喬新然，陳淑珍

TRAIL誘導(dǎo)細胞死亡及其耐藥機制研究進展

喬新然，陳淑珍

腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體（tumor necrosis factor-related apotosis-inducing ligand，TRAIL/Apo-2L）是繼腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）、Fas 配體（Fas ligand，F(xiàn)ASL）之后發(fā)現(xiàn)的又一 TNF 超家族成員，廣泛分布于機體中，在自身免疫疾病及抗腫瘤中扮演重要角色。TRAIL 因其能夠選擇性地靶向腫瘤細胞而對正常細胞不產(chǎn)生毒性，成為近年來抗腫瘤研究的熱點。但隨著臨床研究的深入，TRAIL 的單藥治療在多種腫瘤細胞中出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，這阻礙了 TRAIL 在抗腫瘤治療中的應(yīng)用。因此，本文就TRAIL 誘導(dǎo)細胞死亡機制、細胞耐藥機制及聯(lián)合用藥策略進行綜述。

1 TRAIL 及其受體

1.1 TRAIL/Apo-2L

TRAIL/Apo-2L 是一個 33 ～ 35 kD 的 II 型跨膜蛋白，由 281 個氨基酸殘基組成，胞外羧基端所具有的高度保守TNF 同源結(jié)構(gòu)域（TNF homology domain，THD）與三聚體的形成有關(guān)。在生理條件下，TRAIL/Apo-2L 分子以完整的膜結(jié)合形式存在于免疫效應(yīng)細胞（如 T 細胞）的細胞膜上或者以截斷的可溶性形式（殘基 114 ～ 281）被尿激酶纖溶酶激活物（uridylyl phosphate adenosine，uPA）釋放。這兩種形式均具有生物活性，都能與死亡受體形成三聚體，并由鋅離子穩(wěn)定，產(chǎn)生凋亡誘導(dǎo)作用。

1.2 TRAIL 受體

TRAIL 受體屬于 TNF 受體超家族，分為三種：

⑴死亡受體（death receptor）：包括 TRAIL-R1/DR4 和TRAIL-R2/DR5，分別是由 468 個和 411 個氨基酸殘基組成的 I 型跨膜蛋白，有 58% 的一致性，在機體內(nèi)分布廣泛。兩者的胞外區(qū)均有 2 個富含半胱氨酸的假重復(fù)序列，胞內(nèi)區(qū)有與 TNFR、Fas 同源的死亡結(jié)構(gòu)域（death domain，DD）。

⑵誘騙受體（decoy receptor）：包括 TRAIL-R3/DcR1 和TRAIL-R4/DcR2。DcR1 是由 299 個氨基酸殘基組成的I 型跨膜蛋白，其胞外區(qū)與 DR4、DR5 類似，存在 2 個富含半胱氨酸的序列，沒有跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，僅通過一個糖酯磷脂酰肌醇（glycosyl phosphatidyl inositol，GPI）連接在細胞表面。因此，它與 TRAIL 結(jié)合后不能誘導(dǎo)凋亡。DcR2是由 386 個氨基酸殘基組成的 I 型跨膜蛋白，存在跨膜區(qū)和一段被剪切的 DD，也無法傳遞凋亡信號。

⑶骨保護素（osteoprotegerin，OPG）：TRAIL 的第 3 個誘騙受體，由 401 個氨基酸殘基組成的胞外區(qū)可溶性受體，與 TRAIL 有較弱的結(jié)合能力，能夠抑制 TRAIL 所誘導(dǎo)的凋亡［1-2］。

2 TRAIL 誘導(dǎo)細胞死亡的機制

2.1 TRAIL 誘導(dǎo)細胞凋亡

TRAIL 與功能性受體 DR4/DR5 結(jié)合后，活化形成三聚體，通過 DD 相互作用，募集死亡結(jié)構(gòu)域連接蛋白（Fas associated death domain，F(xiàn)ADD）到受體上，再通過 FADD中的死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域（death effector domain，DED）募集啟始 caspases（pro-caspase-8/10）到受體復(fù)合物上，形成死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合體（death-inducing signaling complex，DISC）。Pro-caspase-8/10 在 DISC 中自我剪切活化，形成活性caspase-8/10 并釋放到細胞質(zhì)中，激活下游 caspase 信號級聯(lián)［1，3］，誘導(dǎo)細胞凋亡。

