

將4mL組織培養(yǎng)液1640、0.032gNaHCO3粉末、1mL胎牛血清、1mg/mL的PHA0.833mL、500IU/mL的肝素鈉0.005mL和適量雙抗，一并加入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的NaHCO3溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)液pH值為7.2～7.4。用生物濾膜過(guò)濾并分裝于滅過(guò)菌的培養(yǎng)瓶中，蓋緊瓶塞。用肝素抗凝劑潤(rùn)濕注射器管壁，從雞翅下靜脈采血1mL，在約5mL培養(yǎng)基中加入全血0.3～0.5mL，置于39 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)56～72h。培養(yǎng)結(jié)束前2～3h，加入秋水仙堿。培養(yǎng)結(jié)束后，經(jīng)過(guò)低滲、預(yù)固定、固定、重復(fù)固定、滴片和染色等操作制備染色體標(biāo)本片，通過(guò)10×100倍油鏡鏡檢觀察。

1.3.2骨髓法制備染色體標(biāo)本片

取5～10日齡的轉(zhuǎn)基因雛雞，稱其質(zhì)量，后腹腔注射20μg/g秋水仙堿，處理2.0～2.5h。心臟壓迫法猝死雛雞，取整條雞腿，去毛皮及其肌肉組織，取其股骨，剪去股骨兩端，用10mL注射器抽取0.075mol/L的KCl溶液約5mL，反復(fù)沖洗股骨骨髓腔直至骨髓腔變白。以10mL玻璃離心管盛接細(xì)胞懸液，1 000r/min離心10min，棄上清液。標(biāo)本片的制作同外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法。

1.3.3染色體核型分析方法

在10×100倍油鏡下各隨機(jī)選擇50個(gè)染色體分散相良好的細(xì)胞，觀察染色體的條數(shù)，最后得出轉(zhuǎn)基因雞和對(duì)照組雞的染色體數(shù)目。再分別選擇10個(gè)分散相良好的中期染色體，進(jìn)行攝影，照片放大，打印，用游標(biāo)卡尺直接測(cè)量前10對(duì)大染色體長(zhǎng)度、長(zhǎng)臂長(zhǎng)度和短臂長(zhǎng)度。通過(guò)文獻(xiàn)[7]中的方法計(jì)算前10對(duì)大染色體的相對(duì)長(zhǎng)度、臂比值和著絲粒指數(shù)，對(duì)染色體進(jìn)行核型分析。

圖1　外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法制備的轉(zhuǎn)基因雞染色體標(biāo)本片

圖2　骨髓法制備的轉(zhuǎn)基因雞染色體標(biāo)本片

2　結(jié)果與分析

2.1染色體標(biāo)本片的制備

2.1.1外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法制備染色體標(biāo)本片

在轉(zhuǎn)基因雞外周血培養(yǎng)過(guò)程中，PHA的用量、秋水仙堿的用量、作用時(shí)間和溫度對(duì)其淋巴細(xì)胞的增殖和分裂尤為重要。通過(guò)濃度梯度的設(shè)置，確定試驗(yàn)所用PHA的質(zhì)量濃度為0.18mg/mL,秋水仙堿的處理時(shí)間為3h、質(zhì)量濃度為0.05μg/mL,培養(yǎng)溫度為(39.0±0.5) ℃,總培養(yǎng)時(shí)間為 72h，成功制備出了轉(zhuǎn)基因雞的染色體標(biāo)本片，如圖1所示。從圖1中可以看到：轉(zhuǎn)基因雞染色體的大致形態(tài)及長(zhǎng)度，但無(wú)法判斷其著絲粒的具體位置，不能進(jìn)行有效的染色體核型分析及核型圖的制備。

2.1.2骨髓法制備染色體標(biāo)本片

在利用骨髓法制備轉(zhuǎn)基因雞的染色體標(biāo)本片中，秋水仙堿的用量和作用時(shí)間對(duì)是否能得到大量處于分裂中期的細(xì)胞有很大影響。經(jīng)過(guò)濃度梯度的設(shè)置，確定秋水仙堿的用量為20μg/g，處理活體雛雞的時(shí)間為2h，得到大量處于分裂中期的骨髓細(xì)胞，且染色體形態(tài)清晰，分散相良好，標(biāo)本片如圖2所示。通過(guò)圖2可以清楚看到：轉(zhuǎn)基因雞的染色體形態(tài)和著絲粒的位置，可以進(jìn)行后續(xù)的染色體核型分析和核型圖的繪制。

采用兩種不同的方法制備雞染色體標(biāo)本片，對(duì)試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)條件和制片結(jié)果比較得出：骨髓法制備雞染色體標(biāo)本片比外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法制備雞染色體標(biāo)本片更有優(yōu)勢(shì)。

