吳書勝　何義富　孫玉蓓　季楚舒#

1安徽省立醫(yī)院西區(qū)（安徽省腫瘤醫(yī)院）腫瘤內(nèi)科一病區(qū)，合肥　230071

2安徽省立醫(yī)院腫瘤化療科，合肥　230001

CHFR基因編碼蛋白在食管癌組織中的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義△

吳書勝1何義富2孫玉蓓2季楚舒2#

1安徽省立醫(yī)院西區(qū)（安徽省腫瘤醫(yī)院）腫瘤內(nèi)科一病區(qū)，合肥230071

2安徽省立醫(yī)院腫瘤化療科，合肥230001

目的觀察有絲分裂前期檢查點(diǎn)基因CHFR在食管癌、食管上皮內(nèi)瘤變及正常食管組織中蛋白的表達(dá)，了解食管癌中CHFR蛋白表達(dá)與患者臨床病理資料之間的關(guān)系，探討其在食管癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及相關(guān)的分子機(jī)制。方法收集食管癌標(biāo)本92例以及相配對的食管上皮內(nèi)瘤變11例，另取正常食管組織27例。采用免疫組化檢測92例食管癌及其對應(yīng)的食管上皮內(nèi)瘤變、正常食管組織中CHFR蛋白的表達(dá)。通過免疫組化半定量積分法判斷免疫組化結(jié)果。結(jié)果食管癌組織中CHFR蛋白陽性表達(dá)率為7.61%（7/92），低于正常食管組織的96.3%（26/27）和食管上皮內(nèi)瘤變組織的54.55%（6/11），且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；食管上皮內(nèi)瘤變組織中CHFR蛋白陽性表達(dá)率也低于正常食管組織，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。高分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率的33.33%（6/18）明顯高于中-低分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率的1.35%（1/74），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?；颊叩牟煌挲g、性別以及其他病理資料之間CHFR蛋白表達(dá)陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論食管癌中有絲分裂檢查點(diǎn)基因CHFR蛋白的表達(dá)下調(diào)或缺失是頻發(fā)、早期事件，可能參與食管癌的發(fā)生發(fā)展，其與食管癌分化程度的關(guān)系可能更為密切。

食管癌；CHFR；免疫組化

Oncol Prog，2016，14（7）

近年來，有絲分裂前期檢查點(diǎn)基因CHFR的研究已成為腫瘤分子靶點(diǎn)研究的熱點(diǎn)。CHFR在人正常組織中廣泛表達(dá)，而在多種人腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)［1］。許多研究顯示，與正常細(xì)胞或組織相比，在腫瘤組織或細(xì)胞株中CHFR mRNA表達(dá)下調(diào)或缺失，CHFR啟動(dòng)子區(qū)5'端CpG島超甲基化是表達(dá)下調(diào)的主要原因［2］。目前國內(nèi)外關(guān)于食管癌中CHFR蛋白表達(dá)的研究較少，本研究使用免疫組化檢測二步法，檢測92例食管癌組織及與其相對應(yīng)的11例食管黏膜上皮內(nèi)瘤變與27例正常食管黏膜CHFR蛋白的表達(dá)。探索CHFR蛋白表達(dá)在食管癌早期診斷及臨床病理學(xué)中的意義。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

收集安徽省立醫(yī)院2010年3月至2011年12月胸外科手術(shù)切除的食管癌標(biāo)本92例以及相配對的食管上皮內(nèi)瘤變11例，其中癌組織取自腫瘤組織的中心位置，另取正常人的食管組織27例，所有病例均經(jīng)病理組織學(xué)檢查證實(shí)?；颊吣挲g40～78歲，其中≥60歲52例，＜60歲40例；男性83例，女性9例；組織病理類型：鱗狀細(xì)胞癌89例，腺癌3例；分化程度：高分化18例，中分化59例，低分化15例；根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）食管癌TNM分期：Ⅰ/Ⅱ期42例，Ⅲ/Ⅳ期50例；腫瘤浸潤深度：T1/T2期19例，T3/T4期73例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N0期36例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N1期56例。

1.2試驗(yàn)方法

制作組織蠟塊，將組織蠟塊行2μm連續(xù)切片，采用GBI公司推出的免疫組化檢測二步法檢測92例食管癌與其對應(yīng)的食管上皮內(nèi)瘤變及正常食管組織中CHFR蛋白的表達(dá)。通過免疫組化半定量積分法判斷免疫組化結(jié)果［3］。免疫組織化學(xué)結(jié)果由染色強(qiáng)度和染色頻率兩者來評估，0～1分為陰性，2～3分為陽性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1　正常食管、食管癌、食管上皮內(nèi)瘤變組織中CHFR蛋白免疫組化染色情況

