發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚生長性能、體成分、血清生化指標及肝臟組織形態(tài)的影響

馮 建 王 萍,2* 何嬌嬌 婁宇棟 黨 慧 鄧 蓉

(1.浙江海洋大學(xué)，浙江省海洋養(yǎng)殖裝備與工程技術(shù)重點實驗室，舟山316000；2.寧波大學(xué)海洋學(xué)院，寧波315211)

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發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚生長性能、體成分、血清生化指標及肝臟組織形態(tài)的影響

馮 建1王 萍1,2*何嬌嬌1婁宇棟1黨 慧1鄧 蓉1

(1.浙江海洋大學(xué)，浙江省海洋養(yǎng)殖裝備與工程技術(shù)重點實驗室，舟山316000；2.寧波大學(xué)海洋學(xué)院，寧波315211)

本試驗旨在研究發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚(Larimichthyscrocea)幼魚生長性能、體成分、血清生化指標及肝臟組織形態(tài)的影響，探索發(fā)酵豆粕替代大黃魚幼魚飼料中魚粉的適宜比例。以魚粉、小麥蛋白粉為主要蛋白質(zhì)源，魚油、大豆油和大豆卵磷脂為主要脂肪源，配制含40%魚粉的基礎(chǔ)飼料。以發(fā)酵豆粕替代基礎(chǔ)飼料中0(R0組，作為對照組)、15%(R15組)、30%(R30組)、45%(R45組)、60%(R60組)、75%(R75組)的魚粉，并在除對照組飼料外的各飼料中添加適量晶體氨基酸(賴氨酸和蛋氨酸)，配制6種等氮(蛋白質(zhì)水平為45%)等脂(脂肪水平為10%)的試驗飼料。養(yǎng)殖試驗在海水網(wǎng)箱(1.5 m×1.5 m×2.0 m)中進行，每種試驗飼料投喂3個網(wǎng)箱，每個網(wǎng)箱放養(yǎng)60尾初始體重為(10.49±0.03) g大黃魚幼魚，養(yǎng)殖時間持續(xù)56 d。結(jié)果表明：各組大黃魚幼魚的存活率無顯著差異(P>0.05)，但隨著發(fā)酵豆粕替代魚粉比例的升高有下降趨勢；與R0組相比，R15、R30、R45組的特定生長率(SGR)、增重率(WGR)、飼料系數(shù)(FCR)無顯著變化(P>0.05)，進一步提高魚粉替代比例(R60、R75組)，SGR、WGR顯著降低(P<0.05)，F(xiàn)CR顯著升高(P<0.05)；各組全魚粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、水分含量無顯著差異(P>0.05)，隨著發(fā)酵豆粕替代魚粉比例的升高，全魚粗灰分含量有上升的趨勢；各組血清生化指標沒有顯著差異(P>0.05)，但隨著發(fā)酵豆粕替代魚粉比例的升高，血清中總膽固醇含量有下降趨勢，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力有升高趨勢；通過肝臟組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕替代魚粉比例超過30%后會造成肝臟細胞的損傷，替代比例越高損傷越嚴重。綜合各項測定指標，本研究認為：發(fā)酵豆粕替代飼料(含40%魚粉)中30%的魚粉較為適宜，過高的替代比例會造成大黃魚幼魚肝臟組織病變，導(dǎo)致生長速度、存活率下降。

大黃魚幼魚；發(fā)酵豆粕；生長性能；體成分；血清生化指標；肝臟組織形態(tài)

魚粉是水產(chǎn)動物飼料的主要組成部分[1]，通常占飼料成本的1/2以上。近年來，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)飛速發(fā)展，魚粉需求量日益增大，且隨著海洋漁業(yè)資源的日益衰退，使得魚粉價格持續(xù)走高。為緩解供求矛盾、降低飼料成本、提高經(jīng)濟效益，國內(nèi)外學(xué)者就魚粉替代進行了大量研究，這些研究表明，在飼料中使用其他廉價蛋白質(zhì)源替代魚粉是可行的[2]。豆粕是水產(chǎn)動物飼料中應(yīng)用最為廣泛的植物性蛋白質(zhì)源，但其含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，不利于魚類的消化吸收，限制了其對魚粉替代水平的提高[3]。豆粕經(jīng)過微生物發(fā)酵可有效分解和破壞豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高營養(yǎng)價值[4-7]。對石斑魚(Epinepheluscoioides)[8]、南美白對蝦(PenaeusvannameiBoone)[9]、方正鯽(Carassiusauratusgibelio)[10]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[11]的研究證實：在水產(chǎn)動物飼料利用效果上發(fā)酵豆粕優(yōu)于普通豆粕。

