鎘脅迫對(duì)2個(gè)寧夏主栽水稻品種幼苗期抗氧化同工酶亞基及其活性的影響

黃雪妮　屈凡　馬名立

摘要：為探討2個(gè)寧夏主栽水稻品種萌發(fā)期、幼苗期對(duì)鎘（Cd）脅迫的形態(tài)、生理生化響應(yīng)，明確Cd污染對(duì)水稻的傷害機(jī)理，并為早期檢測(cè)提供理論依據(jù)，以富源4號(hào)、寧梗28號(hào)為研究對(duì)象，于人工氣候室內(nèi)培養(yǎng)，設(shè)置3個(gè)Cd處理濃度（0、50、100 μmol/L），研究不同處理對(duì)水稻發(fā)芽率、胚芽鞘長(zhǎng)度、胚根數(shù)、主根長(zhǎng)的影響以及根系中活性氧類（ROS）的累積和細(xì)胞凋亡情況；采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）技術(shù)分析Cd對(duì)4種抗氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化物酶（POD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）]同工酶亞基的影響。結(jié)果顯示：（1）Cd毒害使根系產(chǎn)生大量活性氧類而誘導(dǎo)根尖伸長(zhǎng)區(qū)細(xì)胞死亡，從而抑制了2個(gè)品種主根生長(zhǎng)，但卻使根數(shù)增加；（2）100 μmol/L Cd抑制了富源4號(hào)SOD同工酶亞基，導(dǎo)致SOD總活性下降，CAT活卻顯著性增強(qiáng)；（3）寧梗28比富源4號(hào)有較強(qiáng)的耐受Cd的能力。分析結(jié)果可知：胚根數(shù)的增加是寧夏水稻耐受Cd脅迫的重要措施；Cd脅迫下的SOD活性以及SOD同工酶亞基是可以用來(lái)鑒定水稻受重金屬脅迫的一個(gè)重要的生理傷害指標(biāo)；CAT對(duì)Cd 脅迫下的水稻起重要的抗氧化保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：Cd脅迫；水稻；同工酶；活性氧（ROS）；細(xì)胞凋亡

中圖分類號(hào)： S511.01 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2016）07-0107-06

水稻是寧夏平原引黃灌溉區(qū)的主要糧食作物之一，也是寧夏平原重要的經(jīng)濟(jì)作物，大面積種植的水稻品種有寧梗系列、富源4號(hào)等[1]。但是，隨著黃河沿岸經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展，含有重金屬污染物的工業(yè)廢水被排入黃河，導(dǎo)致黃河水質(zhì)不斷惡化，重金屬污染成為沿黃區(qū)水稻種植面臨的重要問(wèn)題，尤其是重金屬鎘（Cd）作為生物毒性極強(qiáng)的元素，不但在土壤中的化學(xué)活性大，而且移動(dòng)性強(qiáng)、毒性持久。水稻是一種極易富集Cd的農(nóng)作物，可以將Cd累積在籽粒部位，通過(guò)食物鏈的傳遞進(jìn)入人體。“鎘米”嚴(yán)重危及人體健康，能夠致病、致癌、致病變。因此，污染區(qū)稻米產(chǎn)品的安全性一直受到重視[2-3]。

