方小明，田文禮，張曉琳，彭文君，肖紅偉，高凌宇，王燦紅，高振江，*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)工學(xué)院，北京 100083；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，北京 100093；3.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193）

荷花粉多糖顯著減輕氟尿嘧啶所致小鼠腸道黏膜屏障損傷

方小明1，2，田文禮2，張曉琳1，彭文君2，肖紅偉1，高凌宇2，王燦紅3，高振江1，*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)工學(xué)院，北京 100083；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，北京 100093；3.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193）

目的：探討不同干燥方法提取的荷花粉多糖（lotus bee pollen polysaccharides，LP）對(duì)5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-Fu）所致小鼠腸道黏膜損傷及功能失調(diào)的改善作用。方法：分別采用熱風(fēng)干燥與真空脈動(dòng)干燥的方法對(duì)荷花粉進(jìn)行干燥，并提取多糖。建立5-Fu小鼠腸黏膜炎模型，隨機(jī)分組、給藥。炭末推進(jìn)法測(cè)定小鼠的腸推進(jìn)率，并測(cè)量小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度；計(jì)算全腸道派氏集合淋巴結(jié)（Peyer’s patches，PPs）的面積；取小鼠結(jié)腸組織進(jìn)行病理組織切片觀察；生物化學(xué)方法檢測(cè)PPs勻漿上清液中活性氧（reactive oxygen species，ROS）和谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量、過氧化氫酶（catalase，CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力；酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法檢測(cè)PPs勻漿上清中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的含量。結(jié)果：與正常組相比，5-Fu可顯著抑制小鼠腸道的推進(jìn)功能（P＜ 0.05）。熱風(fēng)干燥與真空脈動(dòng)干燥樣品中提取的LP能減緩5-Fu所致的結(jié)腸縮短（P＜0.05），顯著或極顯著增加小鼠腸道PPs的面積（P＜0.05或P＜0.01）；此外，與5-Fu組比較，LP與5-Fu聯(lián)合應(yīng)用能明顯促進(jìn)小鼠腸道的推進(jìn)功能（P＜0.05），升高GSH含量、CAT和GSH-Px活力（P＜0.01或P＜0.05），明顯減少TNF-α含量（P＜0.05或P＜0.01）；結(jié)腸病理組織切片顯示LP能明顯減輕5-Fu所致的小鼠結(jié)腸黏膜上皮杯狀細(xì)胞丟失、隱窩深度變淺及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論：LP能夠減輕5-Fu所致小鼠結(jié)腸黏膜炎，改善5-Fu所致的腸道傳輸功能失調(diào)，保護(hù)5-Fu對(duì)腸道的氧化損傷，其中真空脈動(dòng)干燥樣品中提取的花粉多糖效果更好。

荷花粉多糖；5-氟尿嘧啶；腸黏膜屏障；氧化損傷；干燥方式

方小明， 田文禮， 張曉琳， 等. 荷花粉多糖顯著減輕氟尿嘧啶所致小鼠腸道黏膜屏障損傷［J］. 食品科學(xué)， 2016， 37（15）: 209-214. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615035. http://www.spkx.net.cn

FANG Xiaoming， TIAN Wenli， ZHANG Xiaolin， et al. Lotus bee pollen polysaccharides significantly relieve intestinal mucosal barrier damage in mice caused by fluorouracil［J］. Food Science， 2016， 37（15）: 209-214. （in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615035. http://www.spkx.net.cn