大黃魚(Larimichthyscrocea)，屬硬骨魚綱(Osteichthyes)，鱸形目(Perciformes)，石首魚科(Sciaenidae)，黃魚屬(Larimichthys)，為傳統(tǒng)“四大海產(chǎn)”之一，是我國近海主要養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類。隨著大黃魚人工繁育的成功，大黃魚逐漸成為我國主要的海水養(yǎng)殖魚類。為應(yīng)對當(dāng)前魚粉價格高昂、供求緊張等問題，國內(nèi)學(xué)者對其人工配合飼料進行了魚粉的替代研究[12-15]，但尚未見發(fā)酵豆粕替代魚粉的報道。因此，本試驗用發(fā)酵豆粕替代大黃魚幼魚飼料中不同比例的魚粉，研究其對大黃魚幼魚生長性能、體成分、血清生化指標及肝臟組織形態(tài)的影響，探索發(fā)酵豆粕替代大黃魚幼魚飼料中魚粉的適宜比例，豐富大黃魚飼料營養(yǎng)相關(guān)數(shù)據(jù)庫，為大黃魚幼魚全價配合飼料的配制提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計與試驗飼料

以魚粉(秘魯)、小麥蛋白粉為主要蛋白質(zhì)源，魚油、大豆油和大豆卵磷脂為主要脂肪源，配制含40%魚粉的基礎(chǔ)飼料。以發(fā)酵豆粕(購自寧波天邦股份有限公司)替代基礎(chǔ)飼料中0(R0組，作為對照組)、15%(R15組)、30%(R30組)、45%(R45組)、60%(R60組)、75%(R75組)的魚粉，并在除R0組飼料外的各飼料中添加適量的晶體氨基酸(賴氨酸和蛋氨酸)，以消除限制性氨基酸的影響，共配制6種等氮(蛋白質(zhì)水平為45%)等脂(脂肪水平為10%)的試驗飼料。魚粉和發(fā)酵豆粕的必需氨基酸組成見表1，試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表2，試驗飼料的氨基酸組成見表3。所有飼料原料分別粉碎過80目篩，然后按逐級擴大的方法混合均勻，放入攪拌機加水?dāng)嚢?，使其充分濕潤；用雙螺桿擠條機(華南理工大學(xué)，F(xiàn)-26Ⅱ型)制作成形，然后用制粒機加工成2和4 mm 2種粒徑的顆粒飼料，將顆粒飼料置入90 ℃烘箱中熟化30 min，自然風(fēng)干，塑封后放入-20 ℃冰箱保存。

表1 魚粉和發(fā)酵豆粕的必需氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表2 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表2項目Items組別GroupsR0R15R30R45R60R75大豆卵磷脂Soybeanlecithin1.501.501.501.501.501.50纖維素Cellulose16.1213.0810.057.032.390.11維生素預(yù)混料Vitaminpremix1)3.003.003.003.003.003.00礦物質(zhì)預(yù)混料Mineralpremix2)2.002.002.002.002.002.00賴氨酸Lys0.060.130.190.250.25蛋氨酸Met0.050.100.150.200.24氯化膽堿Chloridecholine0.300.300.300.300.300.30一水合磷酸二氫鈣Ca(H2PO4)2·H2O1.501.501.501.501.501.50誘食劑Attractant3)0.300.300.300.300.300.30合計Total100.00100.00100.00100.00100.00100.00營養(yǎng)水平Nutrientlevels4)粗蛋白質(zhì)Crudeprotein46.2545.6345.4745.8345.2845.36粗脂肪Crudelipid10.7210.4410.5010.3110.2110.09粗灰分Ash9.268.978.838.648.478.26

1)維生素預(yù)混料為每千克飼料提供Vitamin premix provided the following per kg of diets：胡蘿卜素 carotene 0.1 g，VD 0.05 g，生育酚 tocopherol 0.38 g，VB10.06 g，VB20.19 g，VB60.05 g，氰鈷素 cyanocobalamin 0.1 mg，生物素 biotin 0.01 g，肌醇 inositol 3.85 g，尼克酸 niacin acid 0.77 g，泛酸 pantothenic acid 0.27 g，葉酸 folic acid 0.01 g，氯化膽堿 chloride choline 7.87 g，纖維素 cellulose 1.92 g。