由于內(nèi)源性 caspase 抑制劑 X 染色體連鎖凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）的表達極大地影響 DISC 中 caspase 的活化，因此根據(jù) caspase活化程度及時間的不同，將細胞分為 I 型和 II 型。在 I 型細胞中，caspase-8/10 充分活化，受 XIAP 的抑制較小，能直接激活效應(yīng) caspases（caspase-3/6/7），誘導(dǎo)細胞凋亡的外在途徑（extrinsic pathway）。在 II 型細胞中，XIAP 的表達只允許少量活性 caspase-8/10 的形成，需要激活線粒體介導(dǎo)的內(nèi)在凋亡途徑（intrinsic pathway）：少量活性 caspase-8/10分裂 BH3-only 蛋白（BCL-2 inhibitory BH3-domain containing protein，BID）形成 tBID（truncated BID），tBID 運輸?shù)骄€粒體，激活 BAX（Bcl-2 associated X protein）和 BAK（Bcl-2 antagonist killer 1），進而誘導(dǎo)線粒體釋放前凋亡因子（如細胞色素 c、SMAC/DIABLO、HTRA2/Omi）到細胞質(zhì)中，細胞色素 c、凋亡蛋白活性因子-1（apoptosis activating factor-1，APAF-1）和 pro-caspase-9 在細胞質(zhì)中組成凋亡小體，能夠激活另一個啟始 caspase——caspase-9，從而進一步激活效應(yīng) caspase-3/7，引起細胞凋亡［1，4］。SMAC/DIABLO的釋放能夠抑制 XIAP 的活性，進一步促進凋亡（圖 1）。

圖1 TRAIL 誘導(dǎo)細胞死亡的機制

2.2 TRAIL 與自噬

2.2.1 自噬的雙面性 細胞自噬是細胞一種自我降解的過程，在腫瘤細胞中，既是細胞防御機制，又是程序性細胞死亡機制。近年來發(fā)現(xiàn)，自噬在 TRAIL 引起的腫瘤耐藥中有著重要的作用。

2.2.1.1 抑制自噬——增強 TRAIL 抗腫瘤活性 研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌細胞長期暴露在 TRAIL 中，自噬增加，產(chǎn)生耐藥性，當(dāng) TRAIL 與自噬抑制劑氯喹聯(lián)合作用于 TRAIL 耐藥的乳腺癌細胞時，能扭轉(zhuǎn)這種耐藥性，使細胞對 TRAIL敏感，從而增強了抗腫瘤效果［5-6］。煙酸作用于人結(jié)腸癌細胞 HCT-116 時，能夠激活自噬流，使細胞逃離 TRAIL 引起的線粒體膜電位功能紊亂及細胞死亡。這表明，抑制自噬能增強 TRAIL 的抗腫瘤活性［7］。

2.2.1.2 激活自噬——增強 TRAIL 抗腫瘤活性 激活自噬也能增強 TRAIL 的抗腫瘤活性［8］。例如查耳酮衍生物chalcone-24（Chal-24）通過激活肺癌細胞中的自噬來引起c-FLIPL 和 c-IAPs 的降解，進而增強 TRAIL 的抗腫瘤活性［9］。在甲狀腺癌中，增加自噬能使 TRAIL 敏感的 TPC-1細胞對 TRAIL 更加敏感，產(chǎn)生更好的抗腫瘤效果，而對于TRAIL 耐藥的 FRO 細胞，抑制自噬才能使其對 TRAIL敏感［10］，若封閉 TRAIL 敏感細胞中的自噬作用能夠降低對TRAIL 的敏感度，因此，保留基本的自噬水平對 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡是必需的［11］。