目前，關(guān)于水稻對(duì)Cd的吸收積累途徑、Cd在水稻中的分布規(guī)律，及Cd對(duì)水稻生長(zhǎng)發(fā)育的毒害機(jī)理等方面已有大量的報(bào)道[4-7]，Cd對(duì)水稻的生態(tài)生理效應(yīng)趨于成熟。而有研究表明，不同品種的水稻對(duì)Cd的耐受性及累積性有顯著差異[4]，種子萌發(fā)期既是水稻生活周期的起點(diǎn)，也是水稻感知外界環(huán)境的最初生命階段，水稻種子萌發(fā)時(shí)期的生長(zhǎng)狀況直接影響水稻后期的發(fā)育和產(chǎn)量。目前，關(guān)于Cd在水稻生活周期不同發(fā)育階段的效應(yīng)，尤其是寧夏主栽水稻品種對(duì)重金屬Cd響應(yīng)方面的研究鮮有報(bào)道。筆者以寧夏主栽水稻品種寧梗28號(hào)、富源4號(hào)為研究對(duì)象，研究Cd脅迫對(duì)這2個(gè)品種的萌發(fā)率、胚芽鞘長(zhǎng)度、主根數(shù)、根系中活性氧類（ROS）累積、根系凋亡以及超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化物酶（POD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）同工酶的影響，旨在探討重金屬脅迫對(duì)寧夏主栽水稻抗氧化同工酶基因表達(dá)的影響以及水稻在重金屬脅迫下的抗性差異，為揭示Cd對(duì)寧夏主栽水稻品種毒害的生理機(jī)理及保障糧食安全和監(jiān)測(cè)重金屬污染提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以寧夏主栽水稻品種富源4號(hào)、寧梗28號(hào)為試驗(yàn)材料，種子購(gòu)于寧夏賀蘭縣種子公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 水稻的萌發(fā)與處理 挑選大小一致、顆粒飽滿的當(dāng)年產(chǎn)水稻種子，先用蒸餾水沖洗干凈，后用10%次氯酸鈉溶液浸泡消毒10 min，再用蒸餾水沖洗5次，于25 ℃蒸餾水中浸種4 h，讓種子充分吸脹。取直徑12 cm、鋪有2層消毒濾紙的培養(yǎng)皿，將種子鋪于其中，每個(gè)培養(yǎng)皿中均勻擺放30粒種子。對(duì)照組（CK）即非脅迫處理，每天加入10 mL滅菌水；Cd處理1每天加入10 mL 50 μmol/L Cd，處理2每天加入10 mL 100 μmol/L Cd，每個(gè)處理重復(fù)3次。將對(duì)照與各處理放置于人工氣候箱中黑暗培養(yǎng)，溫度28 ℃，濕度40%，注意通風(fēng)。

1.2.2 種子萌發(fā)指標(biāo)的測(cè)量 發(fā)芽期間，每天定時(shí)記錄萌發(fā)數(shù)（以種子露白為發(fā)芽標(biāo)準(zhǔn)），萌發(fā)2 d開(kāi)始測(cè)量胚芽鞘長(zhǎng)度（mm），每次隨機(jī)挑選15粒進(jìn)行測(cè)量，計(jì)算平均值。發(fā)芽率（GR）即培養(yǎng)3 d時(shí)發(fā)芽種子數(shù)占種子總數(shù)的比例（%），萌發(fā)5 d后移栽至1/2 Hoagland培養(yǎng)液中，處理濃度不變。

1.2.3 可溶性總蛋白的提取及同工酶電泳 待幼苗生長(zhǎng)至10 cm時(shí)，各稱取0.5 g幼苗樣品，在冰浴條件下在樣品中加入 2 mL 酶提取液[0.1 mol/L Tris-HCl緩沖液，pH值8.0（每100 mL含0.073 g半胱氨酸、0.105 g維生素C、20.075 g EDTA-Na、10 mL甘油、5.84 mL 1 mol/L HCl）]，研磨至勻漿，于4 ℃、13 000 r/min離心20 min，上清液即為酶粗提取液，用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定總蛋白含量[8]。

同工酶電泳采用北京六一生物科技有限公司生產(chǎn)的垂直板凝膠電泳儀。超氧化物歧化酶、過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化物酶電泳時(shí)采用10%分離膠、5%濃縮膠?？箟难徇^(guò)氧化物酶采用7.5%分離膠、5%濃縮膠。上樣量45 μL，預(yù)電泳10 min，濃縮膠中穩(wěn)定電壓為80 V，進(jìn)入分離膠后穩(wěn)定電壓為120 V，電流200 mA。于冰浴中電泳3～4 h后，當(dāng)指示染料下行至距膠板末端1～2 cm 時(shí)停止電泳[9]。

1.2.3.1 同工酶染色及拍照 SOD同工酶的染色采用氮藍(lán)四唑同工酶法[10]，POD同工酶染色采用乙酸-聯(lián)苯胺法[10]，CAT同工酶染色采用淀粉法[11]，APX同工酶染色參照邵巍等的方法[12]，根據(jù)染色的酶譜計(jì)算相對(duì)遷移率Rf：

Rf=酶帶遷移距離/前沿指示劑距離。

1.2.3.2 酶活性的測(cè)定 SOD活性測(cè)定采用氮藍(lán)四唑（NBT）法[13]，POD活性測(cè)定采用愈創(chuàng)木酚法[14]，CAT、APX活性的測(cè)定采用吳倩的方法[15]。每個(gè)處理重復(fù)3次，所得數(shù)據(jù)用GraphPadprism 5.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