2)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供Mineral premix provided the following per kg of diets：NaF 2 mg，KI 0.8 mg，CoCl2·6H2O (1%) 50 mg，CuSO4·5H2O 10 mg，F(xiàn)eSO4·H2O 80 mg，ZnSO4·H2O 50 mg，MnSO4·H2O 60 mg，MgSO4·7H2O 1 200 mg，Ca(H2PO4)2·H2O 3 000 mg，NaCl 100 mg，沸石粉 zoelite powder 15.447 g。

3)誘食劑組成 Composition of attractant：甘氨酸∶甜菜堿=1∶2 glycine∶betaine=1∶2。

4)粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分為實測值。Crude protein, crude lipid and ash were measured values.

表3 試驗飼料的氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表3項目Items組別GroupsR0R15R30R45R60R75甘氨酸Gly5.765.525.275.094.854.61丙氨酸Ala5.174.814.854.774.464.10半胱氨酸Cys0.920.930.991.121.101.04脯氨酸Pro7.697.768.038.058.148.30酪氨酸Tyr2.312.342.772.722.722.81合計Total59.9659.8259.3459.8759.9960.40

色氨酸未檢測 Trp was not detected。

1.2 試驗用魚和飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗在浙江省象山縣西滬港區(qū)進行，正式試驗開始前將試驗用大黃魚幼魚放入3 m×6 m×3 m海水網(wǎng)箱中暫養(yǎng)2周，使用商業(yè)飼料進行投喂使之適應(yīng)人工配合飼料。2周后，挑選體格強健、大小均一的大黃魚幼魚[平均體重(10.49±0.03) g]隨機分為5組，每組隨機分配3個網(wǎng)箱(1.5 m×1.5 m×2.0 m)，每個網(wǎng)箱放養(yǎng)60尾，每天飽食投喂2次(05：00和17：00)，養(yǎng)殖周期為56 d。試驗期間水溫25.5～29.5 ℃，鹽度27‰～30‰，溶解氧含量在7 mg/L以上。

1.3 樣品采集和指標分析

1.3.1 樣品采集

56 d的養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，對試驗魚饑餓24 h，以丁香酚(1∶1 000)麻醉，然后計數(shù)，稱重。分別從每個網(wǎng)箱隨機取5尾魚，用一次性無菌注射器(2 mL)自尾部靜脈取血，注入常規(guī)采血管，于4 ℃條件下靜置24 h，然后離心(3 000 r/min，4 ℃)10 min，取血清并保存于-20 ℃冰箱中，用于血清生化指標測定。每個網(wǎng)箱另隨機取3尾魚，測量體長、體重后，取內(nèi)臟團和肝臟稱重，用于計算肝體比、臟體比和肥滿度。每個網(wǎng)箱再隨機取2尾魚，解剖得其肝臟，清理完表面的脂肪和結(jié)締組織后放入波恩試液中固定保存，所有樣品固定24 h后，用70%乙醇清洗，并保存于70%乙醇中。每個網(wǎng)箱再隨機另取5尾魚，置于-20 ℃冰箱保存，用于常規(guī)營養(yǎng)成分分析。

1.3.2 常規(guī)營養(yǎng)成分分析

飼料原料、試驗飼料及魚體常規(guī)營養(yǎng)成分的測定采用AOAC(1993)的方法。其中水分含量在105 ℃恒溫烘箱中烘至恒重后測定，粗蛋白質(zhì)含量采用半微量凱氏定氮法(總氮×6.25)測定，粗脂肪含量采用索氏抽提法測定，粗灰分含量于馬福爐中550 ℃灼燒6 h后測定。

1.3.3 血清生化指標測定

血清生化指標按照試劑盒說明書測定，所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3.4 肝臟組織觀察

取出70%乙醇中保存的肝臟樣品，然后酒精梯度脫水，石蠟包埋，組織切片機(Leica RM2135)切片，最后用蘇木精-伊紅(HE)染色法染色[16]，顯微鏡下觀察組織切片結(jié)構(gòu)并拍照。

