王思婷，李　鵬，陳淑吟，張志勇，尹紹武，祝　斐，賈超峰，劉海林

（1.南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江蘇省生物多樣性與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210023；2.江蘇省海洋水產(chǎn)研究所，江蘇 南通 226007）

黑鯛與真鯛及其雜交子一代脂肪含量測(cè)定與脂肪酸成分分析

王思婷1，李鵬1，陳淑吟2,*，張志勇2，尹紹武1，祝斐2，賈超峰2，劉海林2

（1.南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江蘇省生物多樣性與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210023；2.江蘇省海洋水產(chǎn)研究所，江蘇 南通 226007）

為了解真鯛、黑鯛及雜交子代的脂肪和脂肪酸含量與成分，采用索氏抽提法分析4 種鯛魚肝臟、肌肉和魚骨的脂肪含量，氣相色譜法分析脂肪酸組成。結(jié)果表明，正、反雜交子代均良好地繼承了親本真鯛的優(yōu)勢(shì)，脂肪含量明顯高于親本黑鯛，且以肝臟中最為顯著。雜交后代與親代的飽和脂肪酸成分組成情況基本吻合，雜交后代中產(chǎn)生了C12∶0、C22∶0、C24∶0等幾種親代脂肪酸成分中未檢測(cè)到的脂肪酸，說明雜交后代脂肪酸組成更豐富。雜交后代的不飽和脂肪酸組成與黑鯛親本基本相同，尤其體現(xiàn)在肝臟組成上。

真鯛；黑鯛；雜交育種；脂肪；脂肪酸

黑鯛（Acanthopagrus schlegeli）又名黑加吉、烏格等，屬脊椎動(dòng)物門，魚綱、鱸形目、鯛科、黑鯛屬，抗逆性強(qiáng)、食性廣，是我國(guó)珍貴海產(chǎn)魚之一。真鯛（Pagrosomus major）地方名為加吉魚、紅加吉、銅盆魚等，屬鯛科、真鯛屬。生長(zhǎng)迅速、肉質(zhì)細(xì)膩、色澤好，是一種名貴的海產(chǎn)魚，但其抗病、抗逆性較差［1］。鑒于二者優(yōu)缺點(diǎn)，將具有不同遺傳性狀的親本個(gè)體分別進(jìn)行正交、反交，得到具有優(yōu)勢(shì)性狀的子代［2-3］。有關(guān)鯛科魚類的雜交育種已有一些報(bào)道［4-8］并也表明其雜交子代具有一定的優(yōu)勢(shì)性狀。雖然現(xiàn)有研究顯示雜交子代具有明顯的雜交優(yōu)勢(shì)，但尚不清楚雜交子代的脂肪及脂肪酸成分有何優(yōu)勢(shì)。目前關(guān)于鯛科魚類營(yíng)養(yǎng)成分的研究并不多見，相關(guān)報(bào)道關(guān)于8 種常見的經(jīng)濟(jì)魚類營(yíng)養(yǎng)成分研究［9］、海水魚與淡水魚脂肪中二十碳五烯酸（eicosapentenoic acid，EPA）、二十二碳六烯酸（docosahexoenoic acid，DHA）含量的比較［10］、4 種魚肉的基本成分及膠原蛋白含量分析［11］均表明海水魚營(yíng)養(yǎng)成分高于一般淡水魚類，鮑丹等［12］關(guān)于寶石魚、鱸魚和鮭魚的營(yíng)養(yǎng)成分分析比較，表明寶石魚有很高的食用價(jià)值，其內(nèi)臟中所含的“油團(tuán)”也具有廣闊的開發(fā)前景。馬國(guó)紅等［13］對(duì)于鱸魚骨營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的分析與評(píng)價(jià)也表明魚骨中的營(yíng)養(yǎng)成分具有很高的利用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)所用鯛魚均為海水養(yǎng)殖魚類，通過4 種鯛魚不同組織脂肪含量及脂肪酸成分測(cè)定與比較，旨在對(duì)雜交子代與親本脂肪含量及脂肪酸的成分進(jìn)行分析，為黑鯛、真鯛及其雜交后代營(yíng)養(yǎng)價(jià)值做出評(píng)價(jià)，并為其后續(xù)的加工利用及推廣養(yǎng)殖提供基礎(chǔ)資料。

