馬田田 張一凡 任雪 馮歡歡 徐彩紅

摘要：體外消化模型基于人體胃腸生理過(guò)程，在體外條件下模擬體內(nèi)消化吸收情況，用于預(yù)測(cè)或評(píng)價(jià)化合物的可消化性、釋放特性及結(jié)構(gòu)變化等研究。該模型具有簡(jiǎn)便易行的特點(diǎn)，因而在食品、藥品以及保健品等行業(yè)中的應(yīng)用越來(lái)越多。系統(tǒng)地介紹近年來(lái)蛋白質(zhì)、脂類和碳水化合物三大宏量營(yíng)養(yǎng)素體外消化模型的構(gòu)建，以及影響其構(gòu)建的重要因素，并總結(jié)該模型的優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍，為該領(lǐng)域的研究奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：體外消化模型；宏量營(yíng)養(yǎng)素；研究進(jìn)展

中圖分類號(hào)：R151 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2016）06-0057-03

體外消化模型（In vitro digestion model，IDM）是以人體胃腸生理情況為依據(jù)，采用適宜條件，體外模擬人體胃腸環(huán)境，并通過(guò)檢測(cè)目標(biāo)物質(zhì)的濃度變化，反映攝入物質(zhì)的生物利用情況。近幾年，IDM的研究越來(lái)越受到重視，這主要是因?yàn)轶w內(nèi)試驗(yàn)有許多缺點(diǎn)，如耗資多、效率低、重復(fù)性差和可比性低等[1]，而IDM具有簡(jiǎn)單、快速、耗資少等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛用于研究、檢測(cè)和評(píng)價(jià)食品、藥品及保健品等，如用于研究食物消化的穩(wěn)定性、腸道運(yùn)輸和代謝、預(yù)測(cè)食物中不同成分的生物利用率以及藥品緩釋等領(lǐng)域。但是，由于物質(zhì)體內(nèi)消化的復(fù)雜性，致使模型的建立存在一定的困難[2]，所以完善其模擬的準(zhǔn)確度和提高其與體內(nèi)情況的一致性問(wèn)題一直是該方面研究的焦點(diǎn)。

本課題參閱大量的文獻(xiàn)，以研究對(duì)象、酶的種類和體系復(fù)雜程度為分類標(biāo)準(zhǔn)，總結(jié)近年來(lái)關(guān)于蛋白質(zhì)、脂類、碳水化合物三大宏量營(yíng)養(yǎng)素的IDM，希望對(duì)IDM的建立、使用和改進(jìn)有所幫助，同時(shí)也為其在相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用提供一定的支持。

1 蛋白質(zhì)的體外消化模型

蛋白質(zhì)是一類具有復(fù)雜化學(xué)結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，是人體必需的宏量營(yíng)養(yǎng)素之一。國(guó)內(nèi)外對(duì)蛋白質(zhì)的IDM研究比較深入，主要是體外模擬蛋白質(zhì)在體內(nèi)的消化環(huán)境和過(guò)程，來(lái)測(cè)定其消化率，以此為指標(biāo)評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)的利用情況。

1.1 蛋白質(zhì)體外消化模型的依據(jù)

一般而言，食品蛋白質(zhì)水解為氨基酸和小肽后被吸收利用，未消化的蛋白質(zhì)不易被吸收。因?yàn)橥僖翰缓獾鞍椎乃饷?，所以體外模擬從胃開始，以小腸為主。由于食物在胃中停留時(shí)間短，蛋白質(zhì)不能完全消化；未被消化的蛋白質(zhì)在小腸中的胰液及腸粘膜細(xì)胞分泌的多種蛋白質(zhì)酶（主要是胰蛋白酶）和肽酶的聯(lián)合作用下，進(jìn)一步水解為氨基酸。人胃液主要含鹽酸、胃蛋白酶原、粘蛋白和內(nèi)因子，激活后的胃蛋白酶是消化蛋白質(zhì)的主要酶，其最適宜pH值為1.5～2.0。