2　結(jié)果

2.1CHFR蛋白在組織中的表達(dá)

食管癌組織中CHFR蛋白陽性表達(dá)率低于正常食管組織和食管上皮內(nèi)瘤變組織，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；食管上皮內(nèi)瘤變組織中CHFR蛋白陽性表達(dá)率也低于正常食管組織，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表1、圖1。

表1　CHFR蛋白表達(dá)陽性率比較

2.2CHFR蛋白表達(dá)與食管癌患者臨床病理資料的關(guān)系

高分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率（33.33%）明顯高于中-低分化食管癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率（1.35%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；患者在不同年齡、性別以及其他病理資料間CHFR蛋白表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2、圖1）

3　討論

CHFR蛋白表達(dá)缺失與食管癌的發(fā)生關(guān)系密切，可能是食管黏膜癌變過程中的早期分子事件，先前學(xué)者的研究也支持本研究結(jié)果。有學(xué)者使用免疫組織化學(xué)法檢測75例食管腺癌組織，發(fā)現(xiàn)75%（56/75）的食管腺癌組織CHFR蛋白表達(dá)缺失或減少；相反，100%（10/10）正常食管組織CHFR蛋白表達(dá)以及83%（5/6）與食管癌相對應(yīng)的癌前病變Barrett食管中CHFR蛋白表達(dá)陽性［3］。盡管該學(xué)者認(rèn)為病例數(shù)有限，未行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，但我們可以看到CHFR蛋白表達(dá)缺失與食管腺癌的發(fā)生關(guān)系密切，我們可擴(kuò)大病例數(shù)進(jìn)一步尋找兩者之間的關(guān)系。

表2　CHFR蛋白表達(dá)與食管癌患者臨床病理因素的關(guān)系

本組研究發(fā)現(xiàn)，在92例食管癌中，CHFR蛋白陽性表達(dá)率為7.61%，正常食管組織及食管上皮內(nèi)瘤變組CHFR蛋白陽性表達(dá)率分別為96.30%（26/27）和54.55%（6/11），食管癌組CHFR蛋白的陽性表達(dá)率低于正常食管組織及食管上皮內(nèi)瘤變組（P＜0.05），提示食管癌發(fā)生過程中CHFR蛋白表達(dá)下降，推測可能與CHFR基因缺失或突變有關(guān)，也可能在轉(zhuǎn)錄水平或轉(zhuǎn)錄后水平受到特異性調(diào)控而導(dǎo)致蛋白表達(dá)受到抑制。高分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率為33.33%（6/18），中-低分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率為1.35%（1/74），高分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率明顯高于中-低分化的食管癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示食管癌的分化程度越低，CHFR蛋白表達(dá)的下調(diào)越明顯。但食管癌中CHFR蛋白的表達(dá)在患者不同性別、年齡、組織類型、TNM病理分期、腫瘤浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床資料之間未見顯著性差異（P＞0.05）。

在消化道腫瘤中，Hu等［4］運(yùn)用免疫組織化學(xué)法檢測了123例胃癌組織中CHFR蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)52%（64/123）的胃癌組織CHFR表達(dá)陽性。分化好的胃癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率為70%（30/43），分化差的胃癌組織中CHFR蛋白表達(dá)陽性率為43%（34/80），兩者之間具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.004）。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果與Hu等研究結(jié)果基本一致，但Hu等研究結(jié)果顯示為胃癌中CHFR蛋白表達(dá)陽性率明顯高于食管癌中CHFR蛋白表達(dá)陽性率。原因考慮有以下兩點(diǎn)：①CHFR蛋白的表達(dá)具有組織差異性，在消化道腫瘤CHFR基因啟動(dòng)子區(qū)超甲基化可能是CHFR蛋白表達(dá)缺失或減少的主要原因，Morioka等［5］研究顯示原發(fā)性食管癌和胃癌中CHFR啟動(dòng)子區(qū)超甲基化率分別是24%（9/28）和30%（16/53）。②免疫組化結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)不一致，Hu等免疫組化結(jié)果的判斷只是根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)百分比，陽性細(xì)胞數(shù)≥20%視為陽性，＜20%視為陰性。

在其他人腫瘤組織中，同樣有文獻(xiàn)報(bào)道CHFR蛋白表達(dá)下調(diào)或缺失。Privette等［6］同樣使用免疫組化法檢測了142例原發(fā)性浸潤性乳腺癌，36% CHFR蛋白表達(dá)陰性，只有0.5%CHFR免疫組化染色呈強(qiáng)陽性。正常乳腺上皮細(xì)胞CHFR免疫組化染色明顯呈陽性。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌中39%（62/157）CHFR蛋白表達(dá)下調(diào)，鱗癌中CHFR蛋白表達(dá)陽性率為22%，而肺腺癌中CHFR蛋白表達(dá)陽性率高達(dá)74%，兩者之間差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。另外非小細(xì)胞肺癌CHFR蛋白表達(dá)在高分化和中-低分化中分別為80%和51%（P=0.005）。此外，CHFR蛋白表達(dá)下調(diào)與吸煙相關(guān)性肺鱗癌和預(yù)后不良之間均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，多因素分析顯示CHFR蛋白表達(dá)可作為肺癌的獨(dú)立預(yù)后因素［7］。