1　1 材料與方法

1.1材料與試劑

實(shí)驗(yàn)材料均取自江蘇省海洋水產(chǎn)研究所下屬的省海水增養(yǎng)殖技術(shù)及種苗中心。樣品魚為混合養(yǎng)殖于同一口池塘中隨機(jī)選取，選擇體格健壯，外觀正常的黑鯛、真鯛、正交（真鯛（♀）×黑鯛（♂））F1、反交（黑鯛（♀）×真鯛（♂））F1的2 齡魚個(gè)體用于實(shí)驗(yàn)。每種鯛魚各取3 尾，體長(zhǎng)、體質(zhì)量見表1。

表1　4種鯛魚樣品的體質(zhì)量和體長(zhǎng)（n=5）Table1　Body length and body weights of four species of sea bream （ｎ= 5）

脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品 美國(guó)Sigma公司；濃鹽酸、甲醇、正己烷、氯仿、甲醇試劑（均為分析純） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2儀器與設(shè)備

7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）聯(lián)用儀 美國(guó)Agilent公司。

1.3方法

1.3.1樣品的制備

將實(shí)驗(yàn)材料分組標(biāo)記，去鱗、洗凈后，分別取肝臟、肌肉、魚骨于勻漿機(jī)中打碎混勻，冷凍干燥后粉碎，制成粉狀樣品，放入4 ℃冰箱冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2粗脂肪含量測(cè)定

索氏提取法：稱取1.3.1節(jié)制備的樣品10.00 g，置于蒸發(fā)皿中，加入約20 g海砂于沸水浴上蒸干后，在（100±5）℃干燥、研細(xì)，全部移入濾紙筒內(nèi)。蒸發(fā)皿及附有試樣的玻棒均用蘸有乙醚的脫脂棉擦凈，并將棉花放入濾紙筒內(nèi)。將濾紙筒放入脂肪抽提器的抽提筒內(nèi)，連接已干燥至恒質(zhì)量的接收瓶，由抽提器冷凝管上端加入無(wú)水乙醚或石油醚至瓶?jī)?nèi)容積的2/3處，于水浴上加熱，使乙醚或石油醚不斷回流提?。?～8 次/h），一般抽提6～12 h。取下接收瓶，回收乙醚或石油醚，待接收瓶?jī)?nèi)乙醚剩1～2 mL時(shí)在水浴上蒸干，再于（100±5）℃干燥2 h，放干燥器內(nèi)冷卻30 min后稱量。重復(fù)以上操作直至恒質(zhì)量。

1.3.3脂肪酸組成測(cè)定

準(zhǔn)確稱取100 mg樣品（液體油則取樣品量為1 滴約0.02 mL），置于15 mL樣品瓶。加1 mol/L KOH-甲醇溶液3 mL，75～80 ℃水浴20 min，放置冷卻（可水浴降溫）；再加2 mol/L鹽酸-甲醇溶液3 mL，于75～80 ℃水浴中加熱20 min，放置冷卻；加正己烷1 mL，振蕩萃取，靜止分層（需要時(shí)稍加水有助分層，去離子水）；吸取適量上層清液于-20 ℃保存，取上清液1 μL上機(jī)進(jìn)樣。

1.3.4GC-MS條件

GC條件：TG-5MS石英毛細(xì)管色譜柱（30 m× 0.25 mm，0.25 μm）；升溫程序：80 ℃保持1 min，以10 ℃/min升溫至200 ℃，繼續(xù)以5 ℃/min升溫至250 ℃，最后以2 ℃/min升溫至270 ℃，保持3 min；進(jìn)樣口溫度290 ℃；載氣為高純He，載氣流速1.2 mL/min；不分流進(jìn)樣；開閥時(shí)間1 min；進(jìn)樣體積1 μL，

MS條件：電子電離源；電子能量70 eV；離子源溫度280 ℃；傳輸線溫度280 ℃；溶劑延遲時(shí)間5.00 min；質(zhì)量掃描范圍30～400 u。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Excel進(jìn)行原始數(shù)據(jù)整理統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)均以表示；采用Statistica 10軟件進(jìn)行One-way ANOVA方差分析，并于Duncan's進(jìn)行多重比較，顯著性水平為P＜0.05。

2　結(jié)果與分析

2.1粗脂肪含量分析

2.1.14 種鯛魚不同組織粗脂肪含量分析

圖1　4種鯛魚不同組織粗脂肪含量比較Fig.1　The percentages of crude fat contents of different organs in red sea bream, black porgy and hybrids

如圖1所示，粗脂肪測(cè)定結(jié)果表明，4 種鯛魚肝臟、肌肉和魚骨3 種組織中粗脂肪含量均具有顯著差異，真鯛的粗脂肪含量在3 種組織中均相對(duì)較高，子代良好的繼承了這一優(yōu)勢(shì)性狀；雜交子代粗脂肪含量在3 種組織中的分布趨勢(shì)與親本真鯛相似，均表現(xiàn)為肝臟＞魚骨＞肌肉。

