陳蓉，周華友，閆清雅

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，廣東省中醫(yī)院婦科，廣東廣州　510120）

益腎填精助孕方結(jié)合免疫治療習(xí)慣性流產(chǎn)療效觀察

陳蓉，周華友，閆清雅

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，廣東省中醫(yī)院婦科，廣東廣州510120）

【目的】探究益腎填精助孕方結(jié)合淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療習(xí)慣性流產(chǎn)（HA）封閉抗體（BA）陰性患者的臨床療效。【方法】將139例BA陰性的HA患者隨機(jī)分為治療組70例與對(duì)照組69例。對(duì)照組給予單純淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療，治療組給予淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫結(jié)合益腎填精助孕方（仙芪益真膠囊和仙子益真膠囊）治療。觀察2組BA轉(zhuǎn)陽率及安胎療效?！窘Y(jié)果】（1）BA轉(zhuǎn)陽率比較：治療后，治療組的BA轉(zhuǎn)陽率為82.86%，優(yōu)于對(duì)照組的60.87%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（2）安胎療效比較：治療后，治療組的總有效率為87.14%，優(yōu)于對(duì)照組的66.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?！窘Y(jié)論】對(duì)BA陰性的HA患者用益腎填精助孕方結(jié)合淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療較單純淋巴細(xì)胞免疫治療更有效。

習(xí)慣性流產(chǎn)；封閉抗體；淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療；益腎填精助孕方；仙芪益真膠囊；仙子益真膠囊

習(xí)慣性流產(chǎn)（habitual abortion，HA）指連續(xù)自然流產(chǎn)3次及3次以上者。國(guó)內(nèi)外報(bào)道原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)約占流產(chǎn)患者的40%～70%［1］。此類患者往往經(jīng)歷多次妊娠和流產(chǎn)，給患者身心帶來極大痛苦，而且由此可能導(dǎo)致家庭不和與婚姻破裂。HA病因除染色體異常、黃體功能不足、甲狀腺功能減退、子宮發(fā)育不良等因素外，還有一部分患者流產(chǎn)原因不明。有研究表明原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)的發(fā)生與免疫因素密切相關(guān)［2］。免疫因素確切的HA患者，其發(fā)病機(jī)理還未完全明了。本院前期臨床研究表明益腎填精助孕方治療HA療效顯著，但在免疫治療療效方面缺乏實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。本研究采用益腎填精助孕方結(jié)合淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療HA，并與單純使用淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療進(jìn)行療效比較，旨在對(duì)HA病因及中醫(yī)藥療效做進(jìn)一步深入研究?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象本研究病例均為2014年9月～2016年1月在廣東省中醫(yī)院婦科門診接受治療的HA患者，共139例。采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者隨機(jī)分為治療組70例和對(duì)照組69例。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)（1）西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《婦產(chǎn)科學(xué)》［3］擬定：連續(xù)自然流產(chǎn)3次或3次以上者。（2）中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中醫(yī)婦科學(xué)》［4］擬定：妊娠期出現(xiàn)陰道少量流血，時(shí)下時(shí)止，腰酸腹痛墜脹。

1.3納入標(biāo)準(zhǔn)來本院就診的139例患者，均經(jīng)以下篩查：①血清中封閉抗體（blocking antibody，BA）陰性；②女方行B超及常規(guī)的婦科檢查，排除生殖器解剖結(jié)構(gòu)異常及生殖道感染；③內(nèi)分泌檢查（性激素）基本正常；④夫妻雙方染色體核型篩查陰性；⑤女方抗精子抗體、抗內(nèi)膜抗體、抗磷脂抗體等免疫性抗體檢測(cè)為陰性；⑥男方精液檢查基本正常，性生活正常；⑦夫妻雙方除外肝炎、艾滋病、梅毒等傳染病，肝腎功能和血常規(guī)正常；⑧所選患者確診為習(xí)慣性流產(chǎn)，所有患者及家屬均簽署了知情同意書。

