沈巧巧，　徐曉虹，　戴玉華，　胡一中

(浙江師范大學(xué) 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院 生態(tài)研究所,浙江 金華　321004)

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17β-雌二醇對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元鈣離子水平的快速影響

沈巧巧，徐曉虹，戴玉華，胡一中

(浙江師范大學(xué) 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院 生態(tài)研究所,浙江 金華321004)

探討了17β-雌二醇(17β-E2)對(duì)體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平([Ca2+]i)的快速影響及其可能的機(jī)制.大鼠海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)8～10 d，用Fluo 4-AM鈣離子熒光探針負(fù)載胞內(nèi)Ca2+，用激光共聚焦顯微鏡動(dòng)態(tài)檢測(cè)了17β-E2對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度的影響.結(jié)果顯示：17β-E2(10 nmol·L-1)處理30 min，對(duì)正常狀態(tài)下神經(jīng)元的[Ca2+]i無(wú)顯著影響,但可快速促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)的[Ca2+]i增加(與對(duì)照組相比，P<0.001)，雌激素受體阻斷劑ICI182780(10 μmol·L-1)預(yù)處理可阻斷17β-E2的這一促進(jìn)作用；胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERKs)抑制劑U0126(10 μmol·L-1)單獨(dú)處理神經(jīng)元，可極顯著抑制谷氨酸誘導(dǎo)的[Ca2+]i增加(P<0.001)，但這一作用可以被17β-E2部分逆轉(zhuǎn).研究結(jié)果提示，ERKs信號(hào)通路可能參與谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元[Ca2+]i增加，17β-E2可能經(jīng)雌激素受體介導(dǎo)的ERKs信號(hào)通路快速促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元[Ca2+]i增加.

17β-雌二醇；鈣離子；海馬神經(jīng)元；胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶

內(nèi)源性雌激素不僅是調(diào)控生殖系統(tǒng)的重要激素，也是參與腦的發(fā)育及其功能活動(dòng)的激素.在人和嚙齒類動(dòng)物的發(fā)育乃至整個(gè)生命過(guò)程中，腦對(duì)雌激素都非常敏感，雌激素在神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)保護(hù)及突觸可塑性等方面發(fā)揮著重要作用[1].有研究發(fā)現(xiàn)，大鼠海馬腦區(qū)神經(jīng)元樹突棘密度隨動(dòng)情周期雌激素水平的波動(dòng)而變化，處于動(dòng)情前期(雌激素水平較高)的雌鼠海馬神經(jīng)元樹突棘密度增加[2].體外研究發(fā)現(xiàn)，17β-雌二醇(17β-E2)能快速增加海馬CA1區(qū)樹突棘密度，快速促進(jìn)高頻刺激誘導(dǎo)的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(long-term potentiation，LTP)效應(yīng)[3].表明17β-E2的許多生物學(xué)效應(yīng)不僅由經(jīng)典的核雌激素受體(ERs)介導(dǎo)，而且常常表現(xiàn)出快速的非基因效應(yīng).LTP是突觸傳遞功能可塑性的重要表現(xiàn)形式，是學(xué)習(xí)與記憶的分子基礎(chǔ)[4].在海馬CA3區(qū)，N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體激活引發(fā)鈣離子通道打開(kāi)是LTP產(chǎn)生的觸發(fā)因素，胞內(nèi)鈣動(dòng)力對(duì)LTP誘導(dǎo)和胞內(nèi)一系列信號(hào)傳遞是不可缺少的.有研究發(fā)現(xiàn)，少量Ca2+增加可以引起長(zhǎng)時(shí)程抑制(long-term depression,LTD)，大量Ca2+增加則引起LTP[5].因此，17β-E2對(duì)突觸可塑性的調(diào)節(jié)作用可能與胞內(nèi)Ca2+增加有關(guān)[6].也有研究發(fā)現(xiàn)，17β-E2(25 nmol·L-1)能夠引起血細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平([Ca2+]i)快速上升，并伴隨p-ERKs/MAPK的瞬時(shí)升高[7].文獻(xiàn)[8]發(fā)現(xiàn)，20～50 nmol·L-1的17β-E2在5 min內(nèi)即可引起大鼠腎臟細(xì)胞[Ca2+]i上升.但目前尚未見(jiàn)17β-E2對(duì)神經(jīng)細(xì)胞[Ca2+]i作用的相關(guān)報(bào)道，對(duì)其作用機(jī)制更知之甚少.

1　實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1大鼠海馬神經(jīng)元離體培養(yǎng)

清潔級(jí)新生24 h內(nèi)的健康SD大鼠乳鼠，購(gòu)于浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心.