2.1.24 種鯛魚與其他經(jīng)濟(jì)魚類肌肉中粗脂肪含量比較分析

圖2　4種鯛魚與其他經(jīng)濟(jì)魚類肌肉中粗脂肪含量比較Fig.2　Crude fat contents in muscles of several kinds of economic fish

魚類肌肉中的粗脂肪含量不僅影響其肉質(zhì)和口感，也會(huì)使魚肉產(chǎn)生其特有的風(fēng)味。如圖2所示，鯛科魚類肌肉中粗脂肪含量高于常見的幾種經(jīng)濟(jì)魚類［14］，雖然正交子代肌肉中粗脂肪含量低于親本，但與其他幾種常見的經(jīng)濟(jì)魚類相比依然呈持平甚至略高水平。且反交子代保持了親本的優(yōu)勢(shì)性狀，粗脂肪含量遠(yuǎn)高于幾種常見的經(jīng)濟(jì)魚類。

2.2脂肪酸成分分析

2.2.14 種鯛魚各類脂肪酸成分分析

脂肪的存在使肉類食品加熱產(chǎn)生天然香味，高含量的多不飽和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，PUFA）更能顯著地增加食物的香味，且反映其多汁性［15］。表2表明真鯛、黑鯛雜交后代與親代的飽和脂肪酸（saturated fatty acid，SFA）成分的組成情況基本吻合，還產(chǎn)生了親代脂肪酸成分中未檢測(cè)到的C22∶0、C24∶0等幾種脂肪酸，說明雜交后代脂肪酸組成更豐富。雜交后代的不飽和脂肪酸（unsaturated fatty acid，UFA）組成基本和黑鯛親本相同，尤其體現(xiàn)在肝臟UFA組成上。UFA能夠保證細(xì)胞具有正常的生理功能，與SFA相反，UFA能夠降低血液中膽固醇和甘油三酯水平，從而起到降低血液黏稠度，促進(jìn)血液循環(huán)的作用。此外，雜交后代肌肉中的ω-3/ω-6比值比親本肌肉ω-3/ω-6比值要高一些。真鯛肌肉的ω-3/ω-6比值僅有0.40，黑鯛肌肉的ω-3/ω-6比值達(dá)到2.95，而反交子代肌肉的ω-3/ω-6比值達(dá)到3.19。雖然正交肌肉中未檢測(cè)到ω-6脂肪酸，但ω-3脂肪酸含量也相當(dāng)高。

表2　4種鯛魚不同部位的脂肪酸組成Table2　Fatty acid composition in different tissues of four species of sea bream

此外，雜交后代的EPA、DHA含量和親代相比都明顯增加。真鯛肝臟中未檢測(cè)到EPA存在，黑鯛肝臟中EPA含量為1.65%，而在正交肝臟中EPA含量達(dá)到3.19%，反交肝臟中EPA含量也有1.98%；在肌肉中，正交子代的EPA含量為1.70%，反交子代的EPA含量為1.22%，黑鯛的EPA含量為1.25%，真鯛的EPA含量為1.08%；魚骨中，真鯛僅有0.18%，而正交和反交子代EPA含量分別都達(dá)到2.53%、2.51%。親代和雜交后代的肌肉中都未檢測(cè)到DHA的存在；真鯛肝臟中也沒有檢測(cè)到DHA，黑鯛肝臟中的DHA含量為3.25%，而正交和反交子代肝臟中的DHA含量分別達(dá)到6.68%、5.50%，有著明顯增加。

圖3　4種鯛魚與其他不同魚類脂肪酸的ω-3/ω-6比較Fig.3　ω-3/ω-6 ratios of fish oil fatty acids in different kinds of fish

如圖3所示，親本一方（黑鯛）ω-3/ω-6的比值略低于鰱魚，而高于其他幾種常見的經(jīng)濟(jì)魚類。由于親本另一方（真鯛）ω-3/ω-6比值較低，導(dǎo)致雜交后代該比值均較低，但與親本真鯛相比仍具有上升趨勢(shì)。

圖4　4種鯛魚的EPA、DHA含量比較Fig.4　Comparative analysis of EPA and DHA from four species of sea bream

如圖4所示，雜交子代鯛魚中的EPA和DHA含量與親代相比，正交子代EPA和DHA含量均顯著高于親本，而反交子代EPA和DHA含量與親本相比也有不同程度的提高。

2.2.24 種鯛魚各組織脂肪酸成分比較

圖5　4種鯛魚不同組織中不同脂肪酸分類比較Fig. 5 Comparative analysis of fatty acid composition in different tissues of red sea bream, black porgy and their hybrids