多糖作為一類天然生物大分子，其來源豐富、成本低廉、無毒，且藥理作用廣泛，如杏鮑菇多糖、靈芝多糖、茯苓多糖、香菇多糖等，它們?cè)诳鼓[瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化等方面均取得了良好療效［1-5］，其中抗腫瘤和免疫增強(qiáng)作用是其研究的熱點(diǎn)，尤其與化療藥物合用的減毒增效作用受到了廣泛關(guān)注。蜂花粉多糖是蜂花粉重要的有效成分之一，蜂花粉中糖類總含量約為25%～40%，糖類種類齊全，包括單糖（如葡萄糖、果糖等）、低聚糖和多糖［6］，其中最具有功效開發(fā)前景的是花粉多糖［7-8］。大量研究表明，花粉多糖具有良好的免疫調(diào)節(jié)能力［9］、抗炎［10］及抗腫瘤活性［11］。鮮花粉含水量高達(dá)20%～30%，不宜貯存。干燥能夠使花粉含水率降低至安全貯藏水平，是蜂花粉加工的必要步驟，干燥后的花粉也是其商品化流通的基本形式［12］?；ǚ鄱嗵菍儆跓崦粜晕镔|(zhì)，因此選擇適宜的干燥方法對(duì)于保證花粉品質(zhì)至關(guān)重要。而目前不同干燥方式對(duì)花粉多糖活性的影響還未見報(bào)道。

化療是惡性腫瘤患者常用且有效的治療方法之一，但是化療藥物、特別是大劑量應(yīng)用時(shí)常對(duì)機(jī)體正常生長(zhǎng)旺盛的組織造成嚴(yán)重?fù)p傷?；煂?dǎo)致的腸黏膜屏障功能障礙在全身感染、炎性反應(yīng)綜合征和多器官功能障礙綜合征的發(fā)病中有著重要影響［13］。5-氟尿嘧啶（5-f luorouracil，5-Fu）是臨床上用于治療消化道腫瘤和乳腺癌的基本藥物［14］。然而，臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)5-Fu具有較強(qiáng)的毒副作用，如引起胃腸道黏膜炎并造成機(jī)體免疫功能及造血功能低下等［15-16］。為觀察荷花粉多糖是否能夠改善5-Fu所致小鼠腸黏膜炎及具有腸道保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)采用不同干燥方式加工荷花粉，并提取多糖，通過腹腔注射5-Fu建立小鼠腸黏膜炎模型，測(cè)定荷花粉多糖對(duì)小鼠腸道推進(jìn)作用、派氏集合淋巴結(jié)（Peyer’s patches，PPs）面積、PPs勻漿上清液中脂質(zhì)過氧化指標(biāo)、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平及結(jié)腸病理、炎癥相關(guān)指標(biāo)的影響，探討不同干燥方式下荷花粉多糖對(duì)5-Fu所致小鼠腸黏膜炎的改善及腸道功能的保護(hù)作用，以及可能作用機(jī)制，為荷花粉多糖的加工及深入開發(fā)提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物、材料與試劑

無特定病原體（specifi c pathogen free，SPF）級(jí)雌性C57BL/6J小鼠，體質(zhì)量（18±2） g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001。按嚙齒類動(dòng)物飼養(yǎng)方法和條件飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物房。

新鮮荷花粉，購(gòu)于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，初始濕基含水率為31%，置于冰柜（（-10±1）℃）中密封保存。

5-氟尿嘧啶注射液 上海旭東海普藥業(yè)有限公司；活性氧（reactive oxygen species，ROS）試劑盒、谷胱甘肽（glutathione，GSH）試劑盒、過氧化氫酶（catalase，CAT）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒 南京建成生物工程研究所；TNF-α酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒 武漢華美生物工程有限公司；乙醚、氯仿、正丁醇、冰醋酸、甲醛及其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2儀器與設(shè)備

真空脈動(dòng)干燥機(jī) 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)工學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)與裝備實(shí)驗(yàn)室自制；WD101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱吳江萬(wàn)達(dá)電熱設(shè)備有限公司；BCN-1360生物潔凈工作臺(tái)北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；5410二氧化碳培養(yǎng)箱美國(guó)Napco公司；MQX 200酶標(biāo)儀 美國(guó)Bio-Tek公司；CKX 41熒光倒置顯微鏡 日本Olympus公司；Labofuge 400R離心機(jī) 德國(guó)Heraeus公司。

1.3方法

1.3.1荷花粉干燥及多糖提取

分別采用熱風(fēng)干燥及真空脈動(dòng)干燥方法處理新鮮荷花粉：熱風(fēng)干燥溫度為60 ℃；脈動(dòng)干燥溫度60 ℃，真空保持時(shí)間12 min，常壓保持時(shí)間3 min，兩種方法均需將花粉干燥至目標(biāo)含水率5%（濕基）。干燥完成后將樣品封存于聚乙烯袋中，置于干燥皿中保存。

