飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔生長、消化酶活性、部分血清生理生化指標以及體成分的影響

胡亞軍，李昭林，田芊芊，潘化祥，3，胡 毅*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學，湖南省特色水產(chǎn)資源利用工程技術(shù)研究中心，湖南長沙410128；2.水產(chǎn)高效健康生產(chǎn)湖南省協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南常德415000；3.通威股份有限公司，四川成都610041）

水產(chǎn)養(yǎng)殖

飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔生長、消化酶活性、部分血清生理生化指標以及體成分的影響

胡亞軍1，2，李昭林1，2，田芊芊1，2，潘化祥1，2，3，胡 毅1，2*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學，湖南省特色水產(chǎn)資源利用工程技術(shù)研究中心，湖南長沙410128；2.水產(chǎn)高效健康生產(chǎn)湖南省協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南常德415000；3.通威股份有限公司，四川成都610041）

選取平均初始體重為（17.23±0.04）g的黃鱔作為試驗對象。以基礎(chǔ)飼料為對照組，在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.1%、0.2%復(fù)合益生菌（主要成分為芽孢桿菌、乳酸菌、乳桿菌），配制三種等氮等能試驗飼料。研究該復(fù)合益生菌對黃鱔生長、消化酶活性及部分血清生理生化指標的影響，養(yǎng)殖試驗持續(xù)10周。試驗結(jié)果表明：各飼料組間黃鱔肝體比、臟體比及肥滿度無顯著差異，復(fù)合益生菌能一定程度提高黃鱔成活率，但各飼料組間差異不顯著；復(fù)合益生菌有提高黃鱔增重率和蛋白質(zhì)效率、降低飼料系數(shù)的趨勢，當添加量為0.2%時，與對照組差異顯著（P＜0.05），但與添加量為0.1%組無顯著差異。腸道胰蛋白酶活力有隨復(fù)合益生菌增加而上升的趨勢，與對照組相比，當添加量為0.2%時，胰蛋白酶活性顯著提高（P＜0.05）。飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性無顯著影響，但谷草轉(zhuǎn)氨酶活性隨益生菌的增加呈下降趨勢，當添加0.2%時，與對照組差異顯著（P＜0.05）；飼料中添加益生菌可顯著提高血清溶菌酶、總超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性（P＜0.05）。飼料中添加該復(fù)合益生菌對黃鱔水分、粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響，但顯著提高了黃鱔粗脂肪、粗灰分含量（P＜0.05）。綜上所述，在本試驗條件下，飼料中復(fù)合益生菌能一定程度提高黃鱔免疫力，促進魚體生長，且0.2%添加量的效果更佳。