1.2 蛋白質(zhì)體外消化模型的評(píng)定指標(biāo)

評(píng)價(jià)食物中蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值一般采用蛋白質(zhì)消化率（Protein digestibility，PD）作為指標(biāo)，該指標(biāo)反映了蛋白質(zhì)食物在消化道被分解和吸收的程度，計(jì)算時(shí)采用吸收的蛋白質(zhì)占攝入蛋白質(zhì)總量的百分比。研究發(fā)現(xiàn)食物PD受酶的種類及酶作用的順序和過(guò)程等因素影響，并且復(fù)合酶體系更符合體內(nèi)消化狀況[3]。

1.3 蛋白質(zhì)體外消化模型的研究方法

IDM中常采用蛋白酶來(lái)模擬人體食物蛋白質(zhì)的水解消化過(guò)程，主要有胃蛋白酶消化法、胃蛋白酶和胰蛋白酶消化法、多步酶促消化法、胃和十二指腸消化法等。1） 胃蛋白酶消化法。直接選用胃蛋白酶作為水解蛋白酶，該法所用的酶比較單一，操作步驟簡(jiǎn)單，但是胃蛋白酶達(dá)不到將某蛋白質(zhì)完全水解成氨基酸，因此該法測(cè)得的PD偏低。2） 胃蛋白酶和胰蛋白酶消化法。采用胃蛋白酶和胰蛋白酶作為水解蛋白酶，該法先在模擬胃酸性條件下，借助胃蛋白酶消化處理食物，而后用堿使酶鈍化，再在中性條件下用胰蛋白酶模擬腸的消化，該法可將已消化的成分與未消化的成分分別測(cè)定，能夠很好地反映食物蛋白質(zhì)在不同消化階段被消化的情況，測(cè)得的PD較高。3） 多步酶促消化法。一般采用胰蛋白酶、糜蛋白酶和肽酶的混合酶作為水解蛋白酶，由于混合酶的協(xié)同作用，能將蛋白質(zhì)充分水解，因此該法測(cè)得的PD相對(duì)較高，缺點(diǎn)是操作相對(duì)復(fù)雜，混合酶中3種酶的不同比例也會(huì)造成PD的改變[4]。4） 胃和十二指腸促消化法。采用人消化產(chǎn)生的胃和十二指腸汁液為介質(zhì)，直接測(cè)得PD率，該法測(cè)定的PD較高，但消化液的收集較難，而且蛋白酶的類別與活性受年齡差異、胃腸消化功能差異等因素的影響，導(dǎo)致試驗(yàn)的可重復(fù)性比較差，所以該法實(shí)際應(yīng)用較少。比較而言，胃蛋白酶和胰蛋白酶消化法，所用酶質(zhì)高易得，試驗(yàn)條件穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，操作較簡(jiǎn)單，因此較為實(shí)用。

2 脂類的體外消化模型

脂類是人體能量的重要來(lái)源，一般將脂肪和類脂總稱為脂類。脂類是脂溶性維生素和人體一些重要生理活性物質(zhì)的載體。目前，脂類IDM在食品中的研究和應(yīng)用匱乏，很大程度上制約了脂類作為營(yíng)養(yǎng)素運(yùn)載體系的研究和應(yīng)用。

2.1 脂類體外消化模型的依據(jù)

食物在口腔中已經(jīng)開始消化脂肪，該過(guò)程主要由唾液分泌的脂肪酶進(jìn)行，它可水解食物中膳食脂肪的一小部分。膳食脂肪在胃內(nèi)的消化很有限，小腸才是脂肪消化的主要場(chǎng)所。該消化過(guò)程首先是膽囊分泌膽汁，膽汁開始乳化脂肪為甘油三酯和游離脂肪酸，再借助胰腺和小腸分泌的脂肪酶來(lái)水解單甘酯。磷脂的消化吸收與甘油三酯相似。

2.2 脂類體外消化模型的評(píng)定指標(biāo)