1.2.4 根系中ROS的累積及根系凋亡檢測(cè) 為了檢測(cè)Cd脅迫下水稻根系中ROS的累積隨時(shí)間的變化情況，以富源4號(hào)的根系為材料?；钚匝醯臋z測(cè)：ROS Assay Kit，購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，用二甲基亞砜（DMSO）稀釋成母液后保存于-20 ℃，工作液按1 ∶ 1 000的比例稀釋。以用100 μmol Cd處理0、24、48、72 h的主根根尖為材料，經(jīng)大量純凈水沖洗干凈后，浸泡于ROS染色液中，于37 ℃溫育20 min；用滅菌去離子水沖洗干凈，裝載于載玻片上，在熒光顯微鏡激發(fā)波長(zhǎng)為480 nm的條件下觀察活性氧的累積情況，每個(gè)處理重復(fù)8次。

Cd脅迫下根系細(xì)胞凋亡情況用碘化丙錠（PI）檢測(cè)：碘化丙啶購(gòu)自Sigma公司，是一種細(xì)胞核染料，能特異穿透死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜而不能穿過(guò)活性細(xì)胞的細(xì)胞膜，從而達(dá)到鑒別活細(xì)胞的作用。先將PI粉末溶于滅菌水中，配制成濃度為 10 μg/mL 的母液，然后將母液用0.9% NaCl按1 ∶ 100的比例稀釋成工作液。根系處理方法同ROS染色處理，步驟、時(shí)間一樣，選取均勻一致的主根，浸泡在工作液中染色大約 3 min，然后用0.9% NaCl溶液沖洗干凈、壓片，于熒光顯微鏡下觀察并拍照，整個(gè)過(guò)程要求在暗條件下操作，以防熒光猝滅。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果與分析

2.1.1 水稻種子的萌發(fā)率和胚芽鞘長(zhǎng)度 表1結(jié)果顯示：與CK相比，隨著Cd脅迫濃度的增加，2個(gè)品種水稻在處理3 d的發(fā)芽率沒(méi)有被明顯抑制，甚至Cd處理能在一定程度上促進(jìn)種子的萌發(fā)，寧28的萌發(fā)率比富源4號(hào)高。培養(yǎng)7 d的主根長(zhǎng)、胚根數(shù)測(cè)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2個(gè)梯度的Cd處理能增加2個(gè)品種的胚根數(shù)，50 μmol/L Cd能極顯著增加寧梗28根數(shù)（P<0.01），富源4號(hào)的根數(shù)也極顯著增加（P 圖1結(jié)果顯示，在非脅迫處理下，寧梗28的胚芽鞘長(zhǎng)度比富源4號(hào)長(zhǎng)，50 μmol/L Cd在一定程度上能促進(jìn)種子萌發(fā)、胚芽鞘生長(zhǎng)，但是100 μmol/L Cd卻能夠抑制胚芽鞘生長(zhǎng)。寧梗28的胚芽鞘長(zhǎng)度比富源4號(hào)長(zhǎng)，而胚芽鞘長(zhǎng)度可以作為抗逆性的形態(tài)指標(biāo)之一[16]，可見(jiàn)與富源4號(hào)相比，寧梗28對(duì)Cd脅迫有較強(qiáng)的抗逆性。

2.1.2 根系中ROS的累積及細(xì)胞凋亡檢測(cè) 圖2結(jié)果顯示，與對(duì)照（CK）相比，100 μmol/L Cd脅迫24 h之后，根尖出現(xiàn)了較強(qiáng)的熒光，說(shuō)明水稻根系中累積了較多ROS；48 h后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，根尖中的ROS仍然沒(méi)有及時(shí)被清除；而72 h之后熒光明顯減弱。同樣，PⅠ染色檢測(cè)根尖細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示，隨著Cd暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，在72 h時(shí)熒光強(qiáng)度最大。檢測(cè)結(jié)果顯示，細(xì)胞凋亡部位主要發(fā)生在根尖分生區(qū)、伸長(zhǎng)區(qū)部位，這可能是導(dǎo)致主根伸長(zhǎng)生長(zhǎng)被抑制的主要原因。

2.1.3 水稻同工酶電泳及酶活性測(cè)定結(jié)果

2.1.3.1 Cd對(duì)2個(gè)品種SOD同工酶及酶活的影響 圖3-a 富源4號(hào)同工酶電泳結(jié)果顯示，與對(duì)照相比，50 μmol/L Cd使SOD亞基出現(xiàn)了8條帶，Rf值分別為0.12、0.23、0.32、0.45、0.57、0.71、0.78、0.84，并且S3、S4、S5亞基的亮度明顯增強(qiáng)。圖3-b酶活測(cè)定結(jié)果顯示，低濃度Cd能夠使SOD活性極顯著上升（P