1.4治療方法

1.4.1對(duì)照組單純給予淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療。淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療：首選配偶血液，如配偶有傳染性疾病，則選用無血緣關(guān)系第三方健康他人的血液。無菌條件下抽取供者靜脈血8～10 mL，肝素抗凝，用10 mL生理鹽水稀釋；沿離心管壁緩慢加到等量淋巴細(xì)胞分離液上，旋緊管蓋，2 000 r/min，離心30 min；吸取含有淋巴細(xì)胞的白膜層，加入適量無菌生理鹽水重復(fù)洗滌3次；小心將白膜層重懸并調(diào)整外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）濃度為2×107～4×107個(gè)/mL，淋巴細(xì)胞比例占75%以上，懸液總量約1～2 mL，準(zhǔn)備皮下注射。整個(gè)過程應(yīng)嚴(yán)格無菌操作。用皮內(nèi)注射的方法，注入女方前臂皮下6點(diǎn)，左右手臂交替進(jìn)行。注射后24 ～28 h，局部可出現(xiàn)直徑0.2～0.6 cm大小不等的紅潤(rùn)硬結(jié)，以后逐漸消失。孕前4次為1個(gè)療程，間隔3～4周治療1次，1個(gè)療程后復(fù)查BA，陰性者繼續(xù)下一個(gè)療程治療，BA轉(zhuǎn)陽者建議在6個(gè)月之內(nèi)妊娠。確診妊娠后，前3個(gè)月再加強(qiáng)行免疫治療2次，間隔2～3周。如果半年內(nèi)未孕，再適當(dāng)延長(zhǎng)免疫治療時(shí)間。

1.4.2治療組給予淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫結(jié)合益腎填精助孕方治療。（1）淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療同對(duì)照組。（2）益腎填精助孕方治療：使用本院研制的仙芪益真膠囊（益真I號(hào)）［由巴戟天、淫羊藿、黃芪、當(dāng)歸、枸杞子、川續(xù)斷等組成，經(jīng)精制加工提取制成顆粒裝膠囊，每粒含生藥1.09 g，批準(zhǔn)文號(hào)為（99）穗衛(wèi)醫(yī)制（?。┳值贐-032號(hào)］，每日3次，每次3粒。仙子益真膠囊（益真II號(hào)）［由熟地黃、女貞子、旱蓮草、川續(xù)斷、菟絲子、淫羊藿等組成，經(jīng)精制加工提取制成顆粒裝膠囊，每粒含生藥1.65 g，批準(zhǔn)文號(hào)為（99）穗衛(wèi)醫(yī)制（?。┳值贐-033號(hào)］，每日3次，每次3粒。2種膠囊交替口服，非經(jīng)期使用，經(jīng)期停服。療程同對(duì)照組。

1.5療效標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》［5］及《中醫(yī)病證診斷和療效標(biāo)準(zhǔn)》［6］擬定。治愈：陰道流血停止，腰腹疼痛消失，子宮大小與孕周相符，B超檢查胚胎發(fā)育正常。顯效：陰道流血停止，腰酸腹痛明顯改善，子宮大小與孕周相符，B超檢查胚胎發(fā)育正常。有效：陰道流血停止，腹脹痛、腰酸墜脹癥狀有所改善，子宮大小與孕周相符，B超檢查胚胎發(fā)育正常。無效：經(jīng)治療，出血、腹痛、腰酸痛同前或加重，胚胎停止發(fā)育。

1.6統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用率或構(gòu)成比表示，組間比較用 χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，若方差齊性及服從正態(tài)分布，組間比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.12組患者基線資料比較表1結(jié)果顯示：2組HA患者的年齡及流產(chǎn)次數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明2組的基線特征基本一致，具有可比性。

表1　2組患者年齡及流產(chǎn)次數(shù)比較Table 1　Comparison of age and abortion frequency of both groups?。ā纒）

表1　2組患者年齡及流產(chǎn)次數(shù)比較Table 1　Comparison of age and abortion frequency of both groups　（±s）

組別對(duì)照組治療組N 69 70 N年齡/歲30.3±3.1 31.0±3.3 N流產(chǎn)/次3.0±1.1 3.1±1.3

2.22組患者治療后BA轉(zhuǎn)陽率比較表2結(jié)果顯示：治療組的BA轉(zhuǎn)陽率為82.86%，優(yōu)于對(duì)照組的60.87%，2組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.32組患者安胎療效比較表3結(jié)果顯示：治療組的總有效率為87.14%，優(yōu)于對(duì)照組的66.67%，2組安胎療效比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2　2組患者治療后BA轉(zhuǎn)陽率比較Table 2　Comparison of rate for BA turning positive in both groups after treatment

