盧小明，謝柱彬，殷進(jìn)方，盧偉昌，張險(xiǎn)朋（.東莞市東坑鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 ；.東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 53086）

東莞市雞新城疫免疫效果調(diào)查

盧小明1，謝柱彬1，殷進(jìn)方2，盧偉昌1，張險(xiǎn)朋2
（1.東莞市東坑鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 ；2.東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086）

為了摸清東莞市雞新城疫的免疫效果，2015年在東莞市10個(gè)規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)和6個(gè)鎮(zhèn)的雞散養(yǎng)戶共采集了1553份雞血清，采用血凝與血凝抑制試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果為東莞市雞新城疫抗體陽(yáng)性數(shù)為1083份，陽(yáng)性率為69.74%，其中規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)新城疫抗體陽(yáng)性率為86.80%，散養(yǎng)戶雞抗體陽(yáng)性率為46.59%。結(jié)果表明，東莞市規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)雞新城疫的抗體水平總體比較高，散養(yǎng)雞的抗體水平偏低，存在新城疫病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。

新城疫；血凝與血凝抑制試驗(yàn)；免疫效果；雞

雞新城疫又稱(chēng)偽雞瘟，亞洲雞瘟，是由新城疫病毒（newcastle disease，virus，NDV）引起的雞和多種禽類(lèi)急性高度接觸傳染性疾病。主要臨床癥狀表現(xiàn)為呼吸困難，下痢，神經(jīng)紊亂，黏膜和漿膜出血，具有很高的發(fā)病率和病死率。新城疫是危害養(yǎng)雞業(yè)的重要傳染病之一，給養(yǎng)雞業(yè)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失，OIE將其列為A類(lèi)疫病。雞發(fā)生新城疫沒(méi)有特效的藥物可以治療，疫苗免疫是預(yù)防新城疫最有效的措施。為了摸清東莞市雞新城疫的免疫情況，2015年，在東莞市選取10個(gè)規(guī)模雞養(yǎng)殖場(chǎng)和6個(gè)鎮(zhèn)（街）的雞散養(yǎng)戶進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)，現(xiàn)將監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1雞血清

共1553份雞血清，2015年采自東莞市10個(gè)規(guī)模雞養(yǎng)殖場(chǎng)和6個(gè)鎮(zhèn)（街）的雞散養(yǎng)戶。以翅靜脈采血，以3500r/min離心15 min分離獲得待檢血清，-20℃保存?zhèn)錂z。

1.2試劑

1.2.1新城疫抗原和陽(yáng)性血清購(gòu)自中國(guó)哈爾濱維科生物科技有限公司，批號(hào)分別為14M013，2013002。

1.2.1主要耗材和儀器96孔“V”型微量反應(yīng)板，微量震蕩器，8道移液器，離心機(jī)。

1.3方法按照《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T 16550-2008）規(guī)定的血凝與血凝抑制方法操作。

1.3.11%雞紅細(xì)胞懸液采集實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的3只新城疫和禽流感非免疫的健康公雞的血液與阿氏液等體積混合，用pH值7.2的0.01mol/L PBS液洗滌3次，每次以1000r/min離心10min，洗滌后用PBS液配成體積分?jǐn)?shù)1%雞紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.24HA單位抗原的配制取出凍干的濃縮新城疫抗原，加入2 mLPBS液稀釋融化后，測(cè)其抗原效價(jià)。能夠完全引起血凝的病毒最高稀釋度即為抗原效價(jià)，以此稀釋度作為1個(gè)HA單位抗原，配制4個(gè)HA單位抗原。

1.3.3血凝抑制方法取出96孔“V”型微量反應(yīng)板，用移液器在第1～11孔加入0.025mLPBS，12孔加入0.05mLPBS；第1孔加入0.025mL待檢血清，倍比稀釋至第10孔，第11孔為陽(yáng)性對(duì)照，第12孔位PBS液對(duì)照。在第1～11孔加入0.025mL含4U的新城疫抗原，震蕩混勻，室溫（20～25℃）下靜置不少于30min。每孔加入0.025mL 1%雞紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻，室溫（20～25℃）下靜置40min，當(dāng)PBS液對(duì)照孔紅細(xì)胞呈明顯紐扣狀沉到孔底時(shí)，判讀結(jié)果。

1.3.4結(jié)果判定在PBS液對(duì)照孔結(jié)果成立的情況下，將反應(yīng)板傾斜，從背側(cè)觀察，以紅細(xì)胞呈淚流狀流下為最高稀釋滴度。血清樣品HI效價(jià)大于等于4log2，判為新城疫抗體陽(yáng)性。