2.2.2 自噬與 TRAIL 介導(dǎo)的細胞凋亡之間的機制

2.2.2.1 自噬小體和 p62 蛋白的積累 TRAIL 能夠激活TRAIL 耐藥細胞中的自噬流，導(dǎo)致 p62 降解并阻止caspase-8 激活，但在 TRAIL 敏感細胞中，TRAIL 能抑制自噬流，從而導(dǎo)致 caspase-8 活化和細胞凋亡［12］。研究發(fā)現(xiàn)，在自噬過程中的不同階段抑制自噬能導(dǎo)致 TRAIL 敏感的前列腺癌 PC3 細胞中對于 TRAIL 誘導(dǎo)的細胞死亡產(chǎn)生不同結(jié)果：在 LC3 與自噬體 l 膜聯(lián)合之前，使用 3-甲基腺嘌呤來抑制自噬，能夠阻止 p62 的聚合和 caspase-8 的激活，從而抑制細胞死亡；而使用 CQ 來抑制自噬小體降解，并沒有影響 TRAIL 誘導(dǎo)的 PC3 細胞死亡。這表明，在缺乏自噬降解的情況下，自噬小體和 p62 蛋白質(zhì)聚合物的積累對于 TRAIL 誘導(dǎo)的細胞死亡是必需的，在 TRAIL敏感細胞中自噬降解或許處于被抑制的狀態(tài)。

2.2.2.2 活性 caspase-8 的自噬溶酶體降解 活性caspase-8 的自噬溶酶體降解被認(rèn)為是自噬和 TRAIL 誘導(dǎo)細胞凋亡的中間機制［10］。例如 TRAIL 引起 DNA 損壞，使 PARP 被激活，進而發(fā)生 HMBG1 PARylation，HMBG1遷移到細胞質(zhì)中與 BECN-1 結(jié)合，啟動了自噬，減弱了caspase-8 活性，產(chǎn)生 TRAIL 耐藥，抑制 PARP1-HMGB1途徑能夠減弱自噬，從而增加 TRAIL 引起的凋亡。因此，TRAIL 耐藥細胞耐藥的原因之一是由于不同途徑啟動的自噬導(dǎo)致活性 caspase-8 的缺失［13］（圖 2）。

圖2 自噬與 TRAIL 介導(dǎo)的細胞凋亡之間的機制

2.2.2.3 Beclin 1 和生存素相互作用 Beclin 1 和生存素之間的相互作用可能是自噬和凋亡之間另一個潛在的機制。實驗表明，敲低 Beclin 1 能下調(diào)生存素，使神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞對 TRAIL 誘導(dǎo)的細胞凋亡敏感，當(dāng)引入生存素時能抵抗這種敏化效果，這表明下調(diào)生存素能增強細胞對 TRAIL 誘導(dǎo)凋亡的敏感性［14］。

2.3 TRAIL 誘導(dǎo)細胞壞死

當(dāng)用 caspase 抑制劑來抑制 caspase 活性時，TRAIL雖然無法誘導(dǎo)凋亡，但可以誘導(dǎo)受體相互作用蛋白激酶（receptor interacting protein kinase，RIPK）介導(dǎo)的細胞死亡，稱為程序性壞死［3］，這種類型的細胞死亡依賴于死亡小體的激活。當(dāng) caspase-8 缺失或被抑制時，RIPK1 和 RIPK3 通過 RIP 同型結(jié)構(gòu)域（RIP homotypic interaction motif，RHIM）相連接形成死亡小體，RIPK3 在死亡小體中自身磷酸化激活，募集并磷酸化混合譜系激酶（mixed lineage kinase-like，MLKL），使 MLKL 發(fā)生構(gòu)象變化，但是對于MLKL 誘導(dǎo)的凋亡性壞死的分子機制目前仍不完全清楚。有研究表明，MLKL 可能參與破壞和調(diào)節(jié)細胞膜孔的變形（圖 1）。