2.1.3.2 不同處理對(duì)POD的影響 由圖4-a可知，富源4號(hào)POD同工酶電泳結(jié)果出現(xiàn)7條Rf值分別為0.07、0.21、0.39、0.58、0.61、0.85、0.91的酶帶，隨著Cd2+濃度的增加，富源4號(hào)POD亞基條帶數(shù)沒(méi)有變化，P4亞基的亮度稍有增加。同步酶活測(cè)定結(jié)果顯示，Cd濃度的增加并沒(méi)有顯著性引起POD活性的變化（圖4-b）。圖4-c寧28的POD同工酶電泳結(jié)果也顯示有7條酶帶，P4亞基隨著Cd2+濃度的增大而逐漸加深；POD活性沒(méi)有顯著性的變化（圖4-d）。

這一結(jié)果表明，在Cd脅迫早期，POD并沒(méi)有起到明顯的抗氧化保護(hù)作用，有研究認(rèn)為，POD很有可能是植物受到傷害的一個(gè)重要的生理傷害指標(biāo)，是植物體內(nèi)H2O2過(guò)度累積的一個(gè)重要標(biāo)志。因此推測(cè)，可能水稻體內(nèi)的H2O2暫時(shí)沒(méi)有過(guò)度累積，因此POD活性沒(méi)有顯著上升。

2.1.3.3 Cd處理對(duì)水稻CAT的影響 不同濃度的Cd脅迫處理后，富源4號(hào)CAT同工酶圖譜顯示3條酶譜帶，Rf值分別為0.12、0.18、0.29，C1、C3的亮度逐漸加大、條帶加寬（圖5-a）；由圖5-c可知，寧梗28同工酶電泳結(jié)果也顯示3條帶，C2、C3亞基的亮度隨著Cd濃度的增大而增強(qiáng)。酶活測(cè)定結(jié)果顯示，100 μmol/L Cd脅迫都能使CAT活性極顯著上升（P<0.01）（圖5-b、圖5-d）。這一結(jié)果表明，CAT在Cd脅迫下并沒(méi)有被抑制，可能在抗氧化保護(hù)系統(tǒng)中起到比較重要的作用。

2.1.3.4 不同Cd濃度對(duì)水稻APX的影響 由圖6-a、圖6-b可見(jiàn)，富源4號(hào)的APX活性無(wú)明顯變化，100 μmol/L Cd使A7亞基亮度降低。由圖6-c、圖6-d可見(jiàn)，寧梗28的APX在100 μmol/L Cd脅迫下條帶亮度稍有增強(qiáng)， 但是在酶

活性上沒(méi)有明顯差異。這些結(jié)果說(shuō)明，在脅迫早期，APX對(duì)Cd的響應(yīng)不明顯。

3 討論

關(guān)于Cd對(duì)種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)方面的影響已經(jīng)有大量報(bào)道，楊穎麗等研究發(fā)現(xiàn)，低濃度Cd對(duì)種子萌發(fā)有一定的促進(jìn)作用[17]，本研究結(jié)果與之相似，這可能是由于萌發(fā)初期Cd對(duì)淀粉酶活力略有提高作用，從而促進(jìn)了細(xì)胞分裂[18]。而高濃度Cd對(duì)主根伸長(zhǎng)生長(zhǎng)的顯著抑制作用可能與Cd進(jìn)入細(xì)胞之后導(dǎo)致細(xì)胞分裂出現(xiàn)障礙或不正常分裂[19-20]、根系中ROS的過(guò)量累積而導(dǎo)致根尖細(xì)胞死亡有重要關(guān)系，說(shuō)明Cd脅迫對(duì)水稻根系發(fā)育及胚芽生長(zhǎng)有明顯抑制作用，而寧梗