1.4 計算公式

特定生長率(specific growth rate，SGR，%/d)=

100×(lnWt-lnWo)/t；

存活率(survival rate，SR,%)=100×Nt/No；

增重率(weight gain rate，WGR,%)=100×

(Wt-Wo)/Wo；

飼料系數(shù)(feed conversion ratio，F(xiàn)CR)=

(T-S)/(Wt-Wo)；

肝體比(HSI,%)=100×Wh/Wt；

臟體比(VSI,%)=100×Wv/Wt；

肥滿度(condition factor，CF,%)=

100×Wt/L3。

式中：Wo表示初始體重；Wt表示終末體重；No表示初始網(wǎng)箱中魚尾數(shù)；Nt表示終末網(wǎng)箱中魚尾數(shù)；T表示總飼料量；S表示剩余飼料量；t表示試驗天數(shù)(56 d)；Wh表示肝臟重量；Wv表示內(nèi)臟重量；L表示體長。

1.5 統(tǒng)計分析

將試驗數(shù)據(jù)用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著后進行Tukey’s多重比較，顯著性水平設(shè)為P<0.05。試驗結(jié)果以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié) 果

2.1 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚生長性能的影響

從表4中可以看出，各組大黃魚幼魚的存活率無顯著差異(P>0.05)，但隨替代比例的增加有下降趨勢；R0組末體重、特定生長率、增重率均顯著高于R60、R75組(P<0.05)；飼料系數(shù)以R0組最低，顯著低于R60、R75組(P<0.05)。各組肝體比、臟體比、肥滿度均無顯著差異(P>0.05)(表5)。

表4 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚生長指標的影響

同行數(shù)據(jù)肩標無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts indicated no significant difference (P>0.05), while with different letter superscripts indicated significant difference (P<0.05). The same as below.

表5 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚形體指標的影響

2.2 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚體成分的影響

從表6中可以看出，各組大黃魚幼魚的全魚粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和水分含量均無顯著差異(P>0.05)；R60、R75組全魚粗灰分含量顯著高于其他各組(P<0.05)，其他組間差異不顯著(P>0.05)。

表6 發(fā)酵豆粕替代魚粉對黃魚幼魚體成分的影響(濕重基礎(chǔ))

2.3 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚血清生化指標的影響

從表7中可以看出，R0組大黃魚幼魚血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)的含量與其他組無顯著差異(P>0.05)；R30組血清中TP、ALB、GLOB的含量最高，且顯著高于R75組(P<0.05)。血清中總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)和葡萄糖(GLU)的含量各組間無顯著差異(P>0.05)，但發(fā)酵豆粕替代不同比例魚粉后血清中CHOL的含量均有不同程度的降低。血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活力各組間均無顯著差異(P>0.05)，但發(fā)酵豆粕替代不同比例魚粉后血清中ALT活力均有不同程度的增加。

表7 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚血清生化指標的影響

2.4 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚肝臟組織形態(tài)的影響

肝臟組織觀察(圖1)顯示：R0、R15和R30組肝細胞較為正常，但隨著發(fā)酵豆粕替代魚粉比例的進一步增加，肝細胞空泡化現(xiàn)象加劇；細胞內(nèi)脂肪堆積加重，推動細胞核向細胞膜靠近；并且肝細胞核逐漸溶解或缺失，細胞崩解加劇，直至R75組時，肝細胞輪廓模糊，大片肝細胞核消失不見。

圖1 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚肝臟組織形態(tài)的影響(HE染色)

3 討 論

3.1 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚生長性能的影響

與普通豆粕相比，發(fā)酵豆粕中粗蛋白質(zhì)含量有所提高，蛋白質(zhì)品質(zhì)有了一定程度的提升[17]，營養(yǎng)價值得到優(yōu)化[18]。以往的研究指出，與普通豆粕相比，發(fā)酵豆粕可以提高對飼料中魚粉的替代比例[19]。在本研究中，發(fā)酵豆粕替代45%的魚粉不影響大黃魚幼魚的生長，可能原因是豆粕經(jīng)過發(fā)酵使抗?fàn)I養(yǎng)因子減少，并且提高了小肽含量，使得魚體對發(fā)酵豆粕的消化吸收能力提高，從而提高了對魚粉的替代比例。在飼料中添加適量的晶體氨基酸(賴氨酸和蛋氨酸)消除了限制性氨基酸的影響可能也是其原因之一[20-22]。例如，飼料中添加晶體氨基酸后，發(fā)酵豆粕替代黑鯛(Acanthopagrusschlegeli)幼魚飼料中高達40%的魚粉而不影響其正常生長[23]；飼料中添加晶體氨基酸后，發(fā)酵豆粕甚至可以完全替代虹鱒[11]、日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense)[24]飼料中的魚粉而不對其生長產(chǎn)生負面影響。另有報道，在飼料中添加植酸酶[14]、復(fù)合益生菌等[25]也可以提高植物蛋白質(zhì)源對魚粉的替代比例。有研究發(fā)現(xiàn)，以植物蛋白質(zhì)源替代水產(chǎn)動物飼料中的魚粉，其生長率隨著替代比例的升高而有下降趨勢[20-21,26]。本研究也得到相似結(jié)果：隨著發(fā)酵豆粕替代魚粉比例的升高，大黃魚幼魚的增重率、特定生長率呈現(xiàn)出下降的趨勢，R60、R75組顯著低于對照組(R0組)。其原因可能是過高比例發(fā)酵豆粕的添加降低了飼料的適口性，使得攝食率下降，從而不利于大黃魚幼魚的生長[27-28]。本研究還發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕對魚粉的替代比例對大黃魚幼魚的肝體比、臟體比、肥滿度沒有產(chǎn)生顯著影響，這與劉興旺等[28]在大菱鲆(ScophthatmusmaximusL．)飼料中用大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉的研究結(jié)果相似。