2.4 TRAIL 調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)

TRAIL 能夠在巨噬細胞、樹突細胞、T 細胞、NK 細胞中表達，在自身免疫性疾病、細菌和病毒感染、腫瘤新陳代謝的免疫監(jiān)視中起重要作用［4］。TRAIL 通過 NF-κB 途徑誘導(dǎo)趨化因子 CXCL2、CCL4、CCL20 的分泌，這些趨化因子在生理環(huán)境下募集白細胞，從而調(diào)節(jié)炎癥［15］（圖 1）。TRAIL/TRAIL-R 途徑涉及免疫系統(tǒng)的調(diào)控與穩(wěn)定。例如，在大腦中，TRAIL-DR5 信號通路能調(diào)控炎癥、神經(jīng)增殖分化以及調(diào)節(jié)低氧-組織缺血后的腦損傷。TRAIL 受體缺陷的老鼠更容易產(chǎn)生 DSS（dextran sulphate sodium）誘導(dǎo)的結(jié)腸炎和結(jié)腸炎相關(guān)的癌變，并且在結(jié)腸炎期間，對免疫細胞有顯著的滲透性，在結(jié)腸上皮細胞也能觀察到超活化的Janus 激酶和 NF-κB，兩者均與嚴(yán)重的結(jié)腸炎有關(guān)［15］。隨著對 TRAIL 和免疫系統(tǒng)之間關(guān)系的不斷研究，TRAIL 的另一個完全矛盾的角色漸漸被發(fā)掘，即 TRAIL 能損傷正常細胞。研究發(fā)現(xiàn)，慢性重癥肝炎患者的外周 NK 細胞能夠高表達 TRAIL，并對人正常的肝臟細胞產(chǎn)生毒性，同時患者的血清和肝臟中還存在豐富的炎性細胞因子（IL-6、IL-8），能夠進一步增強 TRAIL 的表達和外周 NK 細胞的活化，因此在 IL-6/IL-8 的刺激和 NK 高表達 TRAIL 所介導(dǎo)的肝細胞毒性的情況下，正常的肝臟細胞對 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡越來越敏感，導(dǎo)致肝損傷［16-17］。

3 TRAIL 的耐藥機制

3.1 TRAIL 功能性受體的缺失

TRAIL 耐藥和 TRAIL 受體的缺失有密切關(guān)系，在多種類型的腫瘤細胞中均發(fā)現(xiàn) DR4 和 DR5 功能性缺失。自噬體對 DRs 的吞噬作用導(dǎo)致 TRAIL 耐藥。例如，在TRAIL 耐藥的乳腺癌細胞 AU565 和 BT474 中，存在較高的自噬小體，DR4 和 DR5 共同連接在自噬體表面LC-3B上，導(dǎo)致膜表面 DR4/DR5 較少，從而產(chǎn)生耐藥性。當(dāng)使用 3-MA 破壞本底自噬體形成后，DR4/DR5 釋放到膜表面，增強了 TRAIL 耐藥細胞對 TRAIL 的敏感性。相反的，在 TRAIL 敏感的乳腺癌細胞 MDA-MB-231 中，膜表面 DR4/DR5 較高，并缺少本底自噬體，當(dāng)使用巴弗洛霉素 A1 抑制溶酶體活性后，細胞中自噬體積累，使膜表面 DR4/DR5 含量降低，從而降低了細胞對 TRAIL 的敏感性［18］。通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和翻譯后修飾調(diào)節(jié)能夠調(diào)節(jié) DRs 的表達與分布。轉(zhuǎn)錄因子 p53、CHOP、NF-κB、AP-1、FOXO3、Sp-1 等均能上調(diào) DRs，而轉(zhuǎn)錄因子 GLI-3 和 YYI 分別下調(diào) DR4、DR5。而某些癌細胞中，DRs 能在翻譯后修飾過程中被自噬體、細胞核膜捕獲，或者被保留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)/高爾基體中，導(dǎo)致細胞表面受體缺失，從而產(chǎn)生耐藥。