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物斷頭取腦，剝離出海馬組織，在DMEM高糖培養(yǎng)基(Gibco)中剪碎后加入0.25%的胰蛋白酶(Amresco)，置于37 ℃的CO2培養(yǎng)箱中消化30 min后終止消化，低速離心1 min，用膠頭滴管反復(fù)輕輕吹打海馬組織制成細(xì)胞懸液.用含10%胎牛血清(杭州四季青)和90%DMEM的高糖培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞并接種于預(yù)先涂有0.1 g·L-1多聚賴氨酸(Sigma)的小玻片上，細(xì)胞密度大約為1×104cm-2，每個(gè)直徑為35 mm的培養(yǎng)皿中10個(gè)小玻片，培養(yǎng)于37 ℃的CO2培養(yǎng)箱中，4 h左右細(xì)胞貼壁后吸去種植液，每個(gè)培養(yǎng)皿加2 mL培養(yǎng)液(含2%B27添加劑(InvirtrogenTM)，3 g·L-1L-谷氨酰胺(Amresco)和50 μg·L-1雙抗的Neurobasl培養(yǎng)基(Gibco)).之后每隔3 d半量換液.

1.2Fluo 4-AM熒光探針標(biāo)記

海馬神經(jīng)元培養(yǎng)至第8～10 d，吸去培養(yǎng)液，用Hank′s平衡鹽溶液(HBSS)(8 g·L-1NaCl,0.126 g·L-1Na2HPO4·H2O,0.4 g·L-1KCl,0.06 g·L-1KH2PO4,0.098 g·L-1MgSO4,0.14 g·L-1CaCl2,0.35 g·L-1NaHCO3,1 g·L-1D-葡萄糖)洗滌細(xì)胞3次，加入Fluo 4-AM special pakcaging(Dojindo)工作液(終濃度為5 μmol·L-1)，溶液量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn).在37 ℃的CO2培養(yǎng)箱中孵育30 min，之后用HBSS洗滌細(xì)胞3次，以去除Fluo 4-AM工作液.

1.3藥物處理和共聚焦檢測(cè)

文獻(xiàn)[9-10]報(bào)道，10 nmol·L-117β-E2接近內(nèi)源性雌激素的生理作用.在Fluo 4-AM熒光探針標(biāo)記后，用終濃度為10 nmol·L-1的17β-E2(Sigma)處理細(xì)胞，CO2培養(yǎng)箱37 ℃孵育30 min.為探討17β-E2對(duì)[Ca2+]i的影響機(jī)制，先用終濃度為10 μmol·L-1的雌激素受體阻斷劑ICI182780(Tocris)或ERK1/2抑制劑U0126(Cell Signaling)預(yù)處理海馬神經(jīng)元30 min，后加入10 nmol·L-117β-E2處理30 min，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組和單獨(dú)添加抑制劑組.用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞熒光強(qiáng)度，激發(fā)波長(zhǎng)為494 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為516 nm.每個(gè)細(xì)胞隔10 s拍一張照片，拍5 min，共30張照片.60 s時(shí)加入終濃度為20 μmol·L-1的谷氨酸(Sigma)誘導(dǎo)神經(jīng)元[Ca2+]i增加.每組檢測(cè)50個(gè)細(xì)胞，分別來(lái)自6個(gè)獨(dú)立培養(yǎng)皿.

1.4數(shù)據(jù)處理

2　結(jié)　果

2.117β-E2不影響大鼠海馬神經(jīng)元正常狀態(tài)下的[Ca2+]i

激光共聚焦顯微觀測(cè)結(jié)果顯示：正常狀態(tài)下，神經(jīng)元胞內(nèi)熒光強(qiáng)度保持穩(wěn)定，沒(méi)有明顯的變化(見(jiàn)圖1(a))；17β-E2處理的神經(jīng)元胞內(nèi)熒光強(qiáng)度基礎(chǔ)水平微弱增加(無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05) 但仍然保持穩(wěn)定水平(見(jiàn)圖1(b)).表明正常狀態(tài)下海馬神經(jīng)元 [Ca2+]i保持穩(wěn)定，17β-E2不影響基礎(chǔ)狀態(tài)下的海馬神經(jīng)元[Ca2+]i.