3.2 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚體成分的影響

有研究指出，發(fā)酵豆粕替代魚粉比例不影響魚體粗蛋白質(zhì)含量[9,11]。本試驗也觀察到相似結(jié)果：發(fā)酵豆粕替代不同比例魚粉對大黃魚幼魚的全魚粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和水分含量沒有產(chǎn)生顯著影響。一些研究認為，隨著植物蛋白質(zhì)源添加量的增加，會引起魚體粗脂肪含量的下降。如劉興旺等[28]對大菱鲆的研究結(jié)果顯示，魚體粗脂肪含量隨著魚粉替代比例的增加而降低；García-Ortega等[29]對巨型石斑魚(Epinepheluslanceolatus)的研究也發(fā)現(xiàn)這一趨勢。推測其原因可能是大豆蛋白中的非淀粉多糖引起腸道病變，使脂肪的吸收下降所致。也有報道稱，植物蛋白質(zhì)源替代魚粉不會對魚體粗脂肪含量產(chǎn)生顯著影響[30-31]，這與本試驗得到的結(jié)果相似。而石西等[16]認為，隨著小球藻(Chlorella)替代魚粉比例的升高，鯽魚(Carassiusauratus)肌肉粗脂肪含量呈現(xiàn)出上升趨勢，肌肉粗蛋白質(zhì)含量在低比例替代時升高，高比例替代時下降，這可能是由于不同蛋白質(zhì)源以及魚體脂肪代謝方式的不同會對肌肉粗脂肪含量產(chǎn)生不同的影響。本試驗還發(fā)現(xiàn)，隨著發(fā)酵豆粕替代魚粉比例的升高，魚體粗灰分含量呈現(xiàn)出上升趨勢，這可能是發(fā)酵豆粕的添加增加了魚體鈣或磷的沉積所致，具體的作用機制需要進一步試驗驗證。

3.3 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚血清生化指標的影響

血清TP在肝臟中合成，可以作為肝臟損傷的指示物，肝臟結(jié)構(gòu)上的變化會引起血清TP含量的改變。在本研究中，發(fā)酵豆粕替代不同比例的魚粉對大黃魚幼魚血清TP、ALB、GLOB含量無顯著影響。有研究認為，植物蛋白質(zhì)源替代魚粉可能會影響魚體內(nèi)能量代謝，隨著替代比例的增加而引起血清TCHO、TG含量的下降[32-34]，這與本試驗中血清中TCHO含量的變化一致，可能是發(fā)酵豆粕中大豆黃酮素作用的結(jié)果[35]。正常情況下ALT主要存在于肝臟細胞中，而AST主要存在于肝細胞線粒體，它們在血清中的活力很低，只有當(dāng)細胞膜通透性增強或細胞壞死時才會大量進入血液，使血清中這2種酶的活力升高。由表7可見，各組大黃魚幼魚血清AST和ALT活力并沒有顯著差異，但ALT活力隨著替代比例的升高而升高，這可能與肝臟組織損傷有關(guān)，表明發(fā)酵豆粕替代魚粉比例過高會引起肝臟組織損傷。