如圖5所示，在肝臟中，SFA的含量親本（黑鯛60.86%、真鯛74.40%）顯著高于子代（正交39.15%、反交46.49%），而UFA和PUFA的含量則是子代（正交UFA 60.85%、PUFA 44.96%、反交UFA 53.51%、PUFA 38.05%）顯著高于親本（黑鯛UFA 39.15%、PUFA 12.32%；真鯛UFA 25.61%、PUFA 10.24%）。MUFA的含量是親本黑鯛（26.83%）顯著高于其他3 種鯛魚（真鯛15.36%、正交15.90%、反交15.46%）。

在肌肉中，SFA含量為子代（正交69.95%、反交66.54%）顯著高于親本（黑鯛58.76%、真鯛54.57%），而UFA含量卻是子代（正交30.05%、反交33.46%）顯著低于親本（黑鯛41.25%、真鯛45.43%），MUFA含量為親本黑鯛（29.06%）顯著高于其他3 種鯛魚（真鯛14.74%、正交22.5%、反交19.03%），而PUFA含量則是親本真鯛（30.69%）顯著高于其他3 種鯛魚（黑鯛12.19%、正交7.55%、反交14.44%）。魚骨中親本和子代的脂肪酸含量基本變化不大。

3　討論與結(jié)論

本研究中發(fā)現(xiàn)子代良好地繼承了親本的脂肪含量及脂肪酸成分相關(guān)的優(yōu)良性狀，并且子代粗脂肪含量略高于親本，劉世祿等［16］在研究美國(guó)紅魚的脂質(zhì)時(shí)發(fā)現(xiàn)，魚類肌肉細(xì)致、口感好，與其肌肉中脂肪含量的高低有著密切關(guān)系。真鯛和黑鯛肉質(zhì)細(xì)膩、口感爽滑，表明此種魚肌肉中富含粗脂肪，雖然正交子代肌肉中粗脂肪含量略低，但反交子代很好地繼承了親本的這一優(yōu)良性狀。

此外，雜交子代的SFA中檢測(cè)到了親本中未檢出的成分，肝臟中親本的SFA含量高于子代、肌肉中子代的SFA含量高于親本、魚骨中SFA和UFA的含量與親本無(wú)顯著差異。UFA在雜交子代的肝臟中的含量要高于親本、肌肉中親本的UFA含量高于子代、魚骨中脂肪含量與親本相比均無(wú)顯著性差異。MUFA因人體不能合成，故必須從食物中獲得，被稱為必需脂肪酸［17］，本研究發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)所用4 種鯛魚的肌肉中MUFA均具有較高含量，以親本黑鯛最高。說明雜交子一代不僅具有很高的食用價(jià)值，其下腳料依然具有很高的可利用價(jià)值［18］。因此，在對(duì)鯛魚的生產(chǎn)加工時(shí)應(yīng)注意對(duì)其下腳料的充分利用，日常膳食中也可多以整條魚烹飪，以增加營(yíng)養(yǎng)成分的攝入量。

ω-3/ω-6比值是評(píng)價(jià)魚油營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)，ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸都是人體必需脂肪酸。由于目前市場(chǎng)上絕大多數(shù)食用油中含有較多的ω-6族的亞油酸，缺少甚至極缺ω-3族的α-亞麻酸，而平時(shí)食用油攝入量又經(jīng)常會(huì)超標(biāo)，從而會(huì)導(dǎo)致ω-6族脂肪酸攝入過多而ω-3族脂肪酸過少的不均衡狀況。因此，增加膳食中的ω-3/ω-6比值對(duì)人體健康尤為重要。實(shí)驗(yàn)所用4 種鯛魚的ω-3/ω-6比值均高于日常推薦膳食比值0.1～0.2［19］。鑒于ω-3脂肪酸的對(duì)人體的諸多益處［20］，食用本實(shí)驗(yàn)的4 種鯛魚對(duì)中老年人心血管疾病的預(yù)防及恢復(fù)具有良好的作用。李楠楠等［21］對(duì)魚類烹調(diào)方法研究表明，水煮和微波加工可減少ω-3脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)成分的丟失，較好保存魚肉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。因此，建議日常對(duì)鯛魚的食用應(yīng)多以清蒸和水煮較佳。