28、富源4號(hào)對(duì)Cd脅迫的一個(gè)重要形態(tài)響應(yīng)就是增加胚根數(shù)。

抗氧化同工酶是植物體內(nèi)最活躍的酶系之一，逆境脅迫可以調(diào)節(jié)同工酶基因在不同水平上表達(dá)，不良的環(huán)境因素常常引起基因的變異而導(dǎo)致酶結(jié)構(gòu)的改變，這種改變反映在同工酶的酶譜上出現(xiàn)了不同數(shù)量、不同遷移率的譜帶，因此同工酶的表達(dá)是遺傳因子與環(huán)境因子共同作用的結(jié)果。通過(guò)對(duì)抗氧化同工酶的分析，可以初步了解寧夏水稻品種對(duì)不良環(huán)境的響應(yīng)。當(dāng)Cd被吸收進(jìn)入水稻體內(nèi)之后，刺激產(chǎn)生有害的過(guò)氧化物，當(dāng)脅迫發(fā)生后，水稻體內(nèi)的過(guò)氧化物酶系統(tǒng)會(huì)被激活起到保護(hù)作用；但當(dāng)脅迫發(fā)生超過(guò)水稻忍受極限時(shí)，其防御措施也就相應(yīng)減弱，乃至死亡。SOD第1個(gè)參與 O-2 · 的清除反應(yīng)，生成H2O2、O2，在抗氧化酶類中處于重要地位。SOD活性的高低可以在一定程度上反映植物抗逆本領(lǐng)的強(qiáng)弱[21-22]，Liu等研究表明，日本忍冬具有較強(qiáng)的富集重金屬Cd的能力，經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在重金屬脅迫下忍冬體內(nèi)具有較高的SOD活性[23]。而本試驗(yàn)結(jié)果表明，2個(gè)寧夏水稻在遭受Cd脅迫后，SOD同工酶基因在譜帶數(shù)、表達(dá)量上都發(fā)生了明顯的變化，SOD同工酶S3、S4亞基基因的被抑制效應(yīng)，導(dǎo)致SOD活性在高濃度Cd脅迫下極顯著地被抑制，因此推測(cè)SOD在Cd脅迫下不能起關(guān)鍵的抗氧化保護(hù)作用，活性氧代謝系統(tǒng)失調(diào)的主要產(chǎn)物可能為H2O2，而非 O-2 · 。

CAT在重金屬抗性方面起到重要作用，能夠高效地分解H2O2為H2O、O2而不需要消耗任何物質(zhì)，因此能積極地響應(yīng)體內(nèi)H2O2累積，從而避免H2O2從過(guò)氧化物酶體擴(kuò)散至細(xì)胞而造成氧化毒害。在煙草中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了CAT基因編碼的3種蛋白質(zhì)用來(lái)清除體內(nèi)產(chǎn)生的H2O2[24]。筆者研究發(fā)現(xiàn)，在SOD被抑制的情況下，CAT活性卻在顯著上升，CAT同工酶隨著Cd濃度的升高，出現(xiàn)新的酶條帶亞基，可能在后期將 O-2 · 、H2O2清除，從而最大限度地減少HO-的形成。

由于ROS的累積與POD的活性呈顯著線性關(guān)系，MacFarlane等將POD活性的上升認(rèn)為是遭受重金屬脅迫的一個(gè)重要的指標(biāo)[25]。本研究表明，在Cd脅迫早期，無(wú)論是同工酶電泳還是酶活檢測(cè)，結(jié)果都顯示POD沒(méi)有明顯改變，因此推測(cè)水稻幼苗中的H2O2物質(zhì)未累積的較多，導(dǎo)致酶活基本未變。在本試驗(yàn)中，早期POD沒(méi)有明顯變化，可能與脅迫程度和CAT對(duì)ROS的積極清除有關(guān)。

4 結(jié)論

（1）Cd對(duì)水稻根系毒害主要表現(xiàn)在根系中ROS的累積、根尖伸長(zhǎng)區(qū)細(xì)胞的凋亡以及根系生長(zhǎng)被抑制，而寧夏水稻根系適應(yīng)Cd脅迫的一個(gè)重要措施就是增加胚根數(shù)。（2）SOD亞基S3、S4的被抑制效應(yīng)，是導(dǎo)致SOD活性下降的主要原因，因此Cd脅迫下SOD活性以及SOD同工酶是可以用來(lái)鑒定水稻受重金屬脅迫的一個(gè)重要的生理傷害指標(biāo)。（3）CAT在寧夏水稻清除Cd誘導(dǎo)的過(guò)氧化損傷中起到重要的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]王興盛. 寧夏水稻[J]. 北方水稻，2007（1）：19-22.

[2]冉 烈，李會(huì)合. 土壤鎘污染現(xiàn)狀及危害研究進(jìn)展[J]. 重慶文理學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，30（4）：69-73.