此外，Ras GTPase 途徑也能夠調(diào)節(jié) DRs 的表達。Ras家族包括 H-Ras、K-Ras、N-Ras，存在于 EGFR 的下游。在 TRAIL 耐藥細胞中，只有 H-Ras 過表達，功能特異性地敲低 H-Ras 能夠增加表面 DR4/5 的表達，增加 TRAIL耐藥細胞對 TRAIL 的敏感性［11］。

3.2 對 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡途徑的負(fù)性調(diào)節(jié)因子

3.2.1 拮抗受體——DcR1/DcR2/OPG 細胞內(nèi) DcR1、DcR2、OPG 受體表達較高時，能抑制 TRAIL 所誘導(dǎo)的凋亡途徑，產(chǎn)生耐藥。這三個拮抗受體因缺乏功能域 DD 展現(xiàn)出不同的抑制特性。OPG 是最弱的抑制劑，它與 TRAIL有較低的親和力，在某種程度上表現(xiàn)出與 DR4/DR5 競爭性結(jié)合 TRAIL 來抑制凋亡。DcR1/DcR2 與 TRAIL 有較高的親和力，DcR1 的 C 端有一個 GPI 結(jié)構(gòu)，位于脂質(zhì)筏，當(dāng) TRAIL 刺激時不能與 DR4/DR5 形成異源多聚體，因此，DcR1 也是通過競爭性結(jié)合 TRAIL 來抑制 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡；而 DcR2 能夠在非脂質(zhì)筏區(qū)域共同募集DR4/DR5，形成異源多聚體復(fù)合物，但 DcR2 缺乏 DD 功能域，因此它的募集通過空間阻礙來妨礙 caspase-8 的激活［3］。

3.2.2 sigma 1 受體 sigma 1 受體（Sig1R）是位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的小分子跨膜蛋白，作為調(diào)節(jié)配體的分子伴侶，與TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡有關(guān)。在前列腺癌細胞中，較高水平的Sig1R 能夠使細胞對 TRAIL 產(chǎn)生更強的耐藥性，因此，Sig1R 是 TRAIL 誘導(dǎo)凋亡的一個重要的調(diào)停蛋白［19］。

3.2.3 c-FLIP 同系物 在 TRAIL 耐藥細胞中，細胞型Fas 相關(guān)死亡域樣白介素 1β 轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白（celluar Fas-associated death domain-like IL-1β converting inhibitory protein，c-FLIP）過表達。c-FLIP 是 caspase-8/10 主要負(fù)性同系物，和 caspase-8/10 一樣擁有兩個 DED，能夠被TRAIL DISC 募集，并且 c-FLIP 的長鏈形式包含一個caspase-like 的結(jié)構(gòu)域，缺少 caspase 催化活性，能抑制caspase-8 鏈的形成、自我加工和激活，因此 c-FLIP 同系物主要抑制 TNF 家族誘導(dǎo)的凋亡。

3.2.4 Bcl-2 抗凋亡蛋白和凋亡抑制蛋白 在 II 型細胞中，Bax 的缺失或者 B 細胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）抗凋亡蛋白家族成員，如 Bcl-2、Mcl-1、Bc-xL 的過表達，均能抑制線粒體凋亡途徑，產(chǎn)生耐藥。而無論是I 型還是 II 型細胞，過表達的凋亡抑制蛋白（inhibitor ofapoptosis protein，IAP），如 XIAP、survive、cIAP，均能抑制 TRAIL 所誘導(dǎo)的凋亡。

3.3 生存信號途徑對 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡的調(diào)節(jié)

TRAIL 啟動的非凋亡途徑包括 MAPK、NF-κB 和PI3K-PKB/Akt 等途徑，均能增加不同種類正常/癌細胞增殖、生存、遷移、侵入或者炎癥的能力，從而產(chǎn)生 TRAIL 耐藥性。