脂類水解速率是評(píng)價(jià)脂類IDM的重要指標(biāo)，是指脂類在有水條件下，在酸、鹽的作用下水解為游離脂肪酸的速度。食物中存在多種形式的脂類，主要有活性脂質(zhì)、結(jié)構(gòu)脂肪、脂質(zhì)乳液等。大多數(shù)脂肪在口腔、胃或小腸中由于受到機(jī)械力、表面活性劑和穩(wěn)定劑的作用，而被分解為水包油乳化液。因此，飲食攝入的脂肪，其消化是以水包油型乳液進(jìn)行的，這是脂質(zhì)消化不同于其他物質(zhì)的主要特點(diǎn)[5]。

2.3 脂肪體外消化模型的研究方法

脂肪在消化過(guò)程中受到多種因素的影響，如溫度、介質(zhì)pH值、膽汁鹽濃度、Ca2+濃度、酶的種類及用量等。Anette Mullertz等人在建立脂類的IDM時(shí)采用胰脂酶作為水解酶，試驗(yàn)中用1 mol/L的NaOH調(diào)節(jié)介質(zhì)pH值，溫度37 ℃，消化溶液中加入膽汁鹽和Ca2+溶液，研究發(fā)現(xiàn)，可通過(guò)控制膽汁鹽和Ca2+濃度以及酯酶活性控制脂類水解率來(lái)構(gòu)建一種可行的脂類IDM。目前，脂類IDM在食品方面的研究尚需完善，Hermida等人指出脂肪在胃腸消化后結(jié)構(gòu)和行為少有關(guān)注，理論也不健全[6]。

3 碳水化合物的體外消化模型

碳水化合物（Carbohydrate，CD）是一類具有醛或酮多羥基化合物，是供應(yīng)人體能量的主要物質(zhì)，也是構(gòu)成人體組織的重要材料。近年來(lái)，由于CD攝入量不當(dāng)造成的疾病，如糖尿病等，引發(fā)了人們對(duì)CD消化和吸收的關(guān)注。飲食指標(biāo)以碳水化合物與血糖生成指數(shù)（Glycemic index，GI）的特性關(guān)系為重要參考。食品的來(lái)源、加工方式差異等因素都會(huì)顯著影響碳水化合物的血糖響應(yīng)值，因此，WHO 建議有必要測(cè)定每種食物的GI值。但GI值的測(cè)定易受倫理、個(gè)體差異和技術(shù)等因素制約。因此，通過(guò)完善碳水化合物的IDM，進(jìn)而評(píng)價(jià)其GI，已經(jīng)成為近年來(lái)研究的重點(diǎn)[7]。

3.1 碳水化合物體外消化模型的依據(jù)

由于食物在口中停留時(shí)間短，CD僅有少部分被唾液淀粉酶消化。胃液不含能夠水解CD的任何酶，胃酸對(duì)碳水化合物的水解作用很有限。CD消化分解的主要部位是小腸，其在小腸內(nèi)的消化可分為腸腔和腸粘膜上皮細(xì)胞表面上的消化兩種。在腸腔消化中，通過(guò)結(jié)腸發(fā)酵消化的非淀粉多糖只有非常小的一部分，腸腔中的a-淀粉酶主要來(lái)自胰液，即為胰淀粉酶；在口腔和腸腔淀粉消化的各種中間產(chǎn)物之后，最終在小腸粘膜上皮細(xì)胞表面上完成消化。

3.2 碳水化合物體外消化模型的評(píng)定指標(biāo)

CD經(jīng)消化后最終形成大量的葡萄糖，因此，葡萄糖量可作為CD在IDM中的重要指標(biāo)。食物粉碎程度及方式、消化時(shí)間、水解酶種類等因素，均影響模型模擬的準(zhǔn)確度。目前，構(gòu)建CD的IDM常忽略粘度對(duì)CD消化速率的影響，主要考慮酶、食物成分、顆粒大小和pH值。