黃鱔；復(fù)合益生菌；生長；消化酶；生理生化指標；體成分

黃鱔（Monopterus albums）屬合鰓魚目，合鰓魚科，黃鱔屬，屬肉食性水產(chǎn)動物，是我國重要的淡水經(jīng)濟魚類之一（羅鳴鐘等，2014）。益生菌（Probiotics）是可補充飼喂的活的微生物，通過改善腸道菌群平衡，對宿主產(chǎn)生良好的健康效應(yīng)（丁軻等，2005；郭興華，2002）。在飼料中添加的主要益生菌有：芽孢桿菌類、酵母類、乳酸菌類、霉菌類以及促生長物質(zhì)（張紅艷等，2008）。有報道稱益生菌能促進動物腸道的生長發(fā)育，提高腸壁厚度、腸黏膜高度及腸絨毛密度（羅輝等，2006），提高機體免疫（高攀等，2009），促進動物生長，提高飼料利用率（羅鳴鐘等，2014），減少飼料以及排泄物對環(huán)境的破壞，減少抗生素以及其他藥物的使用（高鳳祥等，2011），在提高養(yǎng)殖動物健康的同時，降低養(yǎng)殖成本，提高養(yǎng)殖動物的品質(zhì)（王亞敏等，2008）。另外，投入到水中的飼料以及動物排泄物中也含有部分益生菌，能有效抑制水體病原菌（高權(quán)新等，2013），對養(yǎng)殖水體也有很好的調(diào)節(jié)作用（劉娜娜等，2014），水體環(huán)境的改善和穩(wěn)定的同時，又為養(yǎng)殖動物提供了良好的生存環(huán)境，減少致病因子對養(yǎng)殖動物的影響（高權(quán)新等，2013）。李劍闖和周勃（2010）研究表明，目前市場上主要的益生菌是乳酸菌類和枯草芽孢桿菌類產(chǎn)品，單獨將枯草芽孢桿菌與乳酸菌運用在動物生產(chǎn)中均有一定效果（趙劍闖等，2010；徐基利等，2010）；但研究者在凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）（胡毅等，2008）、軍曹魚（Rachycentron canadum）（何偉聰?shù)龋?015）研究中發(fā)現(xiàn)，復(fù)合益生菌比單一益生菌有更好的促生長和免疫效果。本試驗通過向飼料中添加不同比例的復(fù)合益生菌，主要成分為芽孢桿菌、乳酸菌、乳桿菌等，研究其對黃鱔的生長、生理生化指標以及體成分的影響，探索最佳添加量，并為復(fù)合益生菌在黃鱔配合飼料中的研究與應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 方法與材料

1.1 試驗設(shè)計選取平均初始體重為（17.23±0.04）g的黃鱔作為試驗對象，每個網(wǎng)箱（2 m×1.5 m×1 m）共放養(yǎng)70尾。以基礎(chǔ)飼料為對照組，在基礎(chǔ)飼料中分別添加0.1%、0.2%復(fù)合益生菌（主要成分為：芽孢桿菌、乳酸菌、乳桿菌），配制三種等氮等能飼料，每個處理3個重復(fù)。養(yǎng)殖試驗持續(xù)10周，先用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)并馴食1周，然后再投喂試驗飼料養(yǎng)殖9周。飼養(yǎng)結(jié)束后，禁食24 h再進行采樣，先進行生長指標的記錄，再采集血液、腸道進行生理生化指標測定，并對魚體體常規(guī)成分進行測定。

1.2 試驗動物試驗動物均為洞庭湖區(qū)的野生黃鱔，在常德市西湖區(qū)黃鱔養(yǎng)殖場進行網(wǎng)箱馴化暫養(yǎng)，其初始體重（17.23±0.04）g。

1.3 試驗飼料以商品飼料配方為基礎(chǔ)，以魚粉（42%）、膨化豆粕（18%）和玉米蛋白粉（8%）為主要蛋白源，加入復(fù)合益生菌（蝦樂333），比例為0（對照）、0.1%、0.2%，共三組等氮等能試驗飼料。飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 飼料原料組成及營養(yǎng)水平%

1.4 飼養(yǎng)管理分組前：將購買的試驗用野生黃鱔用聚維酮碘消毒（60～100 mg/L，藥浴30 min）后，在已消毒的室內(nèi)暫養(yǎng)池中暫養(yǎng)24 h，并挑出受傷、活動能力差的黃鱔。

分組：挑選健康、規(guī)格整齊的黃鱔作為試驗對象，每條初始體重（17.23±0.04）g，分3個組，每組設(shè)3個重復(fù)，每箱70尾，隨機分配到9個網(wǎng)箱。

馴食：鱔魚入箱后48 h后開始投餌馴化。首次少量投喂比例為1∶1的蚯蚓和鮮魚肉糜，依攝食情況逐漸提高投餌量并增加鮮魚漿的投喂比例，在鱔魚能穩(wěn)定攝食其體重的5%全鮮魚肉糜后，添加試驗飼料（鮮魚漿∶飼料=1∶4）。

正式試驗：黃鱔完全攝食粉狀飼料，每日投喂1次，投喂時間（17∶30至18∶30），投喂量以魚體重4%左右為準，以30 min內(nèi)吃完為宜，正式養(yǎng)殖試驗持續(xù)8周。雨天停止投喂，陰天酌情減量。

