血液檢測HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試驗拖帶現(xiàn)象分析

阮　忠，張加成

(湖北省孝感市中心血站　432000)

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·經(jīng)驗交流·

血液檢測HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試驗拖帶現(xiàn)象分析

阮忠，張加成

(湖北省孝感市中心血站432000)

目的通過對使用永久性鋼針在酶免檢測中出現(xiàn)陽性拖帶現(xiàn)象進(jìn)行分析，以尋找解決拖帶現(xiàn)象的辦法。方法采用同一份標(biāo)本和相同試劑進(jìn)行手工反復(fù)檢測比較，分析酶免陽性標(biāo)本拖帶污染對其他標(biāo)本結(jié)果的影響。結(jié)果對Metis 200-8全自動血庫系統(tǒng)使用永久性鋼針時陽性標(biāo)本產(chǎn)生拖帶污染的后續(xù)3個標(biāo)本，經(jīng)重新檢測，結(jié)果均為陰性，證實為拖帶現(xiàn)象所致。結(jié)論永久性鋼針在檢測過程中對其他標(biāo)本會帶來不同程度的拖帶污染，可以通過對同一份標(biāo)本進(jìn)行對比檢測，以保證結(jié)果的可靠性。

永久性鋼針；拖帶污染；酶聯(lián)免疫吸附試驗

采供血機(jī)構(gòu)是一個特殊行業(yè)，具有獨特的工作環(huán)境及工作模式?，F(xiàn)在很多血站檢驗科在血液檢測過程中，使用一管血樣進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、血型、生化檢測，這在一定程度上減輕了操作人員的工作強(qiáng)度和降低了一定成本[1]，也避免了手工加樣而帶來的人為誤差，使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確，更有可比性。采用全自動加樣儀進(jìn)行分樣，當(dāng)遇到滴度高的陽性標(biāo)本時，永久性鋼針可造成同時用該陽性標(biāo)本加樣針后幾個標(biāo)本出現(xiàn)假陽性[2]，本文對實際工作中遇到的這種情況進(jìn)行分析，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑儀器為奧斯邦酶免檢測系統(tǒng)STAR/FAME、愛康公司Metis200-8全自動血庫系統(tǒng)、東芝公司R40生化儀。試劑盒采用為國產(chǎn)ELISA診斷試劑。

1.2標(biāo)本檢測流程用同一標(biāo)本進(jìn)行了分樣，先進(jìn)行ELISA檢測分樣，再生化檢測，最后進(jìn)行了血型檢測。

1.3方法根據(jù)試劑盒說明書在STAR/FAME、Metis200-8全自動血庫系統(tǒng)的儀器上編制各項試驗的工作程序。加樣的流程是第一步先用奧斯邦STAR加樣，F(xiàn)AME進(jìn)行后處理、孵育、洗板、讀板；第二步，東芝R40生化儀再次進(jìn)行分樣；第三步最后為Metis200-8全自動血庫系統(tǒng)進(jìn)行分樣檢測血型[3-4]。加樣方法參照文獻(xiàn)[3]。

2　結(jié)　　果

分樣假陽性拖帶標(biāo)本的確定，在檢測過程中FAME吐板[乙型肝炎表面抗原(HBsAg)]，試驗中斷，重新再次進(jìn)行分樣試驗(原標(biāo)本已經(jīng)通過了酶免分樣、生化分樣、血型分樣)，檢測完畢后出現(xiàn)F2、F3、F4、F5、F6孔陽性，OD值逐漸降低，分別為2.768、1.321、0.287、0.148、0.119。用同源血辨標(biāo)本和同源核酸標(biāo)本進(jìn)行了復(fù)試。見表1。

表1　　拖帶陽性檢測結(jié)果

注：-表示檢測結(jié)果為陰性。

3　討　　論

目前，我國大多數(shù)血站都使用永久性鋼針設(shè)備對血液標(biāo)本進(jìn)行檢測，加樣系統(tǒng)采用的是非一次性的Teflon涂層鋼針，這些都容易造成標(biāo)本攜帶污染[4-5]，但也極大提高了檢測效率，避了手工加樣的人為誤差，提高了血液檢測質(zhì)量。永久性鋼針對標(biāo)本的拖帶污染問題需引起關(guān)注。陽性拖帶現(xiàn)象的產(chǎn)生主要是由于鋼針處理強(qiáng)陽性標(biāo)本后，不易被沖洗干凈，附著在針的內(nèi)壁上，接著吸取下一個標(biāo)本時發(fā)生污染，并且隨著鋼針被重復(fù)使用次數(shù)的增加，其內(nèi)壁可能吸附蛋白質(zhì)或脂質(zhì)等污物，陽性拖帶現(xiàn)象會更加嚴(yán)重[6]。同一加樣針會使其后的多個標(biāo)本出現(xiàn)不同程度的污染，引起假陽性結(jié)果。如果將假陽性的標(biāo)本誤判為陽性將造成血液的浪費，同時也會給獻(xiàn)血者帶來心理負(fù)擔(dān)，因此設(shè)法避免該現(xiàn)象的發(fā)生成為大家關(guān)心的問題[7]。

