三種方法批量全血制備的紅細胞產(chǎn)品質(zhì)量分析

李 瑩，楊 劍，黃麗紅，彭世球，苗燕平，徐翠玲

（1、江西省血液中心質(zhì)管科，江西南昌330052；2、江西省腫瘤醫(yī)院急診科，江西南昌330029）

·輸血與檢驗·

三種方法批量全血制備的紅細胞產(chǎn)品質(zhì)量分析

李 瑩1，楊 劍2，黃麗紅1，彭世球1，苗燕平1，徐翠玲1

（1、江西省血液中心質(zhì)管科，江西南昌330052；2、江西省腫瘤醫(yī)院急診科，江西南昌330029）

目的使用并改進儀器自動化批量全血制備流程及方法，制備出符合國家標準的血液。方法對比分析手工法、改進前儀器法及改進后儀器法分離全血制備出紅細胞產(chǎn)品的容量、儲存期末溶血率、血細胞比容及血紅蛋白含量。結(jié)果三種方法紅細胞外觀質(zhì)量及全項質(zhì)量抽檢均符合國家標準要求，三種方法制備紅細胞的血細胞比容、血紅蛋白含量其差異不具統(tǒng)計學意義，改進后儀器法制備紅細胞的儲存期末溶血率、紅細胞容量與手工法、改進前儀器法相比其差異具統(tǒng)計學意義。結(jié)論使用改進后儀器法進行批量全血制備，紅細胞產(chǎn)品質(zhì)量符合國家標準，且能有效提升紅細胞容量標準化。

自動化制備；批量全血制備；紅細胞產(chǎn)品質(zhì)量

近幾年，憑借比較手工制備的優(yōu)勢，使用血液成分分離機進行的儀器自動化制備在成分血液制備應用越來越廣泛，越來越多的血站開始使用血液成分分離機進行批量的全血分離制備［1-8］。為推進我省成分制備的自動化信息化，我們對儀器自動化批量分離全血的流程和方法進行了改進，并對改進后儀器法制備的去白懸浮紅細胞（以下簡稱“紅細胞”）產(chǎn)品質(zhì)量進行了全面的分析，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來源本中心2013年5月至2015年9月期間，血液成分分離機分離明細表和統(tǒng)計分析表、現(xiàn)代血站管理系統(tǒng)（Mordern 5.0）和唐山現(xiàn)代科技公司啟奧9.0信息管理系統(tǒng)中的全血分離信息，以及成分制備現(xiàn)場相關(guān)工作記錄。

1.2 樣本來源本血液中心2013年5月至2015年9月無償獻血者所獻全血，包括400ml、300ml及200ml三種規(guī)格，及全血制備的紅細胞和新鮮冰凍血漿（以下簡稱“血漿”）。

1.3 儀器與耗材全血成分分離儀LMB SEPAMATIC-SLⅢ（深圳普特公司），大容量低溫離心機Cryorfuge 6000i（美國熱電公司），Q-400五聯(lián)袋、T-300四聯(lián)袋及200四聯(lián)袋（上海輸血技術(shù)有限公司）。血細胞計數(shù)儀KX-21（希森美康公司）、分光光度計7230G、水浴箱Julabo、PHS-25型實驗室PH計、托盤天平BPII、血凝儀CA-500（希森美康公司）、細菌培養(yǎng)儀BACTEC9050。

1.4 制備方法流程

1.4.1 手工法（以下簡稱“方法1”）流程按照血站技術(shù)操作規(guī)程［9］全血濾除白細胞（以下簡稱“濾白”）后，大容量低溫離心機離心兩次后手工制備紅細胞及新鮮冰凍血漿（以下簡稱“血漿”）。第一次離心參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速4000r/min，離心時間8min，加速度9，減速度7，離心溫度4℃。第二次離心參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速3260rpm，離心時間4min，加速度9，減速度4，離心溫度4℃。2013年5月至11月本中心采集的全血大部分為該方法制備，2013年12月至2015年9月部分全血使用該方法制備。

1.4.2 改進前儀器法（以下簡稱“方法2”）流程按照血站技術(shù)操作規(guī)程［9］全血濾白后，大容量低溫離心機離心兩次后儀器自動化分離制備紅細胞與血漿，兩次離心參數(shù)同方法1。2014年12月至2015年4月本中心采集的全血部分為該方法制備。

1.4.3 改進后儀器法（以下簡稱“方法3”）流程按照血站技術(shù)操作規(guī)程［9］全血濾白后，大容量低溫離心機離心一次后儀器自動化分離制備紅細胞與血漿。離心參數(shù)：離心轉(zhuǎn)速3880r/min，離心時間15min，加速度9，減速度4，離心溫度4℃。離心后使用血液成分分離機分離出紅細胞與血漿，對血漿進行外觀檢查，符合外觀質(zhì)量標準者，操作儀器使其自動排氣熱合為成品，不符合外觀質(zhì)量標準者，操作儀器熱合成品紅細胞，血漿與其聯(lián)接的兩個轉(zhuǎn)移袋熱合后進行二次離心，離心參數(shù)及血漿成漿方法同方法1第二次離心。2015年5月至9月采集的全血部分為該方法制備。

1.5 質(zhì)量控制指標每袋紅細胞都經(jīng)肉眼外觀質(zhì)量檢查，隨機抽取紅細胞檢測其容量、儲存期末溶血率、血細胞比容及血紅蛋白含量。

1.6 統(tǒng)計學分析使用STATA 7.0統(tǒng)計學軟件包，采用方差分析、秩和檢驗（數(shù)據(jù)方差不齊時使用）對各質(zhì)量檢測項目的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，秩和檢驗兩兩比較采用bonferroni法調(diào)整檢驗水準。