荷花粉多糖提?。?7］流程為：荷花粉→乙醚脫脂→超聲熱水浸提→加入果膠酶水提→離心取上清液→殘?jiān)貜?fù)浸提2 次→合并上清液→減壓濃縮→乙醇沉淀→沉淀加水復(fù)溶→Sevag法除蛋白→透析（除鹽及小分子雜質(zhì)）→濃縮→冷凍干燥→荷花粉多糖。

1.3.2動(dòng)物分組及給藥

健康雌性C57BL/6J小鼠32 只，隨機(jī)分為4 組，每組8 只：正常組、5-Fu組（25 mg/kg）、熱風(fēng)LP組（熱風(fēng)干燥L(fēng)P 200 mg/kg+5-Fu 25 mg/kg）、脈動(dòng)LP組（真空脈動(dòng)干燥L(fēng)P 200 mg/kg+5-Fu 25 mg/kg）組。正常組灌胃給予蒸餾水，20 mL/kg；LP組灌胃給藥，20 mL/kg；5-Fu組腹腔注射給藥，10 mL/kg，1 次/2 d。各組均連續(xù)給藥14 d。

1.3.3LP對(duì)小鼠腸道功能的影響

給藥最后一天，提前6 h禁食，正常飲水。末次給藥1.5 h后，給每只小鼠灌胃炭末混懸液（阿拉伯膠10%、活性炭5%）0.2 mL。灌胃后20 min頸椎脫臼處死小鼠，剖腹取小腸，測(cè)量炭末推進(jìn)前端的位置及小腸總長(zhǎng)度，按照下式計(jì)算炭末推進(jìn)率。

收集從幽門下端至回盲部的全部小腸組織，肉眼目測(cè)觀察位于其腸系膜對(duì)側(cè)的PPs，記錄PPs個(gè)數(shù)并用尺測(cè)量計(jì)算其總面積。

剪取結(jié)腸，測(cè)量結(jié)腸長(zhǎng)度，并將結(jié)腸部分組織置于10%甲醛中固定，進(jìn)行組織病理切片觀察及免疫組化檢測(cè)。

1.3.4LP對(duì)小鼠相關(guān)生化指標(biāo)的影響

剪取并稱取一定質(zhì)量的1.3.3節(jié)中所述小腸外壁上隆起的PPs或結(jié)腸組織，按1∶9（m/m）加入生理鹽水，冰浴、充分勻漿， 4 ℃、3 000 r/min離心15 min，取上清液-80 ℃保存，按照試劑盒說明書操作要求測(cè)定相應(yīng)指標(biāo)。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，比較組間差異性，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，P＜0.05或P＜0.01認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果與分析

2.1不同干燥方式提取的LP對(duì)小鼠小腸長(zhǎng)度及推進(jìn)功能的影響

表1　荷花粉多糖對(duì)5-Fu模型小鼠小腸長(zhǎng)度及炭末推進(jìn)率的影響TTaabbllee 11 EEffffeecctt ooff LLPP oonn ssmmaallll iinntteessttiinnaall lleennggtthh aanndd ccaarrbboonn--pprrooppeelllliinngg rate in model mice induced by 5-Fu

表1　荷花粉多糖對(duì)5-Fu模型小鼠小腸長(zhǎng)度及炭末推進(jìn)率的影響TTaabbllee 11 EEffffeecctt ooff LLPP oonn ssmmaallll iinntteessttiinnaall lleennggtthh aanndd ccaarrbboonn--pprrooppeelllliinngg rate in model mice induced by 5-Fu

注：*.與正常組相比，差異顯著（P＜0.05）；#. 與5-Fu組相比，差異顯著（P＜0.05）。下同。

組別小腸全長(zhǎng)/cm炭末推進(jìn)長(zhǎng)度/cm炭末推進(jìn)率/%正常組52.09± 2.0629.87±2.9757.34±4.65 5-Fu組48.58±1.8124.64±1.36*49.67±5.01*熱風(fēng)LP組50.65±1.9730.45±3.6760.12±6.21#脈動(dòng)LP組51.26±2.3531.24±3.1160.94±5.04#