3.4 發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚肝臟組織形態(tài)的影響

有研究表明，飼料中植物蛋白質(zhì)源的添加會降低肝臟的生理機能，肝臟發(fā)生病變時，脂蛋白合成減少，肝細胞內(nèi)的脂肪不能及時轉(zhuǎn)運出來，從而導(dǎo)致脂肪在肝臟堆積[36-37]。提高飼料脂肪水平也會引起脂肪在肝臟中的沉積，脂肪的大量沉積可能會導(dǎo)致脂肪肝[38]。Hu等[39]在鱸魚(Lateolabraxjaponicus)飼料中用混合動物蛋白質(zhì)源替代魚粉的研究發(fā)現(xiàn)，高替代(60%和80%)組肝細胞出現(xiàn)明顯的脂肪性病變，肝細胞損傷嚴重。本試驗對大黃魚幼魚肝臟組織學(xué)觀察顯示，R0、R15和R30組肝臟組織較為正常，但隨著發(fā)酵豆粕替代魚粉比例的進一步升高，肝細胞空泡化現(xiàn)象加劇，細胞核溶解消失，肝臟細胞病變加劇。這與石西等[16]對鯽魚的研究結(jié)果相似。因此，在養(yǎng)殖實踐中應(yīng)該注意植物蛋白質(zhì)源的適宜添加量。

4 結(jié) 論

發(fā)酵豆粕替代飼料(含40%魚粉)中30%的魚粉較為適宜，過高的替代比例會造成大黃魚幼魚肝臟組織病變，導(dǎo)致生長速度、存活率下降。

[1] OLSEN R L,HASAN M R.A limited supply of fishmeal:impact on future increases in global aquaculture production[J].Trends in Food Science & Technology,2012,27(2):120-128.

[2] 周岐存,麥康森,劉永堅,等.動植物蛋白源替代魚粉研究進展[J].水產(chǎn)學(xué)報,2005,29(3):404-410.

[3] 劉利曉,黃志偉,許小友,等.微生物發(fā)酵對豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子及其營養(yǎng)價值的影響研究進展[J].河南畜牧獸醫(yī),2014,35(4):8-10.

[4] 高美云,張通,劉賓,等.豆粕抗?fàn)I養(yǎng)因子及其生物改性的研究[J].中國飼料,2010(3):37-41.

[5] 胡瑞,陳艷,王之盛,等.復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕生產(chǎn)工藝參數(shù)的優(yōu)化及酶菌聯(lián)合發(fā)酵對豆粕品質(zhì)的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2013,25(8):1896-1903.

[6] 陳廣信,曹贊,高振華.不同發(fā)酵豆粕營養(yǎng)價值及應(yīng)用[J].中國畜牧獸醫(yī),2014,41(2):111-114.

[7] 楊玉娟,姚怡莎,秦玉昌,等.豆粕與發(fā)酵豆粕中主要抗?fàn)I養(yǎng)因子調(diào)查分析[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,49(3):573-580.

[8] 羅智,劉永堅,麥康森,等.石斑魚配合飼料中發(fā)酵豆粕和豆粕部分替代白魚粉的研究(英文)[J].水產(chǎn)學(xué)報,2004,28(2):175-181.

[9] 冷向軍,王文龍,周洪琪,等.不同大豆產(chǎn)品替代魚粉飼養(yǎng)南美白對蝦的試驗[J].淡水漁業(yè),2006,36(3):47-49.

[10] 黃雄斌,李國富.方正鯽飼料中發(fā)酵豆粕和豆粕替代魚粉的研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(13):143-145,148.

[11] YAMAMOTO Y,IWASHITA Y,MATSUNARI H,et al.Influence of fermentation conditions for soybean meal in a non-fish meal diet on the growth performance and physiological condition of rainbow troutOncorhynchusmykiss[J].Aquaculture,2010,309(1/2/3/4):173-180.

[12] AI Q H,MAI K S,TAN B P,et al.Replacement of fish meal by meat and bone meal in diets for large yellow croaer,Pseudosciaenacrocea[J].Aquaculture,2006,260(1/2/3/4):255-263.

[13] LI J,ZHANG L,MAI K S,et al.Potential of several protein sources as fish meal substitutes in diets for large yellow croaker,PseudosciaenacroceaR[J].Journal of the World Aquaculture Society,2010,41(Suppl.2):278-283.

[14] 張帆,張文兵,麥康森,等.飼料中豆粕替代魚粉對大黃魚生長、消化酶活性和消化道組織學(xué)的影響[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報,2012,42(增刊):75-82.

[15] ZHANG L,MAI K S,AI Q H,et al.Use of a compound protein source as a replacement for fish meal in diets of large yellow croaker,PseudosciaenacroceaR[J].Journal of the World Aquaculture Society,2008,39(1):83-90.