表3　2組患者安胎療效比較Table 3　Comparison of anti-abortion effect of both groups　n（p/%）

3　討論

從現(xiàn)代生殖免疫的觀點(diǎn)來看，HA的發(fā)生是母胎之間免疫狀態(tài)失衡導(dǎo)致免疫排斥的結(jié)果［7］，是由于患者對(duì)胚胎抗原免疫反應(yīng)不足，即患者由于對(duì)胚胎同種異體抗原無法產(chǎn)生足夠的BA而使胚胎得不到免疫防護(hù)而流產(chǎn)。正常妊娠時(shí)，夫婦人類白細(xì)胞抗原（HLA）不相容，胚胎所帶的父系HLA能刺激母體免疫系統(tǒng)并產(chǎn)生抗配偶淋巴細(xì)胞的特異性IgG 抗HLA，從而封閉母體淋巴細(xì)胞對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，保護(hù)胚胎或胎兒免受排斥，被認(rèn)為是維持妊娠所必需的BA。體外研究顯示，妊娠時(shí)母體可產(chǎn)生致敏T細(xì)胞，它能破壞胚胎細(xì)胞，但致敏T細(xì)胞的殺傷功能可被移植，然而習(xí)慣性流產(chǎn)的婦女80%～90%測(cè)不到這種特異性的BA，體內(nèi)存在未被抑制的細(xì)胞。這些細(xì)胞可直接作用于胚胎，或通過釋放炎性介質(zhì)間接損害胎兒或胎盤，從而導(dǎo)致流產(chǎn)發(fā)生。本課題組經(jīng)過多年的臨床試驗(yàn)和研究發(fā)現(xiàn)，淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫療法能有效地阻止BA缺乏，且未發(fā)現(xiàn)其對(duì)母兒有明顯副反應(yīng)。

本院院內(nèi)制劑益腎填精助孕方經(jīng)過多年的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，為婦科調(diào)經(jīng)助孕效果顯著的經(jīng)驗(yàn)方，其方包括仙芪益真膠囊（益真I號(hào)）和仙子益真膠囊（益真Ⅱ號(hào)）。仙芪益真膠囊以巴戟天、淫羊藿溫補(bǔ)腎陽，暖煦胞宮；黃芪補(bǔ)氣生血，當(dāng)歸養(yǎng)血活血，二者相配為補(bǔ)氣生血配伍藥對(duì)；枸杞子為植物種仁，味厚質(zhì)潤(rùn)，以補(bǔ)髓填精見長(zhǎng)；川續(xù)斷益氣養(yǎng)血，補(bǔ)陰攝陽，使其“陽得陰助而生化無窮”。仙子益真膠囊以熟地黃合二至丸養(yǎng)血滋陰，填精益髓；其中川續(xù)斷歸肝腎經(jīng)，補(bǔ)腎強(qiáng)膝；菟絲子補(bǔ)益肝腎；淫羊藿溫腎壯陽，補(bǔ)陽益陰，使其“陰得陽升而泉源不竭”。全方共奏陰陽平補(bǔ)，益腎填精助孕之功效。

益腎填精助孕方，臨床上仙子益真膠囊和仙芪益真膠囊序貫應(yīng)用，共奏溫腎助陽、益精養(yǎng)血種子之功效。該法順應(yīng)腎中陰陽消長(zhǎng)變化和卵巢間周期性變化規(guī)律，根據(jù)月經(jīng)周期不同階段針對(duì)性用藥，促進(jìn)腎中陰陽平衡及其協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腎—天癸—沖任—胞宮軸的功能趨向正常，全面改善下丘腦—垂體—卵巢軸的內(nèi)分泌功能，促進(jìn)卵泡發(fā)育，從而健全黃體功能以助孕。腎氣充盛，腎精充足，胎元自安。