由于轉(zhuǎn)基因雞的數(shù)量有限，本試驗(yàn)采用骨髓法制備了轉(zhuǎn)基因公雞和非轉(zhuǎn)基因公雞的染色體標(biāo)本片，并進(jìn)行了染色體核型分析。

2.2二倍體(2n)細(xì)胞染色體數(shù)目

本試驗(yàn)隨機(jī)選取轉(zhuǎn)基因公雞和非轉(zhuǎn)基因公雞的骨髓細(xì)胞各50個(gè)，觀察并計(jì)算每個(gè)骨髓細(xì)胞的染色體數(shù)目，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可以看出:轉(zhuǎn)基因公雞的染色體數(shù)目2n=78；非轉(zhuǎn)基因公雞的染色體數(shù)目2n=78。

表1　轉(zhuǎn)基因公雞和非轉(zhuǎn)基因公雞骨髓細(xì)胞染色體數(shù)目

2.3染色體核型分析

對(duì)轉(zhuǎn)基因公雞和非轉(zhuǎn)基因公雞的前10對(duì)大染色體(包括1對(duì)性染色體)進(jìn)行了染色體長(zhǎng)度、長(zhǎng)臂長(zhǎng)度和短臂長(zhǎng)度的測(cè)量。分別選取了10個(gè)分散相相對(duì)良好的分裂相進(jìn)行測(cè)量，并求其均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，對(duì)照文獻(xiàn)[7]的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)轉(zhuǎn)基因公雞和非轉(zhuǎn)基因公雞的染色體核型進(jìn)行分類，結(jié)果如表2和表3所示。

注：“Z”為單條性染色體；“m”為中著絲粒；“t”為端著絲粒；“sm”為亞中央著絲粒。

表3　非轉(zhuǎn)基因公雞的大染色體核型特征(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)

注：“Z”為單條性染色體；“m”為中著絲粒；“t”為端著絲粒；“sm”為亞中央著絲粒。

由表2的結(jié)果可以確定轉(zhuǎn)基因公雞的前10對(duì)大染色體的染色體形態(tài)，其中，1 號(hào)染色體、2 號(hào)染色體和1對(duì)性染色體(ZZ)為中央著絲粒(m)染色體，3號(hào)染色體為端著絲粒(t)染色體，4號(hào)染色體為亞中央著絲粒(sm)染色體，6～10號(hào)染色體為端著絲粒(t)染色體。由表3的結(jié)果可以確定非轉(zhuǎn)基因公雞的10對(duì)大染色體的染色體形態(tài)，其中，1 號(hào)染色體、2 號(hào)染色體和1對(duì)性染色體(ZZ)為中央著絲粒(m)染色體，3號(hào)染色體為端著絲粒(t)染色體，4號(hào)染色體為亞中央著絲粒(sm)染色體，6～10號(hào)染色體為端著絲粒(t)染色體。

由表2和表3可知：轉(zhuǎn)基因公雞的單條性染色體(Z)的平均相對(duì)長(zhǎng)度為(10.32±0.63)%，非轉(zhuǎn)基因公雞的單條性染色體(Z)的平均相對(duì)長(zhǎng)度為(10.26±0.26)%，差異不大。其余9對(duì)常染色的平均相對(duì)長(zhǎng)度也無(wú)明顯差異。

根據(jù)表2和表3的測(cè)量結(jié)果，分別繪制了轉(zhuǎn)基因公雞和非轉(zhuǎn)基因公雞的染色體核型圖，結(jié)果如圖3和圖4所示。通過(guò)圖3和圖4可以更加直觀地觀察到轉(zhuǎn)基因公雞和非轉(zhuǎn)基因公雞前10對(duì)大染色體的核型形態(tài)特征。

圖3轉(zhuǎn)基因公雞染色體核型圖圖4非轉(zhuǎn)基因公雞染色體核型圖

3　討論

3.1雞染色體標(biāo)本片制備方法

在雞外周血培養(yǎng)過(guò)程中，通過(guò)數(shù)次的重復(fù)培養(yǎng)，成功制備出了轉(zhuǎn)基因雞的染色體標(biāo)本片。培養(yǎng)過(guò)程中各試劑的用量與處理時(shí)間參照文獻(xiàn)[8-10]稍做改進(jìn)，在其基礎(chǔ)上探索更適合轉(zhuǎn)基因雞的培養(yǎng)方法。因?yàn)槭遣煌碾u種，對(duì)培養(yǎng)環(huán)境的要求會(huì)稍有不同。本文雖用外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法成功制備出了染色體標(biāo)本片，但制片質(zhì)量不佳。文獻(xiàn)[11]曾指出在雞染色體研究中不常采用此法，因其對(duì)設(shè)備要求嚴(yán)格，操作復(fù)雜，易污染。可進(jìn)一步探究更加適合該轉(zhuǎn)基因雞的外周血培養(yǎng)方法。