TRAIL 激活的 MAPK 信號通路涉及一種可溶性的第二復(fù)合物的形成［3］。MAPK 主要包括三種不同的成員：胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinases，ERKs）、c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-terminal protein kinases，JNKs）和 p38 裂原激活蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAP kinases）。ERKs 是第一個被發(fā)現(xiàn)與阻礙 TRAIL 誘導(dǎo)凋亡有關(guān)的 MAPK 成員，能抑制 ERK 途徑，下調(diào) Mcl-2 蛋白，使結(jié)腸癌細胞對 TRAIL 敏感。p38 MAP kinases 則被認(rèn)為是調(diào)節(jié)酶的細胞因子。JNKs 涉及細胞增殖和凋亡，TRAIL 通過受體相互作用蛋白激酶 1（receptor-interacting protein kinase 1，RIPK1）和 TNF 受體相關(guān)因子 2（TNF receptor-associated factor 2，TRAF2）誘導(dǎo) JNKs 途徑。ERKs、JNKs 和 p38 的激活均依賴于細胞類型，并通過轉(zhuǎn)錄依賴或非依賴的方式調(diào)節(jié) TRAIL 受體、c-FLIP、Bcl-2 家族蛋白的表達來影響TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡。NF-κB 是核轉(zhuǎn)錄因子，在 TRAIL 耐藥細胞已展現(xiàn)出 NF-κB 依賴性的炎癥表型，增強 NF-κB信號能夠抵抗 TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡，提高腫瘤轉(zhuǎn)移和侵入能力［4］。在 TRAIL 敏感細胞中，caspase-8 分裂受體相互作用蛋白 1（receptor interacting protein 1，RIP1）能封閉NF-κB 活性，進而啟動 TRAIL 引起的凋亡，但如果將細胞持續(xù)暴露在低濃度的 TRAIL 中，激活的 NF-κB 不斷被積累，從而增加 miR21/30C/100 產(chǎn)生，進一步下調(diào)caspase-8/TRAF-7/caspase-3/FoxO3a，導(dǎo)致 NF-κB 信號的增強，從而建立了一個正反饋環(huán)路，產(chǎn)生 TRAIL 耐藥和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化［20-21］。TRAIL 誘導(dǎo)激活 JNKs 和 NF-κB 途徑分為兩個階段：早期階段和延遲階段。早期階段是通過TRAF2/cIAP1 介導(dǎo)的 RIP1 泛素化進行激活，延遲階段是通過 caspase 介導(dǎo)的 MEKK1 分裂和激活來產(chǎn)生的。cFLIP的過表達能夠促進早期階段但是抑制延遲階段，當(dāng)在 RIP1或者 TRAF2 缺陷的細胞中穩(wěn)定地過表達 cFLIP，會發(fā)現(xiàn)細胞能夠抵抗凋亡，但卻無法激活 NF-κB。而 Bcl-2 的過表達對這兩個階段均產(chǎn)生促進作用。這些很好地解釋了TRAIL 激活 JNK 和 NF-κB 途徑的機制［22］。PI3K-PKB/Akt途徑的激活也涉及 TRAIL 耐藥。通過 PI3K 導(dǎo)致 Akt 的磷酸化和激活，而激活的 Akt 能磷酸化一系列底物，導(dǎo)致生存基因如 c-FLIP、Bcl-2、Mcl-1 或 XIAP 在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)或者磷酸化依賴性穩(wěn)定，最終導(dǎo)致 TRAIL 耐藥。在結(jié)腸癌細胞中抑制 PI3K/Akt 途徑能使細胞對 TRAIL 敏感（圖 3）。

4 TRAIL 聯(lián)合用藥策略

由于腫瘤細胞類型不同而存在多重 TRAIL 耐藥機制。因此，TRAIL 聯(lián)合用藥的策略也具有多樣性和針對性，而與 TRAIL 進行聯(lián)合的藥物或化合物的選擇也是根據(jù)某種細胞的具體耐藥機制進行針對性選擇，大致可以分為以下幾類：