如表1所示，與正常組比，各組小鼠的小腸總長(zhǎng)度無明顯變化，但5-Fu組小鼠的炭末推進(jìn)長(zhǎng)度明顯低于正常組（P＜0.05）。與正常組相比，5-Fu組小鼠的小腸炭末推進(jìn)率最低（49.67%），并具有顯著差異（P＜0.05）。而荷花粉多糖與5-Fu聯(lián)用后小鼠的小腸炭末推進(jìn)率明顯升高，與5-Fu組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2不同干燥方式提取的LP對(duì)小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度及PPs面積的影響

圖1　荷花粉多糖對(duì)5-Fu模型小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度的影響（Fig. 1 Effect of LP on the length of colon in model mice induced by 5-Fu

如圖1所示，與正常組相比，5-Fu能顯著縮短小鼠結(jié)腸的長(zhǎng)度（P＜0.05）。而與5-Fu組相比，聯(lián)用LP與5-Fu后，熱風(fēng)LP組和脈動(dòng)LP組小鼠的結(jié)腸長(zhǎng)度顯著增加（P＜0.05）。

解剖過程中肉眼觀察小鼠腸道及相關(guān)淋巴組織中的PPs，發(fā)現(xiàn)正常組小鼠的小腸腸壁較厚、較有韌性，PPs數(shù)量雖不均一但較多，突出腸壁較高且有光澤。而5-Fu組小鼠的小腸腸壁變薄，在腸壁外可明顯觀察到腸內(nèi)容物，腸壁缺乏彈性、易斷，PPs數(shù)量減少、直徑明顯減小，隆起不明顯，甚至部分小鼠的腸壁上無肉眼可見的PPs結(jié)。熱風(fēng)LP組和脈動(dòng)LP組小鼠的小腸腸壁厚度與正常組相比略薄，但仍存在一定彈性，PPs數(shù)量與正常組相比有所減少、直徑變小，但仍然突出腸壁。對(duì)PPs面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表2。5-Fu組小鼠腸PPs的面積明顯低于正常組，與正常組比較具有極顯著差異（P＜0.01），這表明化療藥物5-Fu抑制了小鼠腸道黏膜的免疫功能。而熱風(fēng)LP組與脈動(dòng)LP組小鼠的PPs面積均明顯高于5-Fu組，特別是脈動(dòng)LP組，與5-Fu組相比差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01），這表明荷花粉多糖能夠減緩5-Fu對(duì)小鼠黏膜免疫功能的抑制。

表2　荷花粉多糖對(duì)5-Fu模型小鼠小腸PPs面積的影響TTaabbllee 22 EEffffeecctt ooff LLPP oonn ssuurrffaaccee aarreeaa ooff PPPPss iinn mmooddeell mmiiccee iinndduucceedd bbyy 5--FFuu

表2　荷花粉多糖對(duì)5-Fu模型小鼠小腸PPs面積的影響TTaabbllee 22 EEffffeecctt ooff LLPP oonn ssuurrffaaccee aarreeaa ooff PPPPss iinn mmooddeell mmiiccee iinndduucceedd bbyy 5--FFuu

注：**. 與正常組相比，差異極顯著（P＜0.01）；##. 與5-Fu組相比，差異極顯著（P＜0.01）。下同。

組別PPs個(gè)數(shù)PPs面積/m m2正常組15±442.19±12.06 5-Fu組9±218.58±7.81**熱風(fēng)LP組11±327.65±5.97#脈動(dòng)LP組12±332.26±6.35##