2.2谷氨酸快速升高大鼠海馬神經(jīng)元[Ca2+]i

正常狀態(tài)下海馬神經(jīng)元[Ca2+]i穩(wěn)定，但當(dāng)加入生理濃度(終濃度為20 μmol·L-1)谷氨酸(Glu)時(shí)，海馬神經(jīng)元胞內(nèi)Ca2+熒光瞬時(shí)增強(qiáng)達(dá)60%(見(jiàn)圖2(a))，并且在300 s內(nèi)熒光強(qiáng)度基本保持不變，表明大鼠海馬神經(jīng)元對(duì)谷氨酸具有很高的敏感度(見(jiàn)圖2(b)和(c)).因此，本實(shí)驗(yàn)以谷氨酸刺激海馬神經(jīng)細(xì)胞的Ca2+內(nèi)流.

2.317β-E2促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元[Ca2+]i升高

17β-E2處理不改變基礎(chǔ)狀態(tài)下海馬神經(jīng)元胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度，但明顯促進(jìn)了谷氨酸誘導(dǎo)的胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度的增加(見(jiàn)圖3(a)).與溶媒對(duì)照組相比，17β-E2處理組神經(jīng)細(xì)胞在谷氨酸刺激后胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度增加到100%(P<0.001)(見(jiàn)圖3(b)和(c))，表明17β-E2處理不改變基礎(chǔ)狀態(tài)下海馬神經(jīng)元[Ca2+]i的基礎(chǔ)值，但可顯著促進(jìn)谷氨酸引起的[Ca2+]i升高.

2.4雌激素受體和ERK信號(hào)通路對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元[Ca2+]i的影響

為了探討17β-E2促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)[Ca2+]i升高的機(jī)制，本研究在17β-E2急性處理前先用雌激素受體阻斷劑ICI182780預(yù)處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ICI182780單獨(dú)處理對(duì)[Ca2+]i無(wú)明顯的影響，但幾乎完全抑制了17β-E2對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)[Ca2+]i升高的促進(jìn)作用(P<0.01).表明17β-E2經(jīng)雌激素受體介導(dǎo)快速促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞[Ca2+]i升高.

接著，用ERK抑制劑U0126單獨(dú)處理細(xì)胞，顯著減少了谷氨酸誘導(dǎo)的[Ca2+]i升高(P<0.001).在17β-E2處理前用U0126預(yù)處理30 min，谷氨酸誘導(dǎo)的[Ca2+]i仍然顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，提示谷氨酸誘導(dǎo)[Ca2+]i升高需要激活ERKs信號(hào)通路.然而，當(dāng)17β-E2預(yù)處理后再用U0126處理細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)U0126對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的[Ca2+]i升高的抑制作用部分消除(見(jiàn)圖4)，提示17β-E2可能通過(guò)激活ERKs信號(hào)通路促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞[Ca2+]i升高.

*表示P<0.05，***表示P<0.001，與谷氨酸誘導(dǎo)對(duì)照組(CON)相比；#表示P<0.05，與17β-E2組相比；$$$表示P<0.001，與ERKs抑制劑(U0126)組相比.,來(lái)自6個(gè)獨(dú)立培養(yǎng)皿圖4　雌激素受體阻斷劑及ERKs抑制劑對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元[Ca2+]i的影響

3　討　論

性激素不僅調(diào)控動(dòng)物的生殖功能，對(duì)腦發(fā)育及其功能活動(dòng)也起著重要的調(diào)節(jié)作用.雌激素能影響神經(jīng)發(fā)生和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)，誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元分化，作用于與認(rèn)知功能相關(guān)的海馬神經(jīng)元回路，影響海馬神經(jīng)元樹突棘突觸可塑性及其功能，進(jìn)而影響學(xué)習(xí)與認(rèn)知功能的形成與改善[11-12].在這些過(guò)程中，除了經(jīng)典的基因調(diào)控機(jī)制外，雌激素還表現(xiàn)出快速的非基因效應(yīng).例如，雌激素可在2 h內(nèi)快速增加成年大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元樹突棘密度[13].

突觸可塑性不僅表現(xiàn)在樹突棘形態(tài)的變化，還表現(xiàn)在傳遞功能的可塑性，如長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)和長(zhǎng)時(shí)程抑制(LTD)，它們均能選擇性地修飾突觸,被認(rèn)為是學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)基礎(chǔ)[14].近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，雌激素可在0.5～1.0 h內(nèi)快速促進(jìn)突觸傳遞效能[4].Zamani等[15]也發(fā)現(xiàn)，雌激素能在數(shù)分內(nèi)增加興奮性突觸后電位(EPSP)，促進(jìn)LTP，從而增強(qiáng)海馬神經(jīng)元突觸的傳遞功能.

谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，而AMPA受體和NMDA受體是興奮性突觸中最重要的離子型谷氨酸受體，介導(dǎo)興奮性突觸反應(yīng)[16].LTP是突觸在接受反復(fù)刺激后誘導(dǎo)谷氨酸釋放增加，通過(guò)與突觸后AMPA受體和NMDA受體結(jié)合，促使突觸后膜離子通道數(shù)量增加，最終使突觸傳遞持續(xù)增強(qiáng).[Ca2+]i升高為L(zhǎng)TP誘導(dǎo)所必需，突觸后[Ca2+]i達(dá)到一定的閾值，通過(guò)激活CaMKII和PKC等信號(hào)通路而產(chǎn)生LTP[17].本研究應(yīng)用谷氨酸模擬突觸前興奮引起的谷氨酸釋放，研究了17β-E2對(duì)谷氨酸釋放誘導(dǎo)的神經(jīng)元 [Ca2+]i的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：17β-E2對(duì)正常狀態(tài)下海馬神經(jīng)元[Ca2+]i無(wú)顯著影響；但可在30 min內(nèi)快速促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元[Ca2+]i增加.與本研究結(jié)果相似，文獻(xiàn)[18]也發(fā)現(xiàn)大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)的雌激素能在數(shù)分內(nèi)快速誘導(dǎo)[Ca2+]i升高.Shinsaku等[19]報(bào)道，17β-E2可增加NMDA受體介導(dǎo)的電流，導(dǎo)致突觸后Ca2+水平上升而促進(jìn)LTP.因此，本研究發(fā)現(xiàn)的17β-E2快速促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元[Ca2+]i增加，也許是17β-E2快速促進(jìn)海馬LTP形成的一個(gè)原因.

雌激素對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元[Ca2+]i的快速升高效應(yīng)是否由雌激素受體(ERα或ERβ)介導(dǎo)呢？早在1977年，Pietras等[20]就描述了雌激素的快速的非基因效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)質(zhì)膜上有2種能對(duì)雌激素起快速反應(yīng)的蛋白質(zhì).目前，越來(lái)越多的研究也證明，膜雌激素受體介導(dǎo)雌激素的非基因組效應(yīng)，與雌激素的快速作用有關(guān).Dewing等[21]的研究發(fā)現(xiàn)，在腦內(nèi)，ERα和ERβ除細(xì)胞核分布外，胞漿和胞膜上也有部分分布.另外，文獻(xiàn)[22]的研究表明，ERα和 ERβ的激動(dòng)劑可以快速調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)元的鈣動(dòng)力，但雌激素受體阻斷劑阻斷了這一作用.通過(guò)雌激素受體阻斷劑(ICI182780)預(yù)處理，我們發(fā)現(xiàn)，雌激素受體阻斷劑可以抑制17β-E2對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)神經(jīng)元[Ca2+]i升高的快速促進(jìn)作用，提示膜雌激素受體介導(dǎo)了17β-E2的這一快速作用.