從首次檢測結(jié)果來看，F(xiàn)2孔位標(biāo)本為強(qiáng)陽性，F(xiàn)3、F4、F5、F6均為陽性，OD值逐漸降低，復(fù)試這5份標(biāo)本，結(jié)果同首次一樣，但是與此同源的血辨標(biāo)本結(jié)果為F2(樣品)強(qiáng)陽性，F(xiàn)3、F4、F5、F6(樣品)均為陰性，再次復(fù)試，筆者用同源核酸標(biāo)本進(jìn)行再次檢測，結(jié)果為F2(樣品)強(qiáng)陽性，F(xiàn)3、F4、F5、F6(樣品)均為陽性，另外M-208加樣順序為F1～F6，F(xiàn)1為陽性對照，F(xiàn)2為強(qiáng)陽性，F(xiàn)3～F6 OD值依次降低?？梢源_定，F(xiàn)3～F6標(biāo)本陽性結(jié)果系鋼針拖帶所致。在檢測過程中，設(shè)備會在每一次加樣后對鋼針進(jìn)行沖洗，通常可以避免標(biāo)本加樣過程中的拖帶污染，但是對于高濃度抗原或抗體標(biāo)本，拖帶污染還是不能完全控制，找到造成陽性拖帶的強(qiáng)陽性標(biāo)本和不同陽性標(biāo)本的區(qū)別方法，不僅能夠有效地減少再檢次數(shù)，節(jié)約試劑，還能夠做能迅速判斷拖帶現(xiàn)象并減少因拖帶導(dǎo)致的誤檢[8]。因此，在以后的檢測中，應(yīng)該人為地減少這種拖帶現(xiàn)象的發(fā)生。筆者分析產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象的主要原因有：參數(shù)設(shè)置不當(dāng),儀器維護(hù)保養(yǎng)不良和標(biāo)本原因[9]。

筆者采取以下對應(yīng)措施：(1)在條件允許情況下，盡量使用一次性加樣尖，或者加大沖針的水量和延長沖針時間。(2)血站可以在采標(biāo)本的同時多加一個血樣留存，以便儀器出現(xiàn)故障之后的復(fù)查，這樣就能避免鋼針拖帶所致的污染。還需要找辮子血樣來做平行雙孔再檢，因為試管血樣已被污染，失去檢測意義，用血辮血樣再檢，不能輕易判定為假陽性，否則使陽性血流入臨床，造成嚴(yán)重后果[10]。當(dāng)然考慮設(shè)備所致的污染同時，還應(yīng)該加強(qiáng)自身建設(shè)，提高專業(yè)知識和檢驗技能，在檢測過程中提高警惕，減少不必要的故障，從而使檢測結(jié)果安全、準(zhǔn)確、及時。

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[2]朱金平，方麗婉，張莉．全自動酶標(biāo)加樣儀的攜帶污染分析[J]．中國輸血雜志，2015，28(8)：914-915．

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[4]潘志勇．ELISA檢測中全自動加樣引起拖帶假陽性現(xiàn)象的對策分析[J]．中國實用醫(yī)藥，2011，6(27)：147．

[5]朱美芹，王莉莉．全自動酶聯(lián)免疫檢測儀與手工酶聯(lián)免疫檢測的比對評價[J]．檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11(1)：21-22．

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[8]王宏．全自動加樣器陽性拖帶現(xiàn)象的分析[J]．中國實用醫(yī)藥，2014，9(7)：257-258．

[9]王林，張國平，韓惠云，等．全自動加樣系統(tǒng)出現(xiàn)強(qiáng)陽性標(biāo)本拖帶現(xiàn)象分析[J]．當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2008，14(20)：47．

[10]趙旭勇，張寧寧，王棚，等．HBsAg檢測中強(qiáng)陽性拖帶污染的分析[J]．內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2009，28(23)：90．

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.059

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