在骨髓法的探索中，采用 5～10 日齡的雛雞，秋水仙堿用量 20μg/g，秋水仙堿處理活體最佳時(shí)間為2h，與文獻(xiàn)[12]的試驗(yàn)條件最接近；與文獻(xiàn)[13]報(bào)道所用15日齡雛雞，秋水仙堿用量3μg/g，處理活體3h不一致；與文獻(xiàn)[14]報(bào)道所用4月齡育成雞不一致；與文獻(xiàn)[15-16]報(bào)道秋水仙堿用量分別為10μg/g和2μg/g不一致。造成這些差異的原因可能是不同雞種和不同日齡的雞所適應(yīng)的最佳處理時(shí)間和秋水仙堿用量不同。

無(wú)論是外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法還是骨髓法，都需要經(jīng)過(guò)離心、低滲、預(yù)固定、固定、重復(fù)固定、滴片和染色等過(guò)程，通過(guò)不斷地探究找出同時(shí)適合兩種方法的最佳處理時(shí)間。每次以1 000r/min離心10min；低滲最佳溫度為 39 ℃，最佳處理時(shí)間為35min；預(yù)固定所用新配置固定液為1mL，時(shí)間為2min；固定的最佳時(shí)間為 30min。滴片的高度一定要大于30cm，才能得到大量分散良好的染色體標(biāo)本，便于后續(xù)的觀察與測(cè)量。染色時(shí)間為30min，染色時(shí)間過(guò)短會(huì)造成染色體著色不明顯，不利于觀察。

3.2染色體核型

3.2.1染色體數(shù)目

本試驗(yàn)所用轉(zhuǎn)基因公雞的二倍體染色體數(shù)目2n=78的細(xì)胞占所觀察細(xì)胞總數(shù)的78%，所得結(jié)果與文獻(xiàn)[17-19]研究結(jié)果接近。一般情況下認(rèn)為：染色體眾數(shù)的細(xì)胞占被觀察細(xì)胞總數(shù)的75%以上，便可以確定試驗(yàn)對(duì)象的二倍體染色體數(shù)目[20]。對(duì)于染色體2n≠78的細(xì)胞，可能是由于雞的染色體中微小染色體較多，不當(dāng)?shù)拇荡蚝碗x心都會(huì)造成染色體的丟失，并且容易發(fā)生羅伯遜易位，滴片時(shí)微小染色體又極易隨液體漂流而造成丟失，此外，還容易將部分未溶解的染料顆粒及其他雜質(zhì)誤認(rèn)為是微小染色體。

3.2.2染色體形態(tài)

本試驗(yàn)得出該轉(zhuǎn)基因公雞與非轉(zhuǎn)基因公雞的染色體核型并無(wú)明顯差異，說(shuō)明外源基因p53對(duì)公雞自身的染色體核型沒(méi)有太大影響。此外，由于外源基因p53結(jié)構(gòu)非常小，理論上能與雞的染色體結(jié)合形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，因?yàn)殡u的染色體只有前10對(duì)為大染色體，其余都為微小染色體。試驗(yàn)結(jié)果為：該轉(zhuǎn)基因公雞的1 號(hào)染色體、2 號(hào)染色體和1對(duì)性染色體(ZZ)均為中央著絲粒(m)染色體，3號(hào)染色體為端著絲粒(t)染色體， 4號(hào)染色體為亞中央著絲粒(sm)染色體，6～10號(hào)染色體都為端著絲粒(t)染色體。這與其他文獻(xiàn)研究結(jié)果基本相似，也存在著一些不同。文獻(xiàn)[21]指出雞的1 號(hào)染色體為亞中央著絲粒(sm)染色體；文獻(xiàn)[17-18，22]指出2號(hào)染色體為亞中央著絲粒(sm)染色體；文獻(xiàn)[12，22-23]認(rèn)為7號(hào)染色體為亞中央著絲粒(sm)染色體；文獻(xiàn)[24]指出 9 號(hào)染色體為亞中央著絲粒(sm)染色體。造成這些不同的原因可能與雞的品種不同有關(guān)。

4　結(jié)論

(1)成功制備出了轉(zhuǎn)基因公雞和非轉(zhuǎn)基因公雞處于分裂中期且分散良好、形態(tài)清晰的染色體標(biāo)本片，為含有外源基因p53的轉(zhuǎn)基因雞的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

(2)含有外源基因p53轉(zhuǎn)基因公雞的染色體2n=78。染色體核型為：1 號(hào)染色體、2 號(hào)染色體和一對(duì)性染色體(ZZ)均為中央著絲粒(m)染色體，3號(hào)染色體為端著絲粒(t)染色體， 4號(hào)染色體為亞中央著絲粒(sm)染色體，6～10號(hào)染色體均為端著絲粒(t)染色體。

(3)含有外源基因p53的轉(zhuǎn)基因公雞染色體的相對(duì)長(zhǎng)度、臂比值、著絲粒指數(shù)與非轉(zhuǎn)基因公雞基本一致，說(shuō)明轉(zhuǎn)基因公雞與非轉(zhuǎn)基因公雞的染色體核型沒(méi)有明顯差異。

[1]王令,張濤,尹亞軍.逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因雞研究進(jìn)展[J].中國(guó)家禽,2015,37(14):44-49.