⑴增加功能性受體 DR4/DR5 表達的藥物或死亡受體激動劑抗體：如曲格列酮（troglitazone，TGZ）［23］。

⑵c-FLIP 抑制劑或者激活 DISC 水平的 caspase-8 的藥物。

⑶Bcl-2、Mcl-1、Bc-xL 抑制劑或者 IAP 拮抗劑、survive 抑制劑。

圖3 TRAIL 的耐藥機制

⑷組蛋白脫乙酰酶抑制劑（HDACi）：如丙戊酸。

⑸與自噬相關(guān)的藥物：如氯喹、姜辣素、橡黃素［8］。

⑹與抑制 NF-κB 和 MAPK 信號途徑有關(guān)的藥物：如化合物 YM155、海兔素（aplysin）。

⑺常規(guī)的化療藥物：如喜樹堿、阿霉素、5-氟尿嘧啶、伊立替康、紫杉醇［23］。

⑻熱休克蛋白 90 抑制劑：如 NVP-AUY922。

⑼其他：高熱可以增強各癌癥細胞系對 TRAIL 誘導(dǎo)的細胞死亡的敏感性，現(xiàn)已提出溫和熱休克治療能通過引起c-FLIP 退化或激活線粒體凋亡途徑來恢復(fù) Fas 配體或TRAIL-induced 的凋亡［24］。

通常藥物是通過多個途徑同時抵抗耐藥性，從而與TRAIL 產(chǎn)生聯(lián)合抗腫瘤效果。例如，姜烯酚能夠通過增加DR5 和促凋亡蛋白 Bax 表達，降低抗凋亡蛋白 survive 的表達來克服結(jié)腸癌細胞對 TRAIL 的耐藥［25］。

5 前景

目前，對于 TRAIL 誘導(dǎo)細胞死亡及其耐藥機制的研究已經(jīng)取得了很大的進展，同時其聯(lián)合用藥的策略更是隨著這些機制的完善而有了更多的發(fā)現(xiàn)，這些都將推動 TRAIL 通過臨床研究。然而，由于腫瘤細胞的不同，TRAIL 耐藥機制具有多樣性，目前仍然無法尋找到一種或幾種聯(lián)合藥物能廣泛使用于腫瘤治療中，并且 TRAIL 所介導(dǎo)的凋亡與自噬之間的復(fù)雜關(guān)系也需要更深入的研究去發(fā)現(xiàn)中間的關(guān)聯(lián)機制。在未來，這些問題的解決將會加快 TRAIL 藥物上市的步伐。

［1］ Amarante-Mendes GP， Griffith TS. Therapeutic applications of TRAIL receptor agonists in cancer and beyond. Pharmacol Ther， 2015，155：117-131.

［2］ Kao SY， Soares VY， Kristiansen AG， et al. Activation of TRAIL-DR5 pathway promotes sensorineural degeneration in the inner ear. Aging Cell， 2016， 15（2）：301-308.

［3］ Elmallah M， Micheau O. Marine drugs regulating apoptosis induced by tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand （TRAIL）. Mar Drugs， 2015， 13（12）：6884-6909.

［4］ Hofmanová J， Straková N， Vaculová AH， et al. Interaction of dietary fatty acids with tumour necrosis factor family cytokines during colon inflammation and cancer. Mediators Inflamm， 2014， 2014：1-17.

［5］ Lv S， Wang X， Zhang N， et al. Autophagy facilitates the development of resistance to the tumor necrosis factor superfamily member TRAIL in breast cancer. Int J Oncol， 2015， 46（3）：1286-1294.

［6］ Nazim UM， Jeong JK， Seol JW， et al. Inhibition of the autophagy flux by gingerol enhances TRAIL-induced tumor cell death. Oncol Rep，2015， 33（5）：2331-2336.

［7］ Kim SW， Lee JH， Moon JH， et al. Niacin alleviates TRAIL-mediated colon cancer cell death via autophagy flux activation. Oncotarget，2016， 7（4）：4356-4368.

［8］ Moon JH， Eo SK， Lee JH， et al. Quercetin-induced autophagy flux enhances TRAIL-mediated tumor cell death. Oncol Rep， 2015， 34（1）：375-381.