2.3不同干燥方式提取的LP對(duì)小鼠結(jié)腸病理組織學(xué)的影響

光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠結(jié)腸組織，正常組小鼠結(jié)腸腸黏膜絨毛表面完整，固有層可見小血管、毛細(xì)血管、淋巴管；黏膜下層的疏松結(jié)締組織富有血管、淋巴管，肌層和漿膜層次清晰。與正常組相比，5-Fu組小鼠結(jié)腸腸黏膜表面不完整，上皮細(xì)胞排列不緊密， 杯狀細(xì)胞丟失嚴(yán)重，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)達(dá)黏膜肌層。相比于單一使用5-Fu，聯(lián)合使用LP的熱風(fēng)LP組和脈動(dòng)LP組小鼠的結(jié)腸黏膜組織病變、上皮杯狀細(xì)胞丟失及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象均明顯減輕，結(jié)腸黏膜表面相對(duì)完整（圖2）。

圖2　小鼠結(jié)腸病理組織切片（蘇木精-伊紅，400×）Fig. 2 Histological images of mouse colonic samples stained with hematoxylin and eosin （HE， 40 ×）

2.4不同干燥方式提取的LP對(duì)小鼠PPs中脂質(zhì)過氧化指標(biāo)的影響

化療藥物可導(dǎo)致腸道黏膜發(fā)生氧化應(yīng)激損傷，因此，測(cè)定小鼠腸道PPs中脂質(zhì)過氧化指標(biāo)即可表征損傷程度。如圖3所示，與正常組比較，5-Fu組小鼠PPs中的ROS含量顯著增加（P＜0.05），GSH含量、CAT和GSH-Px活力均顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），這表明5-Fu導(dǎo)致小鼠發(fā)生了明顯的脂質(zhì)過氧化損傷；而與5-Fu組相比，脈動(dòng)LP組小鼠PPs中的GSH含量顯著升高（P＜0.05），CAT和GSH-Px活力明顯升高（P＜0.01或P＜0.05）。熱風(fēng)LP組小鼠PPs中的GSH-Px活力也明顯升高（P＜0.05）。以上結(jié)果表明，荷花粉多糖能夠降低小鼠PPs中過氧化物ROS含量，增加抗氧化物GSH含量和抗氧化物酶CAT和GSH-Px的活性，并且真空脈動(dòng)的干燥方式能更好地保護(hù)花粉多糖的抗氧化功能。

圖3　荷花粉多糖對(duì)5-Fu模型小鼠PPs中脂質(zhì)過氧化指標(biāo)的影響Fig. 3 Effect of LP on ROS （A）， CAT （B）， GSH （C） and GSH-Px （D）levels in supernatant of PPs in model mice induced by 5-Fu

2.5不同干燥方式提取的LP對(duì)小鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞因子TNF-α含量的影響

當(dāng)機(jī)體組織受到外界刺激時(shí)，會(huì)產(chǎn)生一系列復(fù)雜的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)，包括應(yīng)激信號(hào)的激活和傳遞、炎癥反應(yīng)發(fā)生、各種細(xì)胞因子的釋放等。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)機(jī)體、組織發(fā)生炎癥時(shí)，p38 MAPK通路被過度激活，進(jìn)而促進(jìn)炎癥因子TNF-α、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6等的合成、釋放，且炎癥因子釋放與損傷程度成正相關(guān)。因此，本研究檢測(cè)了小鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞因子TNF-α的表達(dá)水平。如圖4所示，與正常組比較，5-Fu組小鼠結(jié)腸組織中的TNF-α含量極顯著增加（P＜0.01），表明5-Fu對(duì)小鼠造成了炎癥性損傷，這與臨床化療藥物對(duì)患者腸道造成的損傷癥狀機(jī)理一致；此外，與5-Fu組相比，聯(lián)用LP能夠明顯降低小鼠結(jié)腸組織中TNF-α的水平，特別是真空脈動(dòng)干燥的荷花粉中提取的多糖，極顯著降低了小鼠結(jié)腸組織中TNF-α含量（P＜0.01）。以上結(jié)果表明，荷花粉多糖能夠降低小鼠體內(nèi)TNF-α的釋放，進(jìn)而對(duì)腸道黏膜起到保護(hù)作用，且真空脈動(dòng)干燥技術(shù)能更好地保護(hù)多糖的這一活性。

圖4　荷花粉多糖對(duì)5-Fu模型小鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞因子TNNFF--α含量的影響Fig. 4 Effect of LP on TNF-α in colon tissue of model mice induced by 5-Fu