雌激素可以通過(guò)激活包括cAMP,MAPKs,PKC,PKA和PI-3K等多條信號(hào)通路快速調(diào)節(jié)細(xì)胞活動(dòng)，其中MAPK激酶家族中的ERK信號(hào)通路被認(rèn)為是聯(lián)系各種胞外信號(hào)與膜受體、轉(zhuǎn)錄因子、基因調(diào)節(jié)中心的信號(hào)途徑之一，參與學(xué)習(xí)記憶和突觸可塑性.近年來(lái)的研究表明，ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與腦內(nèi)LTP形成、學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能密切相關(guān)，同時(shí)也是雌激素調(diào)節(jié)突觸可塑性的主要途徑[23-24].Bryant等[25]研究表明，皮下注射雌激素能在20 min內(nèi)增強(qiáng)大鼠腦部分區(qū)域的ERK磷酸化.另外，有研究發(fā)現(xiàn)，在海馬神經(jīng)元中被雌激素激活的ERKs能轉(zhuǎn)定位到核中[26].因此，筆者推測(cè)，雌激素調(diào)節(jié)神經(jīng)元[Ca2+]i有可能通過(guò)ERK信號(hào)通路實(shí)現(xiàn).本研究發(fā)現(xiàn)，ERK抑制劑U0126預(yù)處理可顯著抑制谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元[Ca2+]i升高，17β-E2不能逆轉(zhuǎn)U0126預(yù)處理后神經(jīng)元[Ca2+]i對(duì)谷氨酸響應(yīng)的抑制作用，但17β-E2預(yù)處理卻能部分拮抗U0126對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)神經(jīng)元[Ca2+]i升高的抑制作用.提示谷氨酸誘導(dǎo)的Ca2+內(nèi)流可能需要MAPK/ERKs信號(hào)通路的激活，而17β-E2也許是通過(guò)激活該通路促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)神經(jīng)元Ca2+內(nèi)流的.文獻(xiàn)[27]認(rèn)為，NMDA受體的激活部分受ERKs調(diào)控，NMDA受體亞基NR2B磷酸化的增加依賴于NR2B中酪氨酸的磷酸化作用，而這一作用(至少部分作用)經(jīng)ERKs介導(dǎo).NMDA受體的功能主要取決于NR2亞基的類型.文獻(xiàn)[28]利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，前腦過(guò)表達(dá)NR2B亞基的小鼠神經(jīng)細(xì)胞NMDA受體通道開(kāi)放時(shí)間延長(zhǎng)、活性增加，并導(dǎo)致[Ca2+]i升高；同時(shí)，NR2B亞基過(guò)表達(dá)可增強(qiáng)LTP，學(xué)習(xí)和記憶能力也增強(qiáng).本實(shí)驗(yàn)室前期的研究[29]發(fā)現(xiàn)，腦內(nèi)注射17β-E2 1 h不影響海馬腦區(qū)ERK1/2總蛋白的表達(dá)，但顯著升高ERK1/2的磷酸化水平，表明17β-E2可以快速激活ERK通路；進(jìn)一步用雌激素受體阻斷劑ICI182780預(yù)處理后，發(fā)現(xiàn)17β-E2誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化水平增強(qiáng)效應(yīng)被抑制，同時(shí)消除了17β-E2誘導(dǎo)的NMDA受體亞基NR2B磷酸化水平的增強(qiáng)效應(yīng).這些結(jié)果提示，雌激素可通過(guò)雌激素受體的非基因組機(jī)制激活MAPK/ERKs信號(hào)通路，快速誘導(dǎo)NMDA受體亞基NR2B磷酸化而激活 NMDA 受體.因此，筆者推測(cè)，谷氨酸可能通過(guò)促進(jìn)MAPK/ERKs信號(hào)通路活動(dòng)激活NMDA受體亞基NR2B磷酸化，從而使突觸后膜離子通道打開(kāi)，增加Ca2+內(nèi)流；而17β-E2可能通過(guò)進(jìn)一步激活該通路促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)神經(jīng)元[Ca2+]i升高.由于胞內(nèi)還有其他多條信號(hào)通路參與雌激素調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞活動(dòng)，因此，雌激素對(duì)神經(jīng)元[Ca2+]i的影響是否還有其他通路介導(dǎo)，還值得進(jìn)一步研究.

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(責(zé)任編輯薛榮)

Rapid effects of 17β-estradiol on calcium level in hippocampal neurons of rats

SHEN Qiaoqiao,XU Xiaohong,DAI Yuhua,HU Yizhong

(InstituteofEcology,CollegeofChemistryandLifeSciences,ZhejiangNormalUniversity,Jinhua321004,China)

It was investigated the effects of 17β-estradiol (17β-E2) on calcium level in hippocampal neurons of rats. After in vitro cultured for 8～10 days, the hippocampal neurons were marked by Fluo 4-AM, an intracellular Ca2+fluorescent probe. Laser confocal scanning microscopy was used to detect the dynamic change of glutamate-induced intrarcellular calcium concentration ([Ca2+]i). These results showed that treatment of 17β-E2 (10 nmol·L-1)for 30 min had no remarkable effect on [Ca2+]iof neurons in the normal condition, but rapidly enhanced the increase in the [Ca2+]iinduced by glutamate (P<0.001, compared with control). The pretreatment of estrogen receptor antagonist, ICI182780 (10 μmol·L-1) blocked this effect of 17β-E2. ERKs inhibitor, U0126 (10 μmol·L-1) significantly suppressed glutamate-induced increase of [Ca2+]i(P<0.001), suggesting ERKs signal participates in glutamate-induced calcium influx; however, this effect was reversed by pretreatment of 17β-E2. These results suggested that 17β-E2 could rapidly enhanced the increase in [Ca2+]iinduced by glutamate in hippocampal neurons in vitro. These effects might be mediated by ERKs signaling pathway via estrogen receptor.

17β-estradiol; calcium; hippocampal neuron; ERKs

10.16218/j.issn.1001-5051.2016.03.016

收文日期：2015-09-10；2015-10-15

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81472935;81172627)

沈巧巧(1990-)，女，浙江嵊州人，碩士研究生.研究方向：神經(jīng)毒理學(xué).

胡一中.E-mail： huyizhong@zjnu.cn

Q955

A

1001-5051(2016)03-0325-06