4　小結(jié)

本研究通過運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測并闡述了食管癌及與其對應(yīng)的食管上皮內(nèi)瘤變、正常食管黏膜中有絲分裂前期檢查點(diǎn)基因CHFR的蛋白表達(dá)之間的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)：有絲分裂檢查點(diǎn)基因CHFR在食管癌中蛋白的表達(dá)下調(diào)或缺失是頻發(fā)事件，可能參與食管癌的發(fā)生，其與食管癌分化程度的關(guān)系可能更為密切。

［1］Scolnick DM，Halazonetis TD.Chfr defines a mitotic stress checkpoint that delays entry into metaphase［J］.Nature，2000，406（6794）:430-435.

［2］Summers MK，Bothos J，Halazonetis TD.The CHFR mitotic checkpoint protein delays cell cycle progression by excluding Cyclin B1 from the nucleus［J］.Oncogene，2005，24（16）:2589-2598.

［3］Delellis RA.Basic techniquesof immunochemistry，in Diag-nostic immunohistochemistry［M］.NewYork:Masson Publishing USA，1981:7-16.

［4］Hu SL，Huang DB，Sun YB，et al.Pathobiologic implications of methylation and expression status of Runx3 and CHFR genes in gastric cancer［J］.Med Oncol，2011，28（2）: 447-454.

［5］Morioka Y，Hibi K，Sakai M，et al.Aberrant methylation of the CHFR gene in digestive tract cancer［J］.Anticancer Res，2006，26（3A）:1791-1795.

［6］Privette LM，González ME，Ding L，et al.Altered expression of the early mitotic checkpoint protein，CHFR，in breast cancers:implications for tumor suppression［J］.Cancer Res，2007，67（13）:6064-6074.

［7］Takeshita1 M，Koga1 T，Takayama K，et al.CHFR expression is preferentially impaired in smoking-related squamous cell carcinoma of the lung，and the diminished expression significantly harms outcomes［J］.Int J Cancer，2008，123（7）:1623-1630.

Protein expression of CHFR gene in esophageal cancer and the pathological significance△

WU Shu-sheng1HE Yi-fu2SUN Yu-pei2JI Chu-shu2#
1Department of Medical Oncology，Western Section of Anhui Provincial Hospital，Hefei 230071，Anhui，China
2Department of Chemotherapy，Anhui Provincial Hospital，Hefei 230001，Anhui，China

ObjectiveTo observe the protein expression of CHFR prophase check point gene in esophageal cancer，esophageal intraepithelial neoplasia，and normal esophageal tissues，discuss the relationship between the protein expression of CHFR in esophageal cancer and clinicopathologic characteristics，and to explore the correlating molecular mechanism of CHFR expression in esophageal carcinogenesis and development.Method92 specimens of esophageal cancer，11 matched samples of esophageal intraepithelial neoplasia，and 27 samples of normal esophageal tissues were collected，in which the protein expression of CHFR were detected immunohistochemically.Semi-quantitative immunohistochemical analysiswasappliedtoevaluatetheimmunohistochemicalresults.ResultThepositiverateofCHFRproteinexpressionwas 7.61%（7/92）in esophageal cancers，and was significantly lower than that in normal esophageal tissues at 96.3%（26/27）and in esophageal intraepithelial neoplasia at 54.55%（6/11）（P＜0.05），respectively；And the positive expression of CHFR in esophageal intraepithelial neoplasia was also lower as compared with that in normal tissues（P＜0.05）；In well differentiated esophageal cancer tissues，the positive rate of CHFR protein expression was 33.33%（6/18），and was significantly higher than that in moderately or poorly differentiated esophageal cancers，with significant difference observed（P＜0.05）；No obvious correlation was observed between the CHFR protein expression and age，gender as well as other pathologic characteristics（P＞0.05）.ConclusionDown-regulation or absence of mitotic checkpoint CHFR protein expression is a frequent and early event，which may be involved in the esophageal carcinogenesis and is potentially yet closely related with the differentiation of esophageal cancers.

esophageal cancer；CHFR；immunohistochemisty

R735.1

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.07.15

2016-04-05）

安徽省科技計(jì)劃項(xiàng)目（10021303022）

（corresponding author），郵箱：jichushu@csco.org.cn