[2]宋政,?？?孫曉先,等.轉(zhuǎn)基因雞輸卵管生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥用蛋白研究進(jìn)展[J].中國(guó)家禽,2013,35(19):38-42.

[3]靳鍇,汪怡臨,左其生,等.睪丸注射Mx-NA雙基因制備抗病轉(zhuǎn)基因雞的研究[J].中國(guó)家禽，2014,36(14):8-12.

[4]李林鳳,浦亞斌,宮雪蓮,等.雞鴨異種間轉(zhuǎn)基因嵌合體的制備[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2010,41(1):10-15.

[5]SOUSSIT,CANBONFC,MAYP.Structuralaspectsofthep53proteininrelationintogeneevlution[J].Oncogene,1990,5(7):945-952.

[6]李振紅,雷雪芹,徐廷生,等.早期肺癌病人血液中p53的克隆及其pEGFP-N1-p53的構(gòu)建[J].河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2011,32(2):56-59.

[7]LEVENA,FREDGEK,SANDBERGA.Nomentclatureofgreathornedowls(Bubo virginianus)[J].Cytogeneticsandcellgenetics,1964,28:79-86.

[8]孫永進(jìn),嵇寶華,韓威,等.藏雞、茶花雞染色體核型分析[J].中國(guó)家禽,2007,29(13):16-18.

[9]朱云芬,吳信生,徐琪,等.河南斗雞染色體核型及G帶的研究[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2007,34(3):77-81.

[10]李紅燕,王金富,劉凱.暗腹雪雞染色體的核型分析[J].石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2006,24(3):294-298.

[11]王偕根,陳國(guó)宏,張學(xué)余,等.鹿苑雞核型及其與生產(chǎn)性能的相關(guān)性研究[J].中國(guó)家禽,2003,25(6):7-9.

[12]趙淑娟,雷雪芹,徐廷生,等.盧氏綠殼蛋雞染色體核型與G帶分析[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2009,37(12):38-44.

[13]徐云龍,王嘉福,冉雪琴.珍珠雞與家雞的染色體核型比較分析[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(4):159-161.

[14]鄭喜邦,何寶祥.禽類染色體制備方法的比較研究[J].細(xì)胞生物學(xué)雜志,2003,25(4):254-257.

[15]黃燕,趙小平,余紅,等.動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本制備失敗的原因分析[J].生物學(xué)通報(bào),2006,41(1):52-53.

[16]漢麗梅,潘英樹,張玉靜.雞染色體標(biāo)本制備技術(shù)條件的優(yōu)化[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2005,41(8):19-20.

[17]程光潮,吳麗城.家雞染色體的制備及組型觀察[J].遺傳,1981,3(1):17-19.

[18]劉蓓一,李國(guó)祥,秦楓,等.固始雞核型、G帶的研究[J].中國(guó)家禽,2006,28(6):16-19.

[19]陳國(guó)宏,李碧春,徐琪,等.仙居雞染色體G和Ag-NORs的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2004,35(2):141-145.

[20]劉友清,傅佩勝,陳艷卿.壽光雞染色體的研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué),1993(2):13-15.

[21]李軍,趙金良,劉宏賽,等.麻雀研究的新發(fā)現(xiàn)[J].遺傳,1994,16(2):20-24.

[22]曾養(yǎng)志.家雞和原雞的染色體及G帶帶型比較研究[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1987,2(2):57-65.

[23]嵇寶華,湯道玲,盧克倫.中國(guó)地方雞種染色體研究進(jìn)展[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2004(5):4-5.

[24]徐琪,謝芳,李碧春.禽類染色體制備及其在育種中的應(yīng)用[J].動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué),2003,20(2):13-15.

河南省基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃基金項(xiàng)目(072300430010);洛陽(yáng)市重點(diǎn)科技計(jì)劃基金項(xiàng)目(1101033A)

李鵬姍(1991-),女,河南汝陽(yáng)人,碩士生;雷雪芹(1962-),女,通信作者,河南洛寧人,教授,博士,碩士生導(dǎo)師,主要從事動(dòng)物遺傳資源與分子生物學(xué)方面的教學(xué)和科研.

2016-03-28

1672-6871(2016)06-0077-05

10.15926/j.cnki.issn1672-6871.2016.06.016

S831

A