2 結(jié)果

2.1 外觀質(zhì)量采用三種方法制備出來的紅細胞肉眼外觀質(zhì)量均符合國家標準［10］。

2.2 紅細胞全項質(zhì)量檢測項目的分析通過全項質(zhì)量檢測的抽查，三種方法制備的紅細胞各項目檢測結(jié)果包括儲存期末溶血率（以下簡稱“儲末溶”）、血細胞比容及血紅蛋白均符合國家標準［10］，具體見以下分析。

儲末溶的國家標準為＜紅細胞總量0.8%，血細胞比容的國家標準為0.45～0.60，血紅蛋白含量國家標準為≥100g/L。經(jīng)方差分析、秩和檢驗及bonferroni法調(diào)整檢驗水準進行分析，三種方法的全項質(zhì)量檢測項目統(tǒng)計見表1。

表1 紅細胞全項質(zhì)量檢測項目的分析

由表1可知，方法3的儲末溶和血細胞比容均值大于方法1和2，方法2和3的血紅蛋白均值大于方法1。

儲末溶三種方法差異具統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其兩兩之間比較，方法1與2的差異不具統(tǒng)計學意義（P＞0.017），但方法1與3，方法2與3的差異均具統(tǒng)計學意義（P＜0.017）。

血細胞比容三種方法差異不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。三種方法兩兩比較后其差異均不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

血紅蛋白含量三種方法差異不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05），三種方法兩兩比較其差異也不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.3 三種方法紅細胞產(chǎn)品容量的分析三種方法制備的紅細胞產(chǎn)品分為三個規(guī)格，即2U、1.5U及1U，國家標準的容量要求為標示量（ml）±10%，我中心對這三個規(guī)格的紅細胞設置的標示量分別為295ml、225ml及155ml。我中心日常對三種方法制備的紅細胞產(chǎn)品進行隨機抽取重量稱量，然后換算成容量。

經(jīng)方差分析，三種方法制備的紅細胞產(chǎn)品容量統(tǒng)計見表2。

表2 三種方法紅細胞產(chǎn)品容量的分析

2U紅細胞容量三種方法差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），三種方法兩兩比較其差異均具統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

1.5 U紅細胞容量三種方法差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。三種方法兩兩比較后，方法1與2，方法1與3差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），方法2與3其差異具統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

1U紅細胞容量三種方法差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。三種方法兩兩比較后，方法1與2，方法1與3差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），方法2與3其差異具統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3 討論

我中心使用的三種方法均依據(jù)國家相關(guān)標準規(guī)程［9］，濾白、人工熱合的過程均相同，不同的是離心、分漿過程，其中分漿過程中通過紅細胞與血漿界面判斷并予以分離產(chǎn)生紅細胞產(chǎn)品。方法1利用肉眼判斷紅細胞與血漿界面予以手工分離，方法2和3利用儀器紅細胞界面探測判斷并予以儀器擠壓分離。

從表1可以看到，方法3的儲末溶均值高于方法1和2，且和方法1、2的對比差異具顯著統(tǒng)計學意義，說明方法3對紅細胞的破壞大于方法1和2。分析原因是方法3的第一次離心參數(shù)與另兩種方法不同所致（第二次離心只針對血漿，對紅細胞無影響）。方法3離心轉(zhuǎn)速為3880r/min，離心時間為15min，方法1和2的離心轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心時間為8min，雖然方法3的離心轉(zhuǎn)速降低，但同時離心時間卻延長幾乎1倍，對紅細胞造成了一定的影響，加大了對紅細胞的破壞，但還是在允許范圍內(nèi)（方法3儲末溶符合國家標準）。三種方法其血細胞比容和血紅蛋白的差異均不具統(tǒng)計學意義，說明三種方法的操作差異對這兩項指標沒有顯著影響。

從表2可以看到，方法3制備的三個規(guī)格紅細胞容量均值最接近我中心定的標示量，但從標準差看，除2U紅細胞最小外，1.5U和1U紅細胞都最大，提示方法3中對儀器設置的1.5U和1U方案壓板推進速度和血漿定量可能還需改進，如何改進待后研究分析。三種方法制備三種規(guī)格紅細胞的容量差異均具統(tǒng)計學意義，方法3與方法2的容量差異也均具統(tǒng)計學意義，結(jié)合方法3容量均值最接近標示量，說明方法3的改進對紅細胞容量的標準化是有效的，而有效性可能體現(xiàn)在儀器的設置上。同樣，除制備2U紅細胞外，制備1.5U和1U紅細胞所得容量比較，方法1和方法2，方法1和方法3的差異均無統(tǒng)計學意義，也說明手工法和儀器法制備紅細胞容量標準化的差異不明顯。

綜上所述，使用三種方法對全血進行分離制備，制備出的紅細胞產(chǎn)品質(zhì)量均符合國家標準。三種方法制備紅細胞血比容和血紅蛋白含量差異無統(tǒng)計學意義，但方法3對紅細胞的破壞大于方法1和2，其儲末溶大于方法1和2。三種方法制備紅細胞容量差異有統(tǒng)計學意義，方法3對紅細胞容量標準化的影響是有效的，其有效性體現(xiàn)在儀器設置上。但手工法（方法1）和儀器法（方法2和3）制備的紅細胞容量差異不明顯。

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R457.1+2

A

1674-1129（2016）05-0684-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.05.052

2016-04-27；

2016-07-05）

江西衛(wèi)生和計劃生育委員會課題（20155618）