每天監(jiān)測養(yǎng)殖池塘的水溫、溶氧、pH值，記錄攝食量，并定期對網(wǎng)箱進行清掃，定期加水換水。試驗期間水溫為（28±3.5）℃，水中溶氧量為（6.0± 0.4）mg/L，pH為7.6±0.3。

1.5 樣品采集和指標測定

1.5.1 生長指標試驗結(jié)束后，停食1 d。先對每個網(wǎng)箱的魚進行總體稱重，進行生長指標的記錄；然后每個重復(fù)隨機選取10尾魚分別測體重，分離內(nèi)臟、肝臟、胰臟并稱重，計算肝體比和臟體比。

式中：Wt為第t天后各組魚平均體重，g；W0為初始時各組魚平均體重，g；t為飼養(yǎng)天數(shù)，d；Wt為第t天后各組魚體總重，g；W0為初始時各組魚體總重，g；Nt為每個網(wǎng)箱的初始黃鱔尾數(shù)；N0為第t天后每個網(wǎng)箱的黃鱔尾數(shù)。W為單條魚體重，g；L為魚體長，cm。

1.5.2 腸道消化酶養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，饑餓24 h，每個網(wǎng)箱隨機取5尾黃鱔，處死后，在冰盤上迅速解剖取其前腸，除去腸道內(nèi)容物和附著物，并用冰生理鹽水清洗，濾紙吸干后稱重并剪碎，依指標測定移取勻漿液，置于勻漿器中冰水浴勻漿，4℃高速低溫冷凍離心機2500 r/min離心10 min，取上清液，于24 h內(nèi)完成測定。

腸胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的測定采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定；腸道蛋白質(zhì)含量以牛血清蛋白為標準，采用考馬斯亮藍法測定。

胰蛋白酶活力單位定義：在pH 8.0、37℃條件下，每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003即為1個酶活力單位。

脂肪酶活力單位定義：在37℃條件下，每克組織蛋白在本反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為1個酶活力單位。

淀粉酶活力單位定義：組織中每毫克蛋白在37℃條件下，水解10 mg淀粉定義為1個酶活力單位。

1.5.3 血清指標試驗黃鱔停食1 d后，用2.5 mL的無菌注射器從尾靜脈采血，每箱隨機采血5尾，血液混合于10 mL無菌離心管中，4℃靜置過夜后，2500 r/min離心10 min，取上層血清置于-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（T-SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）活性均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定。

1.5.4 體成分指標水分含量測定采用105℃常壓干燥法；粗脂肪含量測定用索氏抽提法；粗蛋白含量測定用全自動凱氏定氮法；粗灰分采用550℃高溫爐灼燒法。

1.6 數(shù)據(jù)分析與處理試驗數(shù)據(jù)先用Excel 2010統(tǒng)計整理，然后采用SPSS 19.0軟件進行One-Way ANOVA方差分析，當差異顯著時（P＜0.05），采用Duncan’s法進行多重檢驗，分析結(jié)果用“平均值±標準誤”表示。

2 試驗結(jié)果

2.1 飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔生長的影響由表2可知，飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔肝體比、臟體比及肥滿度無顯著影響（P＞0.05），復(fù)合益生菌能一定程度提高黃鱔成活率，但各飼料組間差異不顯著（P＞0.05）；復(fù)合益生菌有提高黃鱔增重率和蛋白質(zhì)效率、降低飼料系數(shù)的趨勢，當添加量為0.2%時，與對照組差異顯著（P＜0.05），但與0.1%組差異不顯著（P＞0.05）。