益真Ⅰ號(hào)補(bǔ)元陽、Ⅱ號(hào)益真陰，既助腎陽又助腎陰，達(dá)到陰陽互補(bǔ)，互相平衡。補(bǔ)腎是調(diào)經(jīng)種子的大法。徐珉等［8］觀察了補(bǔ)腎中藥益真Ⅰ、Ⅱ號(hào)膠囊對(duì)高齡不孕婦女圍排卵期卵巢間質(zhì)血流的影響，圍排卵期卵巢間質(zhì)血流的改變可間接反映卵子質(zhì)量、卵巢儲(chǔ)備的提高。因而認(rèn)為補(bǔ)腎中藥具有改善卵子質(zhì)量，提高卵巢儲(chǔ)備的作用。顧春曉等［9］在補(bǔ)腎法治療黃體不健性不孕癥的臨床研究中得出結(jié)論：補(bǔ)腎中藥周期療法是治療黃體不健性不孕癥的有效療法，可促進(jìn)腎中陰陽平衡及其協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)化，達(dá)到健全黃體功能以助孕的目的。

本研究通過觀察益腎填精助孕方結(jié)合淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療習(xí)慣性流產(chǎn)封閉抗體陰性患者的臨床療效，發(fā)現(xiàn)在中醫(yī)補(bǔ)腎及免疫療法共同調(diào)節(jié)下，其可以提高不明原因的習(xí)慣性流產(chǎn)患者的再次妊娠成功率，是一種高效可行的方法，易于臨床操作，且未發(fā)現(xiàn)明顯的副作用，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)我們還需擴(kuò)大樣本量，以進(jìn)一步深入了解其具體的效應(yīng)機(jī)制。

［1］林其德.原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2003，38（8）：48l.

［2］楊素娟，江靜，郝桂敏，等.主動(dòng)免疫治療原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)的臨床研究［J］.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2007，23（5）：300.

［3］樂杰.婦產(chǎn)科學(xué)［M］.7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：85.

［4］馬寶璋.中醫(yī)婦科學(xué)［M］.6版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2001：127.

［5］鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（試行）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002：230-231.

［6］國(guó)家中醫(yī)藥管理局.中醫(yī)病證診斷和療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.南京：南京大學(xué)出版社，1994：72.

［7］顏衛(wèi)華，范麗安，楊鈺琴，等.HLA-G多態(tài)性與原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)相關(guān)性研究［J］.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2002，18（2）：120.

［8］徐珉，黃健玲，司徒儀，等.補(bǔ)腎中藥益真Ⅰ、Ⅱ號(hào)膠囊對(duì)高齡不孕婦女圍排卵期卵巢間質(zhì)血流的影響［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（7）：833.

［9］顧春曉，徐珉，李麗蕓.補(bǔ)腎法治療黃體不健性不孕癥30例臨床研究［J］.國(guó)醫(yī)論壇，2008，23（4）：18.

【責(zé)任編輯：陳建宏】

Clinical Observation of Habitual Abortion Patients Treated by Yishen Tianjing Zhuyun Prescription Together with Active Lymphocyte Immunotherapy

CHEN Rong，ZHOU Huayou，YAN Qingya
（Dept.of Gynecology of Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，the Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510120 Guangdong，China）

ObjectiveTo investigate the therapeutic effect of Yishen Tianjing Zhuyun Prescription（a Chinese herbal recipe consisting of Xianqi Yizhen Capsules and Xianzi Yizhen Capsules，having the actions of strengthening kidney-essence and promoting gestation）together with active lymphocyte immunotherapy for habitual abortion （HA）patients.Methods A total of 139 HA outpatients with negative blocking antibodies（BA）were randomly divided into treatment group（70 cases）and control group（69 cases）.The control group was treated only with active lymphocyte immunotherapy，while the treatment group was treated with Yishen Tianjing Zhuyun Prescription and active lymphocyte immunotherapy.Results（1）After treatment，the BA-positive rate was 82.86%in the treatment group and was 60.87%in control group，and there existed significant difference between the two groups（P＜0.05）.（2）The total anti-abortion effective rate was 87.14%in the treatment group and was 66.67%in control group，the difference being significant between the two groups（P＜0.05）. Conclusion Yishen Tianjing Zhuyun Prescription combined with active lymphocyte immunotherapy is more effective than active lymphocyte immunotherapy alone for the treatment of HA patients with negative BA.

habitual abortion；blocking antibody；active lymphocyte immunotherapy；Yishen Tianjing Zhuyun Prescription；Xianqi Yizhen Capsules；Xianzi Yizhen Capsules

R714.21；R271.9

A

1007-3213（2016）05-0642-03

10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2016.05.006

2016-04-06

陳蓉（1970-），女，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士；E-mail:13725499613@163.com

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào):2014807）