3　討 論

腸道不僅是重要的消化器官，而且是人體最大的免疫器官，在正常生理?xiàng)l件下，腸黏膜存在較完整的屏障功能，主要由機(jī)械屏障、生物屏障、免疫屏障、化學(xué)屏障四部分組成，這4 個(gè)組成部分各自具有不同的結(jié)構(gòu)、分子調(diào)控機(jī)制和生物學(xué)功能，并通過各自的信號(hào)通路有機(jī)地結(jié)合在一起，共同防御外來抗原物質(zhì)對(duì)機(jī)體的侵襲?；熓菒盒阅[瘤治療的重要方法之一，化療藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)對(duì)正常的組織器官也有不同程度的影響，其中腸黏膜損傷正是某些抗癌藥物的毒性反應(yīng)。5-Fu是治療消化道腫瘤和乳腺癌的基本藥物，但其有較嚴(yán)重的副作用，如引起骨髓抑制、皮炎、心臟毒性、腹瀉、肝損傷和黏膜損傷，其中黏膜屏障損傷是化療的主要毒副作用［18］?；熕幬飳?duì)腸黏膜屏障的損傷主要包括：直接損傷腸黏膜，絨毛萎縮，吸收、傳遞功能降低，出現(xiàn)腹瀉；毛細(xì)血管組織缺血，釋放 大量氧自由基ROS，損傷 膜結(jié)構(gòu)，機(jī)體循環(huán)被破壞、清除自由基能力降低［19］?；熕幬锟蓪?dǎo)致細(xì)胞免疫和體液免疫功能的改變，影響CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞失調(diào)，造成腸黏膜免疫功能紊亂［20］。缺血、缺氧引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞凋亡均可促進(jìn)TNF-α、IL-6、IL-8等炎性介質(zhì)的分泌釋放，引發(fā)炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)、腸動(dòng)力障礙等病理性改變。研究發(fā)現(xiàn)，5-Fu可通過p53機(jī)制引起大腸黏膜細(xì)胞凋亡［21-22］。胃腸黏膜損傷是一種嚴(yán)重的化療副作用，不僅增加患者的身心痛苦，降低患者生活質(zhì)量，甚至使患者死亡率增加。

本研究結(jié)果顯示，荷花粉多糖能改善5-Fu所致的小鼠小腸推進(jìn)功能降低；減緩5-Fu所致的小鼠結(jié)腸縮短；明顯減輕5-Fu所致結(jié)腸黏膜組織病變、上皮杯狀細(xì)胞丟失及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理?yè)p傷，使結(jié)腸黏膜表面相對(duì)完整；這說明荷花粉多糖能夠保護(hù)小鼠腸道黏膜，促進(jìn)黏液分泌，增加小腸定向蠕動(dòng)，提高腸道屏障的機(jī)械功能；荷花粉多糖還能增強(qiáng)化療小鼠的抗氧化能力，這表明荷花粉多糖對(duì)化療藥物5-Fu所致的氧化應(yīng)激損傷等腸黏膜屏障障礙起到了良好的保護(hù)作用，這可能與花粉多糖的抗氧化能力有關(guān)，前人的研究也表明花粉多糖有較強(qiáng)的清除羥自由基效果［23］。TNF-α是最重要的炎癥因子，具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)。TNF-α可通過激活炎癥細(xì)胞，上調(diào)黏附因子、NO和氧自由基等損害組織，引起炎癥反應(yīng)［24］，而荷花粉多糖可降低TNF-α的釋放，進(jìn)一步抑制5-Fu所致的腸道黏膜氧化應(yīng)激損傷。這些結(jié)果充分說明荷花粉多糖能夠促進(jìn)小鼠的腸道蠕動(dòng)，減輕化療藥物所致的腸道黏膜免疫功能低下及病理?yè)p傷和炎癥的發(fā)生，調(diào)節(jié)機(jī)體腸道免疫功能，起到保護(hù)腸道的作用。此外，研究結(jié)果還表明，干燥方式對(duì)荷花粉多糖功效的發(fā)揮產(chǎn)生了不同影響，其中真空脈動(dòng)干燥能夠更好地保護(hù)荷花粉多糖的活性。這可能是因?yàn)樵谡婵彰}動(dòng)干燥的條件下，干燥溫度更低，水分遷移更為均勻，使得花粉多糖的熱敏性基團(tuán)得到保護(hù)。