[16] 石西,羅智,黃超,等.小球藻替代魚粉對鯽生長、體組成、肝臟脂肪代謝及其組織學(xué)的影響[J].水生生物學(xué)報,2015,39(3):498-506.

[17] 李云蘭,高啟平,帥柯,等.發(fā)酵豆粕替代豆粕對鯉魚生長性能和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2015,27(2):469-475.

[18] SONG Y S,FRIAS J,MARTINEZ-VILLALUENGA C,et al.Immunoreactivity reduction of soybean meal by fermentation,effect on amino acid composition and antigenicity of commercial soy products[J].Food Chemistry,2008,108(2):571-581.

[19] REDDY N R,PIERSON M D.Reduction in antinutritional and toxic components in plant foods by fermentation[J].Food Research International,1994,27(3):281-290.

[20] WANG Y,KONG L J,LI C,et al.Effect of replacing fish meal with soybean meal on growth,feed utilization and carcass composition of cuneate drum (Nibeamiichthioides)[J].Aquaculture,2006,261(4):1307-1313.

[21] LIM S J,KIM S S,KO G Y,et al.Fish meal replacement by soybean meal in diets for Tiger puffer,Takifugurubripes[J].Aquaculture,2011,313(1/2/3/4):165-170.

[22] LIN S M,LUO L.Effects of different levels of soybean meal inclusion in replacement for fish meal on growth,digestive enzymes and transaminase activities in practical diets for juvenile tilapia,Oreochromisniloticus×O.Aureus[J].Animal Feed Science and Technology,2011,168(1/2):80-87.

[23] AZARM H M,LEE S M.Effects of partial substitution of dietary fish meal by fermented soybean meal on growth performance,amino acid and biochemical parameters of juvenile black sea breamAcanthopagrusschlegeli[J].Aquaculture Research,2014,45(6):994-1003.

[24] DING Z L,ZHANG Y X,YE J Y,et al.An evaluation of replacing fish meal with fermented soybean meal in the diet ofMacrobrachiumnipponense:growth,nonspecific immunity,and resistance toAeromonashydrophila[J].Fish & Shellfish Immunology,2015,44(1):295-301.

[25] BISWAS A K,KAKU H,JI S C,et al.Use of soybean meal and phytase for partial replacement of fish meal in the diet of red sea bream,Pagrusmajor[J].Aquaculture,2007,267(1/2/3/4):284-291.

[26] DENG J M,MAI K S,AI Q H,et al.Effects of replacing fish meal with soy protein concentrate on feed intake and growth of juvenile Japanese flounder,Paralichthysolivaceus[J].Aquaculture,2006,258(1/2/3/4):503-513.

[27] 楊耐德,符廣才.凡納濱對蝦飼料中發(fā)酵豆粕替代魚粉的研究[J].飼料工業(yè),2008,29(10):24-26.

[28] 劉興旺,艾慶輝,麥康森,等.大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉對大菱鲆攝食生長及體組成的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報,2014,38(1):91-98.

[30] 吳秀峰,薛敏,郭利亞,等.脫酚棉籽粉替代部分魚粉對西伯利亞鱘幼魚生長、體成分及血清生化指標的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2010,22(1):117-124.

[31] SUN H,TANG J W,YAO X H,et al.Partial substitution of fish meal with fermented cottonseed meal in juvenile black sea bream (Acanthopagrusschlegelii) diets[J].Aquaculture,2015,446:30-36.

[32] KIKUCHI K.Partial replacement of fish meal with corn gluten meal in diets for Japanese flounder (Paralichthysolivaceus)[J].Journal of the World Aquaculture Society,1999,30(3):357-363.

[33] ZHOU Q C,MAI K S,TAN B P,et al.Partial replacement of fish meal by soybean meal in diets for juvenile cobia (Rachycentroncanadum)[J].Aquaculture Nutrition,2005,11(3):175-182.

[34] 劉偉,文華,蔣明,等.大豆?jié)饪s蛋白對中華鱘幼魚生長、血脂和體成分的影響研究[J].淡水漁業(yè),2010,40(4):27-32.

[35] LUI M C Y,AGUIAR C L,DE ALENCAR S M,et al.Isoflavones in soy protein isolate and soy protein concentrate[J].Food Science and Technology,2003,23(Suppl.):206-212.