3.3 碳水化合物體外消化模型的研究方法

構(gòu)建CD的IDM主要模擬人體口腔、胃部和腸部?？谇幌瘯r(shí)間一般選5 min，pH值為7.0；胃部消化時(shí)間選2.0 h左右，pH值為2.0；腸部為CD消化的主場(chǎng)所，消化時(shí)間一般選4.0 h左右，pH值為5.0左右，并且根據(jù)模擬部位添加相應(yīng)的酶。另外，根據(jù)研究目的和對(duì)象不同，如針對(duì)抗性淀粉和纖維素含量較高的食物，可適當(dāng)模擬食物在大腸、回腸中的發(fā)酵過(guò)程。閔芳芳等人[8]采用CD的IDM研究多糖的吸收利用，結(jié)果表明，胃部對(duì)多糖的消化吸收利用無(wú)顯著影響，但多糖的物理性質(zhì)在一定程度上受pH值影響。目前，構(gòu)建準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、快速的IDM去模擬CD在體內(nèi)的消化情況存在困難，還需不斷完善。

4 結(jié)語(yǔ)

本課題參考大量文獻(xiàn)，總結(jié)了食品中主要營(yíng)養(yǎng)成分IDM的構(gòu)建方法，發(fā)現(xiàn)構(gòu)建IDM主要面臨兩個(gè)問(wèn)題：一是在構(gòu)建模型時(shí)，仍需進(jìn)行大量的體內(nèi)試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證其是否與體內(nèi)的消化吸收情況一致，以便于提高其模擬準(zhǔn)確度；二是在構(gòu)建模型時(shí)，既要考慮其針對(duì)性，也要考慮其通用性，即模型中要針對(duì)不同的研究對(duì)象，做相應(yīng)環(huán)節(jié)的調(diào)整，并且在此基礎(chǔ)上可以嘗試構(gòu)建適用一般研究對(duì)象的IDM，來(lái)提高模型的通用性。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉選珍，樂(lè)國(guó)偉，施用暉.飼料蛋白體外消化率及影響因素的研究[J].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996（14）：51-57.

[2] 余應(yīng)新，張帆，李琛，等.體外條件下重現(xiàn)人體胃腸道及微生態(tài)系統(tǒng)的模擬裝置：200910195443.X[P].2010-03-10.

[3] SUN JH，BEONG OL，DECKER EA，et al.In vitro human digestion models for food applications[J].Food Chem，2011，125（1）：1-12.

[4] 孫敏杰，木泰華.蛋白質(zhì)消化率測(cè)定方法的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2011（2）：382-385.

[5] SINGH H，YE A，HORNE D.Structuring food emulsions in the gastrointestinal tract to modify lipid digestion[J].Prog Lipid Res，2009，48（2）：92-100.

[6] HERMIDA LG，XAMANI S，BARNADAS RR.Combined strategies for liposome characterization during in vitro digestion[J].J Liposome Res，2009，19（3）：207-219.

[7] 王竹，楊月欣，劉靜.建立碳水化合物體外消化標(biāo)準(zhǔn)操作程序的必要性[C]//中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)營(yíng)養(yǎng)與保健食品分會(huì).第五屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集.北京：中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)營(yíng)養(yǎng)與保健食品分會(huì)，2007.

[8] 閔芳芳，聶少平，萬(wàn)宇俊，等.青錢柳多糖在體外消化模型中的消化與吸收[J].食品科學(xué)，2013（21）：24-29.

Abstract： Based on human gastrointestinal physiological process， in vitro digestion model was used to the research of predicting or evaluating digestibility， releasing characteristic and the structure changes and so on by simulating the in vivo digestive absorption under in vitro condition. The model has the characteristics of simple and easy to operate， therefore it was more and more used in food， medicine， health care products and so on industries. This article systematically introduced the establishment of in vitro digestion model with proteins， lipid and carbohydrate， which are three macro nutrients， in recent years and the key factors affecting the model establishment， and summarized the advantages， disadvantages and applicable scope of this model， laying the foundation for further research in this field .

Key words： in vitro digestion model； macro nutrient； research progress