EPA和DHA是一類多烯不飽和脂肪酸，通常魚類脂肪內(nèi)含量較高。本研究中發(fā)現(xiàn)，子代中EPA和DHA的相對(duì)百分比均高于親本。黑鯛與真鯛正、反交所得子一代均具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。臨床研究［22］發(fā)現(xiàn)，EPA和DHA已被認(rèn)為人和動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的必需脂肪酸。其中，EPA作為機(jī)體內(nèi)多種激素的前體物質(zhì)，DHA被稱為“腦黃金”，是腦細(xì)胞和視網(wǎng)膜細(xì)胞的磷脂成分，在人體及動(dòng)物的生長(zhǎng)中均起重要作用［23-24］。此外，相關(guān)調(diào)查研究［25］表明，長(zhǎng)期食用具有EPA和DHA的魚類對(duì)于抑郁和老年癡呆有很好的恢復(fù)和預(yù)防作用。張紋等［26］對(duì)黑鯛和真鯛等5 種魚的肌肉營(yíng)養(yǎng)成分做了相關(guān)研究，表明黑鯛和真鯛肌肉確為營(yíng)養(yǎng)全面的優(yōu)質(zhì)蛋白源，是人類理想的保健品。因此，食用本實(shí)驗(yàn)4 種鯛魚有利于人體EPA和DHA攝入量的增加，長(zhǎng)期食用對(duì)于人體健康尤其是老年人的身體健康具有諸多益處。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)所用4 種鯛魚的脂肪酸種類豐富、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，可作為日常膳食中補(bǔ)充相關(guān)營(yíng)養(yǎng)成分的首選食物。黑鯛魚的人工養(yǎng)殖作為目前海產(chǎn)魚的重要支柱，與真鯛雜交產(chǎn)生的雜交后代生長(zhǎng)迅速，抗病抗逆性強(qiáng)，但雜交子代目前尚未規(guī)?；B(yǎng)殖，營(yíng)養(yǎng)成分的鑒定也是市場(chǎng)對(duì)于接納雜交子代這一新品種的肯定，這為鯛魚的良種選育及推廣提供了很好的理論價(jià)值及動(dòng)力。

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Lipid Content and Fatty Acid Profile of Acanthopagrus schlegeli, Pagrosomus major and Their Hybrids

WANG Siting1, LI Peng1, CHEN Shuyin2,*, ZHANG Zhiyong2, YIN Shaowu1, ZHU Fei2, JIA Chaofeng2, LIU Hailin2
（1. Jiangsu Key Laboratory for Biodiversity and Biotechnology, College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing 210023, China； 2. Institute of Oceanology and Marine Fisheries, Nantong 226007, China）

The lipid contents of the liver, muscles and bones of Pagrosomus major, Acanthopagrus schlegeli and their hybrids were analyzed by Soxhlet extraction method, and the fatty acid composition was tested by gas chromatography. The results showed that the hybrids fully inherited the advantages of the red sea bream parents and their lipid content was signifi cantly higher than that of the parent black porgy, and the most signifi cant difference in lipid content was observed for liver among the three fi sh tissues. The saturated fatty acid （SFA） composition of the hybrids and the parents were almost the same. The fatty acids C12：0, C22：0, and C24：0were not found in the parents but they were detected in the hybrids. It was indicated that SFAs were more abundant in the hybrids. The unsaturated fatty acid （UFA） composition of the hybrids was almost the same as that of the parent black porgy, especially in the liver.

Pagrosomus major； Acanthopagrus schlegeli； crossbreeding； lipid； fatty acid

10.7506/spkx1002-6630-201620014

S963

A

1002-6630（2016）20-0081-05

王思婷, 李鵬, 陳淑吟, 等. 黑鯛與真鯛及其雜交子一代脂肪含量測(cè)定與脂肪酸成分分析［J］. 食品科學(xué), 2016, 37（20）：81-85. DOI：10.7506/spkx1002-6630-201620014. http：//www.spkx.net.cn

WANG Siting, LI Peng, CHEN Shuyin, et al. Lipid content and fatty acid profile of Acanthopagrus schlegeli, Pagrosomus major and their hybrids［J］. Food Science, 2016, 37（20）： 81-85. （in Chinese with English abstract） DOI：10.7506/spkx1002-6630-201620014. http：//www.spkx.net.cn

2016-04-24

江蘇省水產(chǎn)三新工程重大項(xiàng)目（D2015-17）；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目（PAPD）；南通市應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目（MS12015071）

王思婷（1992—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)轸~類種質(zhì)資源與遺傳育種。E-mail：1727268013@qq.com

陳淑吟（1966—），女，研究員，博士，研究方向?yàn)轸~類種質(zhì)資源與遺傳育種。E-mail：shuyinchen89@163.com