［9］ Xu J， Xu X， Shi S， et al. Autophagy-mediated degradation of IAPs and c-FLIP（L） potentiates apoptosis induced by combination of TRAIL and Chal-24. J Cell Biochem， 2016， 117（5）：1136-1144.

［10］ Jin SM， Jang HW， Sohn SY， et al. Role of autophagy in the resistance to tumour necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand-induced apoptosis in papillary and anaplastic thyroid cancer cells. Endocrine，2014， 45（2）：256-262.

［11］ Twomey JD， Kim SR， Zhao L， et al. Spatial dynamics of TRAIL death receptors in cancer cells. Drug Resist Updat， 2015， 19：13-21.

［12］ Singh K， Sharma A， Mir MC， et al. Autophagic flux determines cell death and survival in response to Apo2L/TRAIL （dulanermin）. Mol Cancer， 2014， 13：70.

［13］ Yang M， Liu L， Xie M， et al. Poly-ADP-ribosylation of HMGB1 regulates TNFSF10/TRAIL resistance through autophagy. Autophagy，2015， 11（2）：214-224.

［14］ Niu TK， Cheng Y， Ren X， et al. Interaction of Beclin 1 with survivin regulates sensitivity of human glioma cells to TRAIL-induced apoptosis. FEBS Lett， 2010， 584（16）：3519-3524.

［15］ Zhu J， Chen L， Shi J， et al. TRAIL receptor deficiency sensitizes mice to dextran sodium sulphate-induced colitis and colitis-associated carcinogenesis. Immunology， 2014， 141（2）：211-221.

［16］ Wan Z， Xie G， Wu Y， et al. Cytokines elevated in patients with HBV-related acute-on-chronic liver failure promote NK cell mediated cytotoxicity through TRAIL. Dig Liver Dis， 2016， 48（5）：528-535.

［17］ Netea-Maier RT， Plantinga TS， van de Veerdonk FL， et al. Modulation of inflammation by autophagy： Consequences for human disease. Autophagy， 2016， 12（2）：245-260.

［18］ Di X， Zhang G， Zhang Y， et al. Accumulation of autophagosomes in breast cancer cells induces TRAIL resistance through downregulation of surface expression of death receptors 4 and 5. Oncotarget， 2013，4（9）：1349-1364.

［19］ Das D， Persaud L， Dejoie J， et al. Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand （TRAIL） activates caspases in human prostate cancer cells through sigma 1 receptor. Biochem Biophys Res Commun， 2016， 470（2）：319-323.

［20］ Jeon YJ， Middleton J， Kim T， et al. A set of NF-κB-regulated microRNAs induces acquired TRAIL resistance in Lung cancer. Proc Natl Acad Sci U S A， 2015， 112（26）：E3355-E3364.

［21］ Zhang L， Dittmer MR， Blackwell K， et al. TRAIL activates JNK and NF-κB through RIP1-dependent and -independent pathways. Cell Signal， 2015， 27（2）：306-314.

［22］ Mitchell MJ， Wayne E， Rana K， et al. TRAIL-coated leukocytes that kill cancer cells in the circulation. Proc Natl Acad Sci U S A， 2014，111（3）：930-935.

［23］ Koyama M， Sowa Y， Horinaka M， et al. Peroxisome proliferator-activated receptor γ ligand troglitazone and TRAIL synergistically induce apoptosis. Oncol Rep， 2014， 31（2）：947-954.

［24］ Morlé A， Garrido C， Micheau O. Hyperthermia restores apoptosis induced by death receptors through aggregation-induced c-FLIP cytosolic depletion. Cell Death Dis， 2015， 6：e1633.

［25］ Hwang JS， Lee HC， Oh SC， et al. Shogaol overcomes TRAIL resistance in colon cancer cells via inhibiting of survivin. Tumor Biol，2015， 36（11）：8819-8829.

10.3969/j.issn.1673-713X.2016.05.011

國家自然科學(xué)基金（81373437、81321004）

100050 北京，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所腫瘤室

陳淑珍，Email：bjcsz@imb.pumc.edu.cn

2016-07-12