2　結(jié)果與分析

2.1雞新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2015年共檢測(cè)雞血清1553份，雞新城疫抗體陽(yáng)性1083份，抗體陽(yáng)性率為69.74%，其中檢測(cè)規(guī)模場(chǎng)雞血清894份，新城疫抗體陽(yáng)性776份，抗體陽(yáng)性率為86.80%，檢測(cè)散養(yǎng)戶雞血清659份，新城疫抗體陽(yáng)性307份，抗體陽(yáng)性率為46.59%，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　2015年雞新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2部分規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)雞新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果

在10個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)中，雞新城疫抗體陽(yáng)性率最高的為100%，最低的養(yǎng)殖場(chǎng)為37.89%，其他養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率介于37.89%～100%之間，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，各養(yǎng)殖場(chǎng)雞新城疫的抗體陽(yáng)性率存在差異，新城疫的免疫情況參差不齊。

表2　2015年?yáng)|莞市部分雞養(yǎng)殖場(chǎng)新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3部分鎮(zhèn)（街）散養(yǎng)的雞新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果

在6個(gè)鎮(zhèn)（街）的散養(yǎng)戶中，雞新城疫抗體陽(yáng)性率為46.59%，抗體陽(yáng)性率最高的鎮(zhèn)（街）為64.80%，最低的為26.00%，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，散養(yǎng)戶雞新城疫抗體水平普遍比較低，達(dá)不到農(nóng)業(yè)部規(guī)定免疫合格率大于等于70%的要求，存在新城疫病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。

表3　2015年部分鎮(zhèn)（街）散養(yǎng)雞新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3　討　論

3.1疫苗免疫是預(yù)防新城疫的最有效措施，根據(jù)調(diào)查結(jié)果，東莞市規(guī)模場(chǎng)雞新城疫的抗體陽(yáng)性率為86.80%，抗體水平處于較高的水平，但從不同養(yǎng)殖場(chǎng)來(lái)看，有4個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)抗體水平比較低，達(dá)不到國(guó)家規(guī)定的大于等于70%的標(biāo)準(zhǔn)，占監(jiān)測(cè)養(yǎng)殖場(chǎng)的40%。雞新城疫的免疫效果好壞與與生產(chǎn)管理有密切的管理，一般情況下，種雞場(chǎng)的生產(chǎn)管理要好于一般的蛋雞場(chǎng)和肉雞場(chǎng)，在此次調(diào)查中，選擇的2個(gè)種雞場(chǎng)抗體陽(yáng)性率均達(dá)到了100%。

3.2從不同場(chǎng)所雞新城疫的監(jiān)測(cè)結(jié)果分析，規(guī)模場(chǎng)雞新城疫的抗體免疫合格率明顯高于散養(yǎng)的雞。規(guī)模場(chǎng)一般情況下根據(jù)場(chǎng)的實(shí)際情況制定新城疫免疫計(jì)劃，并按照計(jì)劃進(jìn)行免疫，定期采樣進(jìn)行監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)抗體水平不合格及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免。散養(yǎng)的戶，分別廣，飼養(yǎng)條件普遍比較差，防疫意識(shí)差，通常只在集中大防時(shí)免疫一次，抗體水平偏低，不足于抵抗野毒的侵襲，是發(fā)生疫情的一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)該重點(diǎn)加強(qiáng)監(jiān)督。

3.3造成新城疫免疫失敗的原因有多，主要有以下幾個(gè)方面。（1）雞母源抗體的干擾。母雞的母源抗體會(huì)通過(guò)蛋黃傳給雛雞，此時(shí)接種新城疫疫苗，母源抗體可抑制雛雞的免疫保護(hù)力。（2）雞體內(nèi)存在免疫抑制性病毒。傳染性法氏囊病、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥、雞傳貧、呼腸孤病毒、白血病、馬立克氏病等都有可能損傷中樞和外周免疫器官，使得新城疫疫苗的免疫應(yīng)答受到嚴(yán)重抑制。（3）疫苗的質(zhì)量、類(lèi)型影響疫苗免疫效果。（4）疫苗免疫的程序，免疫技術(shù)，免疫劑量，免疫接種的時(shí)間，免疫接種的途徑。（5）飼養(yǎng)管理的好壞，環(huán)境的是否存在野毒，應(yīng)激等因素均可影響疫苗的免疫效果。

［1］童光志主編.動(dòng)物傳染病學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2008.547.

［2］趙瑞宏，等.不同新城疫疫苗和免疫途徑對(duì)雞新城疫HI抗體的影響［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009，19：303-304.

［3］孟建斌，等.陜北地區(qū)雞新城疫免疫監(jiān)測(cè)及分析［J］.畜牧獸醫(yī)雜志，2012，39（6）：4-5.

［4］吳玲，等.影響雞新城疫免疫效果的因素及應(yīng)對(duì)措施［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2014，18：254-256.

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.029

盧小明（1982～），廣東省東莞市人，助理獸醫(yī)師，從事動(dòng)物疫病防控工作