姚淑紅?。ㄉ綎|省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局　271000）

試驗(yàn)研究

雞源產(chǎn)ESBL大腸桿菌耐藥特點(diǎn)分析

姚淑紅（山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局271000）

為了解雞源產(chǎn)ESBL大腸桿菌耐藥特點(diǎn)，本研究2016年1～3月份采集山東省泰安市兩個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)雞糞便棉拭子，分離并鑒定雞源產(chǎn)ESBL大腸桿菌，紙片擴(kuò)散法對(duì)16種抗生素進(jìn)行藥敏檢測(cè)。本研究在69份雞糞便棉拭子中，分離到60株大腸桿菌，獲得46株產(chǎn)ESBL大腸桿菌（占77%）。所有產(chǎn)ESBL大腸桿菌菌株均呈現(xiàn)多重耐藥，但碳青霉烯類藥物敏感率較高。結(jié)果顯示，雞源產(chǎn)ESBL 大腸桿菌分離率高，呈現(xiàn)耐藥譜廣。

ESBL大腸桿菌耐藥性

大腸桿菌不僅是人和動(dòng)物的腸道正常菌群，并且也是臨床感染中最常見的病原菌之一。大腸桿菌病對(duì)雞的危害表現(xiàn)在造具體主要表現(xiàn)為氣曩病、敗血病、腹膜炎等［1］。在獸醫(yī)臨床上，大腸桿菌造成的危害十分嚴(yán)重，他一年四季均可致病，雞的發(fā)病率為10%～69%，給養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

隨著抗生素的大量使用，產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的耐藥菌株越來越流行，成為一個(gè)嚴(yán)重影響人類和動(dòng)物健康的安全問題。由于抗生素的持續(xù)且不恰當(dāng)?shù)氖褂?，?dǎo)致大腸桿菌耐藥株不斷增多，耐藥機(jī)制不斷變遷，特別是大腸桿菌多重耐藥株的大量出現(xiàn)，使人醫(yī)與獸醫(yī)臨床大腸桿菌病的治療變得十分困難［2］。因此，明確雞源大腸桿菌株的耐藥譜，對(duì)臨床上合理利用抗菌藥物、增強(qiáng)抗感染治療效果意義重大。

1　材料與方法

1.1樣品采集在2016年1～3月份，以泰安地區(qū)新泰、肥城兩雞場(chǎng)采樣地點(diǎn)，每只雞采集一個(gè)肛門棉拭子。新泰雞場(chǎng)23日齡為19株，30日齡為33株；肥城雞場(chǎng)為15株。

1.2大腸桿菌的分離鑒定（1）糞便的溶解稀釋：在糞便棉拭子的離心管中加入500μl的生理鹽水，搖勻備用；（2）三線法涂于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB）上，選擇綠色金屬光澤的單個(gè)菌落，初步篩選大腸桿菌；（3）麥康凱瓊脂培養(yǎng)基再次分離純化；（4）生化鑒定。

1.3產(chǎn)ESBL大腸桿菌確證［3］將鑒定的大腸桿菌菌液均勻涂布于MH瓊脂平板，貼頭孢他啶（CAZ）與頭孢他啶/棒酸（CAZ/Clav），頭孢噻肟（CTX）與頭孢噻肟/棒酸（CTX/Clav）兩組紙片，37℃培養(yǎng)12～18h，如兩組中任一組加棒酸比不加棒酸抑菌圈直徑≥5mm，可確認(rèn)為產(chǎn)ESBL菌株。將確證產(chǎn)ESBL大腸桿菌甘油保存-70℃?zhèn)溆?。大腸桿菌ATCC25922為對(duì)照。

1.4藥敏檢測(cè)［3］14藥敏紙片：復(fù)方新諾明（SXT）、氨芐西林（AMP）、氯霉素（C）、鏈霉素（S）、卡那霉素（K）、慶大霉素（CN）、環(huán)丙沙星（CIP）、氟苯尼考（FFC）、阿莫西林（AML）、頭孢噻吩（KF）、諾氟沙星（NOR）、氨曲南（AZT）、四環(huán)素（TE）、萘啶酸（NA）、亞胺培南（IMP）、美羅培南（MEC）。將菌液涂于MH培養(yǎng)基上，14個(gè)藥敏紙片貼于培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)12～18h。

2　結(jié)果

2.1產(chǎn)ESBL大腸桿菌的分離結(jié)果分離大腸桿菌為60株，分離率為87%；分離率出產(chǎn)ESBL大腸桿菌為46株，分離率為77%（見附表）。

附表　產(chǎn)ESBL大腸桿菌的分離結(jié)果

2.2產(chǎn)ESBL大腸桿菌的藥敏表型46株產(chǎn)ESBL大腸桿菌均呈現(xiàn)多重耐藥。對(duì)SXT、AMP、C、S、K、CN、CIP、FFC、AML、KF、NOR、AZT、TE、NA的耐藥性非常強(qiáng)，但對(duì)碳青霉烯類的IMP、MEC敏感度達(dá)100%（見附圖）。

附圖　產(chǎn)ESBL大腸桿菌的藥敏結(jié)果

3　討論

（1）本研究中雞源產(chǎn)ESBL 大腸桿菌分離率高且呈現(xiàn)耐藥譜廣。一旦大腸桿菌作為條件性致病菌引起雞群感染和發(fā)病時(shí)，很可能會(huì)由于耐藥問題給治療帶來困難，最終給生產(chǎn)帶來的經(jīng)濟(jì)損失。（2）本研究中在兩個(gè)泰安兩個(gè)雞場(chǎng)中分離到60株大腸桿菌，其中產(chǎn)ESBL大腸桿菌為46株，分離率為77%，分離。雞源產(chǎn)ESBL大腸桿菌菌株的藥敏表型結(jié)果表明，呈多重耐藥的特點(diǎn)，耐藥譜廣，耐藥情況非常嚴(yán)重，多重耐藥現(xiàn)象不斷惡化。但幸運(yùn)地一點(diǎn)是對(duì)碳青霉烯類的亞胺培南和美羅培南敏感度達(dá)100%。（3）由于抗生素的大量、持續(xù)且不恰當(dāng)?shù)氖褂?，?dǎo)致大腸桿菌耐藥株不斷增多，特別是多重耐藥株的大量出現(xiàn)，使人醫(yī)與獸醫(yī)臨床大腸桿菌病的治療變得十分困難［4］。

［1］ 揮時(shí)鋒， 潘震寰， 鄭明球. 雞大腸桿菌病研究進(jìn)展［J］. 畜牧與獸醫(yī). 1998， 30（6）∶ 227-230.

［2］ Tekiner H， Ozpinar H. Occurrence and characteristics of extended spectrum beta-lactamases-producing Enterobacteriaceae from foods of animal origin ［J］. Braz J Microbiol. 2016， 47（2）∶ 444-51.

［3］ Clinical and Laboratory Standards Institute Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. 21st informational supplement，document M100-S21s. Wayne， PA， USA. 2011.

［4］ Pohjola L， Nyk?senoja S， Kivist? R， et al. Zoonotic Public Health Hazards in Backyard Chickens［J］. Zoonoses Public Health. 2016， 11.

S852.61+2

A

1007-1733（2016）10-0001-02

2016-06-06）