[36] ROBAINA L,LZQUIRERDO M S,MOYANO F J,et al.Soybean and lupin seed meals as protein sources in diets for gilthead seabream (Sparusaurata):nutritional and histological implications[J].Aquaculture,1995,130(2/3):219-233.

[38] 杜震宇.養(yǎng)殖魚類脂肪肝成因及相關(guān)思考[J].水產(chǎn)學(xué)報,2014,38(9):1628-1638.

[39] HU L,YUN B,XUE M,et al.Effects of fish meal quality and fish meal substitution by animal protein blend on growth performance,flesh quality and liver histology of Japanese seabass (Lateolabraxjaponicus)[J].Aquaculture,2013,372/373/374/375:52-61.

*Corresponding author, associate professor, E-mail: wp77319@163.com

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Effects of Replacement of Fish Meal by Fermented Soybean Meal on Growth Performance, Body Composition, Serum Biochemical Indices and Liver Tissue Morphology of Juvenile Large Yellow Croaker (Larimichthyscrocea)

FENG Jian1WANG Ping1,2*HE Jiaojiao1LOU Yudong1DANG Hui1DENG Rong1

(1. Zhejiang Key Laboratory of Marine Aquaculture Facilities and Engineering Technology, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316000, China; 2. School of Marine Sciences, Ningbo University, Ningbo 315211, China)

A 56 d feeding experiment was conducted to investigate the effects of replacement of fish meal by fermented soybean meal (FSM) on growth performance, body composition, serum biochemical indices and liver tissue morphology of juvenile large yellow croaker (Larimichthyscrocea), and to find the suitable replacement proportion of fish meal by FSM in diets of juvenile large yellow croaker. A 40% fish meal basal diet was formulated using fish meal and wheat gluten meal as main protein sources, and fish oil, soybean oil and soybean lecithin as main lipid sources. Six isonitrogenous (protein level was 45%) and isolipidic (lipid level was 10%) experimental diets were formulated by replacing 0 (R0 group, as control group), 15% (R15 group), 30% (R30 group), 45% (R45 group), 60% (R60 group) and 75% (R75 group) fish meal with FSM on the basis of the basal diet, respectively. All diets were supplemented with crystalline amino acids such as lysine and methionine except the control group diet. The feeding experiment was carried out in three sea-cages (1.5 m×1.5 m×2.0 m) of every group and each sea-cage had 60 juvenile large yellow croaker with initial body weight of (10.49±0.03) g. The results showed as follows: no significant difference in survival rate (SR) was found among groups (P>0.05), but with the increase of replacement proportion of fish meal by FSM, the SR showed a downward trend. The specific growth rate (SGR), weight gain rate (WGR) and feed conversion ratio (FCR) in R15, R30 and R45 groups had no significant differences compared with R0 group (P>0.05); to increase the replacement proportion of fish meal by FSM (R60 and R75 groups), the SGR and WGR were significantly decreased (P<0.05), and the FCR was significantly increased (P<0.05). No significant differences in the contents of crude protein, crude lipid and moisture of whole body were found among groups (P>0.05), but whole body ash content has an upward trend with the increase of replacement proportion of fish meal by FSM. Serum biochemical indices in all groups were not significantly different (P>0.05), but serum total cholesterol content had a downward trend and serum alanine amino transferase activity had an upward trend with the increase of replacement proportion of fish meal by FSM. From the liver histological observation, replacement proportion of fish meal by FSM more than 30% caused damage to the liver cells, and the replacement proportion was higher, the symptom was more serious. Comprehensive all measured indicators, we suggest that FSM replacement 30% fish meal in the diet containing 40% fish meal of juvenile large yellow croaker is suitable, but high replacement proportions cause the pathological changes of liver tissue and the decrease of growth rate and SR.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(11)：3493-3502]

juvenile large yellow croaker; fermented soybean meal; growth performance; body composition; serum biochemical indices; liver tissue morphology

2016-05-23

浙江省自然科學(xué)重點基金(Z16E090006)；國家海洋公益性行業(yè)科研專項(201505025)；舟山市海洋專項(2015C41001)；浙江省重中之重學(xué)科開放基金(XKZSC1406)

馮 建(1989—)，男，貴州湄潭人，碩士研究生，研究方向為海洋生物養(yǎng)殖學(xué)。E-mail： 1449142020@qq.com

*通信作者：王 萍，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail： wp77319@163.com

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.11.016

S963

A

1006-267X(2016)11-3493-10