表2 飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔生長性能的影響

2.2 飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔消化酶活性的影響由表3可知，腸道胰蛋白酶活力有隨復(fù)合益生菌的增加而上升的趨勢，淀粉酶活力則變化不顯著（P＞0.05）；當添加量為0.1%時，脂肪酶活力相比對照組顯著提高了45.22%（P＜0.05）；與對照組相比，當添加量為0.2%時，胰蛋白酶活力提高了99.77%（P＜0.05），但與0.1%組差異不顯著（P＞0.05）。

表3 飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔消化酶活性的影響U/mg prot

2.3 飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔血清指標的影響由表4可知，飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性無顯著影響（P＞0.05），但谷草轉(zhuǎn)氨酶活性隨益生菌的增加呈下降趨勢，溶菌酶活性呈上升趨勢，總超氧化物歧化酶、過氧化氫酶則隨著益生菌添加量的增加，活性呈先下降后上升趨勢；與對照組相比，當飼料中添加0.2%該益生菌時，黃鱔血清溶菌酶和總超氧化物歧化酶分別提高51.75%（P＜0.05）和6.83%（P＜0.05），谷草轉(zhuǎn)氨酶降低64.9%（P＜0.05）、過氧化氫酶活性提高37.50%（P＜0.05）。

表4 飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔血清指標的影響

2.4 飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔體成分的影響由表5可知，與對照組相比，飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔水分、粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響，能顯著提高黃鱔粗脂肪、粗灰分含量（P＜0.05）。

表5 飼料中添加復(fù)合益生菌對黃鱔體成分的影響%

3 討論

從本試驗結(jié)果看，飼料中添加復(fù)合益生菌能促進黃鱔生長，降低飼料系數(shù)。這與在鯉魚（Cyprinus carpio）（杜宣等，2006）、奧尼羅非魚（Hybrid tilapia）（楊奇慧和周小秋，2009）、凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）（胡毅等，2008）上的結(jié)果相似。其作用機理可能有以下幾點：（1）益生菌能調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，分泌淀粉酶、蛋白酶、植酸酶等多種酶類（羅輝等，2006），參與誘導(dǎo)機體內(nèi)源消化酶的分泌（張紅艷等，2008）；本試驗中，當添加量為0.2%時，能顯著提高胰蛋白酶活性以及蛋白質(zhì)利用效率，與生長呈一定的相關(guān)性（丁賢等，2004），這與胡毅等（2008）在凡納濱對蝦上的研究結(jié)果相似，說明魚類消化酶活力是反映魚類對營養(yǎng)物質(zhì)消化能力的重要指標（張紅艷等，2008；胡毅等，2008；丁賢等，2004）。（2）添加的乳酸菌和乳酸桿菌本身就是營養(yǎng)物質(zhì)，又可通過產(chǎn)生有機酸（乳酸、乙酸等）降低腸道pH值（3.0～3.5），促進消化（張紅艷等，2008）。（3）調(diào)節(jié)機體微生態(tài)平衡，改善宿主動物的健康狀況（高鳳祥等，2011）。已有研究表明，復(fù)合益生菌比單一益生菌更有利于促進腸道微生物的多樣性平衡，使腸道環(huán)境更加穩(wěn)定，更有利于腸道健康（徐基利等，2010；田宏杰等，2006），復(fù)合益生菌比單一益生菌具有更好的促生長效果（高鳳祥等，2011）。本試驗結(jié)果表明，0.2%組（每千克飼料活菌含量≥2.4×1010cfu/g）比0.1%組（每千克飼料活菌含量≥1.2×1010cfu/g）對黃鱔的生長效果更好。這與楊奇慧等（2009）在奧尼羅非魚（Hybrid tilapia）、劉曉勇等（2011）在雜交鱘（Hybrid sturgeon）的試驗中有相似的結(jié)果，益生菌的添加量比較低時，差異不顯著，達不到促生長的效果；當超過最佳添加量時，試驗動物的生長隨著添加量的增加而下降。劉曉勇等（2008）認為，動物腸道微生物種群和數(shù)量形成了一個動態(tài)平衡，當飼料中添加過量的益生菌時，產(chǎn)生的大量酶會抑制動物機體內(nèi)源酶活性，從而抑制生長。

