子宮內(nèi)膜癌組織中Smac、Bcl—2、Survivin 和 Bax表達(dá)的臨床意義

馮海利+侯亮

[摘要] 目的 通過(guò)免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax的表達(dá)情況，尋找子宮內(nèi)膜癌新的有效的檢測(cè)分子，為子宮內(nèi)膜癌的早期發(fā)現(xiàn)和診斷、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移、判斷療效和預(yù)后提供指標(biāo)。 方法 選取2011年2月～2013年9月來(lái)我院接受手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜癌患者80例，同時(shí)選取52例正常子宮內(nèi)膜組織和39例子宮內(nèi)膜不典型增生組織。 結(jié)果 Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在三種組織中陽(yáng)性表達(dá)差異顯著（P<0.05）。Smac與Bcl-2、Survivin在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335，P<0.05），而與Bax呈正相關(guān)（rBax=0.458，P<0.05）；而B(niǎo)cl-2與Survivin陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)（rSurvivin=0.581，P<0.05），而與Bax呈負(fù)相關(guān)（rBax=-0.477，P<0.05）；Bax與Survivin陽(yáng)性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.511，P<0.05）。 結(jié)論 對(duì)疑似子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表達(dá)的檢測(cè)以進(jìn)行進(jìn)一步確診，提高臨床確診率，為今后的臨床治療方案提供新的治療靶點(diǎn)和思路。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜癌； 第二線(xiàn)粒體源性激活半胱天冬酶； B淋巴細(xì)胞瘤-2基因； 凋亡抑制基因； 促凋亡因子

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2016）23-0001-03

[Abstract] Objective To explore the expression of Smac， Bcl-2， Survivin in endometrial cancer cells by immunohistochemical SP method in patients with endometrial cancer， and to provide new indicators for early detection and diagnosis， monitoring of recurrence and metastasis， and determination of efficacy and prognosis of endometrial cancer. Methods 80 patients with endometrial cancer surgically treated in our hospital from February 2011 to September 2013 were selected， and another 52 cases of normal endometrial tissue， and 39 cases of atypical endometrial hyperplasia were also selected. Results There were significant differences in expression of Smac， Bcl-2， Survivin， and Bax in these three kinds of tissues（P<0.05）. The positive expression of Smac had a negative relation with Bcl-2 and Survivin in endometrial cancer tissue（rBcl-2= -0.398， rSurvivin=-0.335， P<0.05）， and had a positive relation with Bax （rBax=0.458， P<0.05）. The positive expression of Bcl-2 had a positive relation with Survivin （rSurvivin=0.581， P<0.05）， and had a negative relation with Bax（rBax=-0.477， P<0.05）. The positive expression of Bax had a negative relation with Survivin（r=-0.511， P<0.05）. Conclusion Detection of Smac， Bcl-2， Survivin， and Bax expression in patients suspected with endometrial cancer can further conform the diagnosis， improve the rate of definite diagnosis， and provide new treatment target and approach for future therapy.

[Key words] Endometrial cancer； Smac； Bcl-2； Survivin； Bax

近年來(lái)，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢(shì)，且有年輕化的趨向。在我國(guó)，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率僅次于宮頸癌，在婦科惡性腫瘤中居第2位[1-3]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)[4-6]，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展可能與腫瘤細(xì)胞的凋亡受阻關(guān)系密切，第二線(xiàn)粒體源性激活半胱天冬酶（Second Mitochondria-derived Activator of Caspases，Smac）、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、凋亡抑制基因（Survivin）和促凋亡因子（Bax）可能通過(guò)不同機(jī)制參與了腫瘤細(xì)胞的凋亡過(guò)程。因此，本文旨在通過(guò)對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者手術(shù)后切除標(biāo)本行免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)以確定子宮內(nèi)膜癌腫瘤細(xì)胞中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表達(dá)的臨床價(jià)值，進(jìn)一步分析它們之間的相互關(guān)系及其與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系，以尋找子宮內(nèi)膜癌新的有效的檢測(cè)分子，為子宮內(nèi)膜癌的早期發(fā)現(xiàn)和診斷、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移、判斷療效和預(yù)后提供指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2011年2月～2013年9月來(lái)我院接受手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜癌患者80例，年齡29～68歲，平均（52.5±10.2）歲，病程（1.3±0.2）年；同時(shí)選取52例接受病理活檢的健康人正常子宮內(nèi)膜組織，年齡27～69歲，平均（53.8±11.0）歲；另選取39例由于不正常陰道出血而入院的子宮內(nèi)膜不典型增生組織，年齡27～72歲，平均（52.7±10.9）歲，病程（1.2±0.3）年。所有入選研究對(duì)象依據(jù)為活體病理檢查確認(rèn)后進(jìn)行分組，排除其他系統(tǒng)重大疾病者及類(lèi)似病癥者、精神疾病者。三組入選研究對(duì)象在年齡、病程及相應(yīng)基線(xiàn)資料方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2方法