綜上所述，荷花粉多糖能夠改善臨床常用化療藥物5-Fu造成的腸道不良反應(yīng)，拮抗小鼠腸道傳輸功能失調(diào)；減輕5-Fu所致的腸道黏膜系統(tǒng)炎癥及腸道形態(tài)學(xué)損傷，說明荷花粉多糖在化療聯(lián)合用藥、提高機(jī)體免疫功能、改善患者生活質(zhì)量等方面具有積極意義。

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Lotus Bee Pollen Polysaccharides Significantly Relieve Intestinal Mucosal Barrier Damage in Mice Caused by Fluorouracil

FANG Xiaoming1，2， TIAN Wenli2， ZHANG Xiaolin1， PENG Wenjun2， XIAO Hongwei1， GAO Lingyu2， WANG Canhong3， GAO Zhenjiang1，*
（1. College of Engineering， China Agricultur al University， Beijing 100 083， China； 2. Institute of Apicultural Research， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100093， China； 3. Institute of Medicinal Plant Development， Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College， Beijing 100193， China）

Objective: To investigate the protective effects of polysaccharides （LP） extracted from lotus bee pollen dried by different drying methods on intestinal mucosal inflammation and intestinal barrier dysfunctions in mice induced b y 5-fl uorouracil （5-Fu）. Methods: Mouse models of intestinal mucosal infl ammation were established by induction with 5-Fu and the model mice were grouped randomly and subjected to drug administration. The carbon-propelling rate was tested，and colon length and Peyer’s patches （PPs） area were measured. The colon tissue was stained with hematoxylin-eosin （HE）for histological section observation. Reactive oxygen species （ROS） and glutathione （GSH） contents， and catalase （CAT） and GSH-Px activities in the supernatant of PPs homogenate were evaluated by biochemical assays. Tumor necrosis factor-α （TNF-α）in the supernatant of colon tissue homogenate was determined through ELISA. Results: Compared with the normal group，intraperitoneal injection of 5-Fu to mice signifi cantly inhibited small intestinal transit （P ＜ 0.05）. LP extracted from lotus bee pollen dried by hot air or vacuum pulsed drying improved colon shortening caused by 5-Fu （P ＜ 0.05） and resulted in a signifi cant or highly signifi cant increase of PPs area （P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01）. Moreover， compared with the 5-Fu-induced model group， LP combined with5-Fu could signifi cantly promote intestinal transit （P ＜ 0.05）， increase GSH content， and CAT and GSH-Px activities （P ＜ 0.01 or P ＜ 0.05）， and decrease obviously TNF-α contents （P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01）. HE staining results showed that LP could signifi cantly reduce the loss of colonic mucosa epithelium goblet cells， infl ammatory cell infi ltration and more shallow crypt depth induced by 5-Fu. Conclusion: LP could relieve intestinal mucosal damage， improve intestinal transit dysfunction and protect against intestinal oxidative damage in mice induced by 5-Fu. The polysaccharides extracted from lotus bee pollen subjected to vacuum pulsed dry ing exhibited better activity than the polysaccharides extracted from hot air dried lotus bee pollen.

lotus bee pollen polysaccharide； 5-fl uorouracil； intestinal mucosal barrier； oxida tive damage； drying method

2016-03-17

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（31501548）；國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（蜜蜂）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（NCYTI-43-KXJ17）；中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目（CAAS-ASTIP-2015-IAR）

方小明（1983—），男，博士研究生，主要從事蜂產(chǎn)品加工與功能評(píng)價(jià)研究。E-mail：153886891@qq.com

高振江（1958—），男，教授，博士，主要從事農(nóng)產(chǎn)品（食品）加工技術(shù)與裝備研究。E-mail：zjgao@cau.edu.cn

10.7506/spkx1002-6630-201615035

TS201

A

1002-6630（2016）15-0209-06

引文格式：