鄭愛麗

禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測試驗的血清學調查

鄭愛麗

（云南省水富縣畜牧獸醫(yī)技術推廣站，云南水富 657800）

免疫是有效預防和控制禽流感的根本措施，免疫效果好壞是預防禽流感重要保證。為督促和指導免疫注射工作，2014年～2015年水富縣畜牧獸醫(yī)技術推廣站對本轄區(qū)內禽的禽流感（H5亞型）疫苗注射情況進行了免疫抗體檢測實驗的血清學調查。結果：2014、2015年免疫抗體合格率依次為79%和79.5%，達到了相關部門要求。本文詳細介紹了禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測試驗操作方法、結果判定，提出了如何提高水富縣禽流感防治相應措施。

水富縣；禽流感；免疫合格率調查

禽流感是一種由禽（鳥）流行性感冒病毒引起的感染，此病毒自然存在于禽（鳥）的消化道中。禽流感病毒分為高致病性和低致病性兩種，家禽感染高致病性禽流感病毒的致死率達80%以上。受高致病性禽流感的禽類臨床珍現(xiàn)為羽毛凌亂、停止產蛋、雞冠呈暗紅色或紫黑色、頭和顏面水腫、腳鱗出現(xiàn)紫色出血斑，部分病雞出血頭頸和腳步麻痹、抽搐等神經癥狀。

1 材料和方法

1.1被檢血清

分別采自水富縣向家壩鎮(zhèn)、太平鎮(zhèn)、兩碗鎮(zhèn)的規(guī)模養(yǎng)雞場（站）及散養(yǎng)戶120戶的雞血清200份進行檢測。

1.2禽流感（H5亞型）抗原

哈爾濱維科生物制品開發(fā)有限責任公司生產，云南省動物疫病預防控制中心提供。

1.3實驗器材

禽流感（H5亞型）抗原、1%雞紅細胞、滅菌生理鹽水、被檢血清、96孔V型板、微量移液器、震蕩器等。

1.4檢測方法

禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測試驗操作步驟及判定標準，按照診斷試劑盒說明書進行被檢血清的檢測，并記錄檢測結果。

1.5操作步驟

該實驗分兩個步驟：血凝實驗（HA）即測抗原血凝價，和血凝抑制實驗（HI）。

（1）取取潔凈96孔V型板，用移液器從第1孔至12孔各加生理鹽水25μl。

（2）用移液器吸取禽流感（H5亞型）抗原液25μl加入并吹打3～5次，使其與生理鹽水充分混勻后，依次倍比稀釋至第11孔棄去，第12孔不加抗原作對照。每孔再加入25μl生理鹽水。

（3）用移液器向1～12孔加1%的紅細胞懸液25微升，震蕩混勻后在室溫下靜置40分鐘后觀察。紅細胞完全凝集抗原血凝價為1：512。

（4）按血凝實驗結果以1：128的稀釋倍數(shù)配置病毒抗原。

（5）用移液器吸取生理鹽水25微升加入96孔V型板的第1至11孔，第12孔加50μl生理鹽水。

（6）吸取被檢血清25微升加入第1孔混勻后，依次倍比稀釋至10孔棄去，（第11孔為抗原對照，第12孔為生理鹽水對照）。

（7）第1孔至第11孔均加入含4單位混勻的病毒抗原液25μl，室溫靜置30min。

（8）將第1孔至第12孔全部加入25μl1%雞紅細胞懸液（紅細胞懸液必須在用前搖勻），震蕩混勻，室溫靜置約40min后觀察結果。

2 結果判定

在對照孔成立的條件下，能完全抑制紅細胞凝集的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的凝集抑制效價。檢測結果詳見附表1。

通過禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測試驗血清學調查結果來看，近兩年來我縣的禽流感（H5亞型）免疫抗體合格率達79.25%，說明該病2014年、2015年在我縣的免疫抗體合格率已經達到農業(yè)部標準。

3 防治措施

（1）為有效控制禽流感病的發(fā)生，對各養(yǎng)雞場進行定期按比例抽樣監(jiān)測。對交易市場、禽類屠宰點、異地調入的活禽和禽產品不定期的進行病原學和血清學抽樣監(jiān)測。尤其要管理好活禽交易市場，嚴厲打擊販賣病淘汰雞。

（2）引種檢疫，異地引進種禽、種蛋，嚴格按照國家有關規(guī)定執(zhí)行，辦理相關檢疫審批手續(xù)方可引入。

（3）加強飼養(yǎng)管理，建立嚴格防疫、衛(wèi)生消毒制度，及時清理糞便，消滅蚊蠅，并定期進行徹底消毒。

（4）定期臨檢，禽流感一旦發(fā)現(xiàn)，要及時上報按照有關法規(guī)對病雞進行嚴格封鎖、隔離、撲殺、銷毀，對雞場進行全面全面消毒，空舍，以清除禽流感。

（5）切實保證疫苗的質量，進一步改善疫苗的運輸和保存條件，保證疫苗效價，確保免疫效果。

（6）調整農村產業(yè)結構，加強指導，幫助農民科學飼養(yǎng)管理，改善飼養(yǎng)環(huán)境，提高飼養(yǎng)管理水平，減少疫病發(fā)生，增加農民收入，改善農民生活水平，從根本上提高免疫工作的積極性和主動性。

［1］ 廖斌，李芳霞. H5亞型禽流感免疫抗體監(jiān)測報告［J］.中國禽業(yè)導刊，2006，（9）：25.

［2］ 汪淑芳，周春宇. H5型高致病性禽流感免疫抗體監(jiān)測及免疫效果分析［J］.安徽農業(yè)科學，2007，35（30）：9537.

附表1 水富縣3鎮(zhèn)（辦）禽流感（H5亞型）免疫抗體檢測試驗結果 單位：%、份