采用SP免疫組化染色，整個(gè)過(guò)程按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。現(xiàn)用現(xiàn)配3%透明質(zhì)酸（Hyaluronan，HA），密封20 min，蒸餾水洗2次，每次5 min；再用磷酸緩沖鹽溶液（Phosphate Buffer Saline，PBS）洗滌2次，持續(xù)5 min；山羊血清密封1 h；取出切片，繼續(xù)用PBS緩沖液進(jìn)行3次洗滌，共16 min；滴加即用型快捷免疫組化即用型快捷免疫組化（MaxVision）試劑，規(guī)格：18 mL（360片），濕盒中室溫靜置15 min；PBS洗滌3次，每次5 min；將其置于DAB中維持2～8 min，實(shí)時(shí)鏡下觀察。將石蠟融化后并除去雜質(zhì)，并在石蠟中以1∶1加入鄰二甲苯制成軟蠟A和軟蠟B，同時(shí)制備硬蠟A和硬蠟B（含有軟蠟B），透明好的組織分別在軟蠟A和軟蠟B中浸泡30～40 min，在硬蠟A和硬蠟B中浸泡30 min。對(duì)待測(cè)樣品用石蠟包埋，將樣品與石蠟結(jié)合待凝固后應(yīng)用石蠟切片機(jī)將待測(cè)組織切成4 μm厚度芯片，將組織芯片置于65℃恒溫中5 h待測(cè)。

1.3觀察指標(biāo)

采用免疫組織化學(xué)技術(shù)（SP法）檢測(cè)80例子宮內(nèi)膜癌組織、39例子宮內(nèi)膜不典型增生組織和52例正常子宮內(nèi)膜組織中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax的表達(dá)情況。Smac、Bcl-2、Survivin和Bax的陽(yáng)性染色標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定采用半定量法。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其中相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax在不同組織中的陽(yáng)性表達(dá)

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可知，Smac、Bcl-2、Survivin和Bax在不同組織中的陽(yáng)性表達(dá)差異顯著（P<0.05）。其中Smac和Bax在正常子宮組織中陽(yáng)性表達(dá)率最高，Bcl-2以及Survivin在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率最高。

2.2 Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可知，Smac與Bcl-2、Survivin在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)（rBcl-2=-0.398、rSurvivin=-0.335，P<0.05），而與Bax呈正相關(guān)（rBax=0.458，P<0.05）；而B(niǎo)cl-2與Survivin在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)（rSurvivin=0.581，P<0.05），而與Bax呈負(fù)相關(guān)（rBax=-0.477，P<0.05）；Bax與Survivin在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.511，P<0.05）。

3 討論

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)[7-16]，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展可能與腫瘤細(xì)胞的凋亡受阻關(guān)系密切，隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，從細(xì)胞凋亡的角度深入探討子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展已備受人們的關(guān)注。其中Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax可能通過(guò)不同的機(jī)制參與了腫瘤細(xì)胞的凋亡過(guò)程。

Smac是存在于線(xiàn)粒體內(nèi)的能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的一類(lèi)蛋白質(zhì)，本文中Smac在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率低于子宮內(nèi)膜不典型增生組織中的陽(yáng)性表達(dá)，說(shuō)明Smac在腫瘤組織中表達(dá)較低，可能是由于其他相關(guān)因子對(duì)Smac產(chǎn)生的拮抗作用，從而抑制Smac產(chǎn)生并發(fā)揮作用，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無(wú)法正常凋亡實(shí)現(xiàn)無(wú)限增殖，Bax與Smac呈正相關(guān)，說(shuō)明二者屬于同一類(lèi)因子。Smac高表達(dá)可以使讓腫瘤細(xì)胞更敏感地接受凋亡刺激，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感程度，而Smac的低表達(dá)則有可能阻止腫瘤細(xì)胞的凋亡。Smac通過(guò)逆轉(zhuǎn)凋亡抑制蛋白（IAPs），特別是X連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）而實(shí)現(xiàn)促進(jìn)凋亡，其與IAPs結(jié)合，使其丟失能夠抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的能力，從而促進(jìn)凋亡。許多因素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的同時(shí)伴有Bax表達(dá)升高，說(shuō)明Bax高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，轉(zhuǎn)染Bax到腫瘤細(xì)胞中能促進(jìn)許多腫瘤細(xì)胞的凋亡。Bax與Bcl-2屬于同源性蛋白，Bax能夠通過(guò)過(guò)表達(dá)而抑制Bcl-2的作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。相反Bcl-2能夠抵抗凋亡，其能夠增強(qiáng)DNA的抵抗損傷能力，抑制DNA損傷分子傳感器（p53），從而抑制凋亡。研究表明[17-19]，Bcl-2在乳腺癌、結(jié)腸癌、肝癌中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Bcl-2的水平增高，Bcl-2在神經(jīng)母細(xì)胞瘤、鼻咽癌、前列腺癌、膀胱癌、肺癌、胃癌等許多腫瘤中的表達(dá)也增強(qiáng)，提示Bcl-2在腫瘤細(xì)胞中的高表達(dá)可能抑制細(xì)胞凋亡而延長(zhǎng)細(xì)胞存活時(shí)間。本次研究中，子宮內(nèi)膜癌組織中Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)水平最高，且與Smac呈負(fù)相關(guān)，且相關(guān)性較強(qiáng)，說(shuō)明Bcl-2可能是抑制Smac表達(dá)的因素之一。有研究表明[20]，Survivin幾乎在所有被檢測(cè)過(guò)的腫瘤組織中，如胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌等均有不同程度的表達(dá)，陽(yáng)性率為30%～100%，且Survivin的表達(dá)與多種腫瘤的生物學(xué)特性和（或）疾病分期有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，Survivin在子宮內(nèi)膜癌組織中也呈高表達(dá)，且與Bcl-2呈正相關(guān)，與Smac呈負(fù)相關(guān)，因此筆者推測(cè)，Survivin也可能是抑制Smac表達(dá)的一類(lèi)因子。

綜上所述，對(duì)疑似子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行Smac、Bcl-2、Survivin 和 Bax表達(dá)的檢測(cè)以進(jìn)行進(jìn)一步確診，從而提高臨床確診率，為今后的臨床治療方案提供新的治療靶點(diǎn)和思路。

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（收稿日期：2016-04-21）