[3]吳啟堂，陳 盧，王廣壽. 水稻不同品種對(duì)吸收Cd 積累的差異和機(jī)理研究[J]. 生態(tài)學(xué)報(bào)，1999，19（1）：104-107.

[4]何俊瑜，任艷芳. Cd脅迫對(duì)水稻種子萌發(fā)，幼苗生長(zhǎng)和淀粉酶活性的影響[J]. 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，23（增刊1）：131-134.

[5]蔣 彬，張慧萍. 水稻精米中鉛鎘砷含量基因型差異的研究[J]. 云南師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2002，22（3）：37-40.

[6]譚周镃. 稻米重金屬污染的調(diào)查研究及其對(duì)策思考[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，1999（5）：26-28.

[7]陳懷滿，鄭春榮，王慎強(qiáng)，等. 不同來(lái)源重金屬污染的土壤對(duì)水稻的影響[J]. 生態(tài)與農(nóng)村環(huán)境學(xué)報(bào)，2001，17（2）：35-40.

[8]Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding[J]. Analytical Biochemistry，1976，72（72）：248-254.

[9]段中崗，梁承鄴. 改良聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定秈粳分化的同工酶帶[J]. 蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2015，41（4）：30-33.

[10]張麗萍. 重金屬脅迫對(duì)大麥部分生理生化指標(biāo)的影響[D]. 太原：山西大學(xué)，2005.

[11]孫 云. 茶葉抗壞血酸過(guò)氧化物酶的生理學(xué)與分子生物學(xué)研究[D]. 福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2009.

[12]邵 巍，賴鐘雄，賴呈純，等. 龍眼胚性培養(yǎng)物APX同工酶的分析方法建立及其在龍眼體胚發(fā)生過(guò)程中的變化[J]. 福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，37（2）：140-144.

[13]胡家恕，邵愛(ài)萍，任愛(ài)霞. SOD活性和同工酶檢測(cè)系統(tǒng)中干擾因素的研究[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)：農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2002，28（2）：179-182.

[14]代其林. 水楊酸對(duì)低溫下水稻幼苗生理生化特性的影響[D]. 成都：四川大學(xué)，2004.

[15]吳 倩. CAT調(diào)控水稻葉片光呼吸過(guò)程中抗氧化系統(tǒng)的機(jī)理研究[D]. 揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2013.

[16]王 瑋，鄒 琦. 胚芽鞘長(zhǎng)度作為冬小麥抗旱性鑒定指標(biāo)的研究[J]. 作物學(xué)報(bào)，1997，23（4）：458-467.

[17]楊穎麗，王文瑞，尤 佳，等. Cd2+脅迫對(duì)小麥種子萌發(fā)、幼苗生長(zhǎng)及生理生化特性的影響[J]. 西北師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，48（3）：88-93.

[18]楊其偉，儀慧蘭，劉 琳，等. 鎘對(duì)大麥幼苗生長(zhǎng)、淀粉酶活性及姐妹染色單體交換的影響[J]. 天津師范大學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1995，15（3）：46-50.

[19]莫文紅，李懋學(xué). 鎘離子對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞分裂的影響[J]. 植物學(xué)報(bào)，1992，9（3）：30-34.

[20]劉 宛，鄭 樂(lè)，李培軍，等. 鎘脅迫對(duì)大麥幼苗基因組DNA多態(tài)性影響[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2006，25（1）：19-24.

[21]李葵花，高玉亮，吳京姬. 轉(zhuǎn)P5CS基因馬鈴薯“東農(nóng)303”耐鹽、抗旱性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（11）：131-133.

[22]孟衡玲，張 薇，盧丙越，等. 金銀花幼苗對(duì)鹽脅迫的生理響應(yīng)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（4）：247-249.

[23]Liu Z，He X，Chen W，et al. Accumulation and tolerance characteristics of cadmium in a potential hyperaccumulator—Lonicera japonica Thunb[J]. Journal of Hazardous Materials，2009，169（1/2/3）：170-175.

[24]尹永強(qiáng)，胡建斌，鄧明軍. 植物葉片抗氧化系統(tǒng)及其對(duì)逆境脅迫的響應(yīng)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2007，23（1）：105-110.

[25]MacFarlane G R，Burchett M D. Photosynthetic pigments and peroxidase activity as indicators of heavy metal stress in the grey mangrove，Avicennia marina （Forsk.） Vierh[J]. Marine Pollution Bulletin，2001，42（3）：233-240.