添加該復(fù)合益生菌能顯著改善黃鱔的非特異性免疫指標，提高機體抗氧化能力。Salinas等（2005）在烏頰魚（Giltheadseabream）、胡毅等（2008）在凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加益生菌能提高機體非特異性免疫功能，益生菌通過生物拮抗作用抑制病原菌侵入和定植維持正常的腸道菌群平衡（張紅艷等，2008）。本試驗中，當添加量為0.2%時，血清中溶菌酶、總超氧化物歧化酶（T-SOD）和過氧化氫酶（CAT）活性顯著提高，溶菌酶能抑制腸道內(nèi)有害病菌滋生，維持腸道健康，減少腸道疾病的發(fā)生（陳艷等，2009）。T-SOD通過催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)或消除機體代謝過程中產(chǎn)生的過多的超氧陰離子自由基，能有效提高機體免疫力（朱秀敏，2011）。CAT能催化細胞內(nèi)過氧化氫分解，防止細胞氧化（張坤生和田薈琳，2007）。何偉聰?shù)龋?015）認為枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌的復(fù)合菌，比單一的添加枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌有更好的效果。這可能是不同細菌在腸道微生物區(qū)系中占有不同的生態(tài)位，故而添加復(fù)合益生菌比添加單一益生菌有更好的免疫效果。

本試驗中，添加該復(fù)合益生菌能顯著提高黃鱔粗灰分含量，且0.2%組比0.1%組效果更顯著，與楊奇慧和周小秋（2009）在奧尼羅非魚（Hybrid tilapia）中的研究結(jié)果相似，可能是隨著該益生菌的添加，黃鱔增強了對礦物質(zhì)元素的吸收能力，進而促進骨骼發(fā)育，從而體質(zhì)更加健壯。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，飼料中添加復(fù)合益生菌可增強黃鱔非特異性免疫能力，提高腸道消化酶活性和蛋白質(zhì)效率，降低飼料系數(shù)，促進魚體生長。當添加量為0.2%（2 g/kg）時效果更佳。

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A 10-week feeding experiment was conducted to study the effect of a compound feeding probiotics（containing bacillus，lactobacillus and lactobacillus）on growth performance of rice filed eel（Monopterus albus）with initial body weight of（17.23±0.04）g.Three isonitrogenous and isolipidic diets were formulated，containing 0，0.1%and 0.2%compound feeding probiotics，respectively（designed as D0，D0.1，D0.2）.As the results showed：the ratio of liver weight to bodyweight，ratio of viscera to body weight and fattenessing indexes of eel changed insignificantly among the diet groups，while the survival of eel improved insignificantly；however，the dietary compound probiotics affected the growth performance significantly，the trend showed that weight gain and protein efficiency were increased with the compound probiotics increasing，but feed coefficient decreased，especially for D0.2（P＜0.05）.Trypsin activity was increased as compound probiotics adding，compared with D0，the trypsin activity in D0.2increased significantly（P＜0.05）.There was no significant difference in serum alanine aminotransferase activity；on the one hand，aspartate aminotransferase activity decreased as the mount of probiotics increased，while D0.2was significantly（P＜0.05）；on the other hand，this compound feeding probiotics could increase serum lysozyme，total superoxide dismutase and catalase activity significantly（P＜0.05）.There was no significant effect on moisture and crude protein of eel，but crude fat and crude ash content increased significantly（P＜0.05）.To conclusion，adding 0.2%compound feeding probiotics to the diet could improve growth performance and immunity of rice filed eel significantly（Monopterus albus）in this study.

Monopterus albus；compound feeding probiotics；growth；digestive enzyme；physiological and biochemical indexes；body composition

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161708

S816.7

A

1004-3314（2016）17-0027-05

國家自然科學基金（31572626）；湖南省教育廳優(yōu)秀青年項目（14B089）

*通訊作者