宮頸癌組織中Ki67與Ebp1表達變化及意義

劉蘭，楊莎莎，陳海月,李香丹

(1延邊大學附屬醫(yī)院，吉林延吉133000；2延邊大學醫(yī)學院)

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宮頸癌組織中Ki67與Ebp1表達變化及意義

劉蘭1，楊莎莎2，陳海月1,李香丹2

(1延邊大學附屬醫(yī)院，吉林延吉133000；2延邊大學醫(yī)學院)

目的 觀察細胞增殖抗原Ki67及增強子結(jié)合蛋白1(Ebp1)在宮頸癌組織中的表達變化，并探討其臨床意義。方法 采用免疫組化SP法檢測42例宮頸癌組織及相應癌旁正常宮頸黏膜組織中的Ki67及Ebp1，分析其與臨床病理參數(shù)的關系。結(jié)果 宮頸癌組織中Ki67及Ebp1表達陽性率分別為73.8%和31.0%，均明顯高于癌旁正常宮頸黏膜組織的0、2.4%(P均<0.05)；宮頸癌組織中Ki67、Ebp1表達與患者年齡、腫瘤直徑、家族史無明顯關系(P均>0.05)，與腫瘤的TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P均<0.05)；相關性分析結(jié)果顯示，宮頸癌組織中Ki67與Ebp1表達呈正相關(r=0.113,P<0.05)。結(jié)論 宮頸癌組織中Ki67、Ebp1高表達，二者聯(lián)合檢測有助于宮頸癌轉(zhuǎn)移及預后的判斷。

宮頸癌;細胞增殖抗原；增強子結(jié)合蛋白1

宮頸癌在全球婦女中的發(fā)病率僅次于乳腺癌，近年研究報道其發(fā)生發(fā)展受多種基因的調(diào)控。在各種環(huán)境因素作用下，原癌基因的激活和抑癌基因的失活均可導致細胞發(fā)生癌變[1]。Ki67是一種細胞增殖核抗原，其表達與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移有關。已有文獻報道，宮頸癌組織中Ki67基因高表達[2]。增強子結(jié)合蛋白1(Ebp1)是新發(fā)現(xiàn)的ErbB-3胞內(nèi)結(jié)合蛋白，屬于增殖相關的PA2G4家族中的一員。目前，有關Ki67與Ebp1在宮頸癌組織中表達相關性的研究尚未見報道。2016年3～6月，我們采用免疫組化SP法觀察了Ki67與Ebp1在宮頸癌組織中的表達變化，并分析二者的相關性及其與臨床病理特征的關系?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集延邊大學附屬醫(yī)院病理科2010年2月～2013年2月宮頸癌患者手術切除的腫瘤標本42例，患者年齡34～76歲。腫瘤直徑≤5 cm 20例，腫瘤直徑>5 cm 22例；臨床分期Ⅰ期+Ⅱ期23例，Ⅲ期19例；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例；所有病例經(jīng)術后病理確診為宮頸癌，且患者確診前未經(jīng)任何抗腫瘤治療。術中同時收集相應癌旁正常宮頸組織42例作為對照，術后病理檢查均未出現(xiàn)腫瘤細胞。

1.2 Ki67與Ebp檢測方法 采用免疫組化SP法檢測，兔抗人Ebp1單克隆抗體(Abcam)、鼠抗人Ki67單克隆抗體(即用型) 及SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉生物技術有限公司。標本經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片。脫蠟后水化組織切片，微波爐抗原熱修復，3% H2O2去離子水孵育以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；滴加一抗，4 ℃過夜；PBS沖洗，滴加聚合酶輔助劑，37 ℃孵育20 min；PBS沖洗后滴加辣根酶標記山羊抗小鼠IgG多聚體，37 ℃孵育30 min；應用DAB溶液顯色，自來水沖洗、復染、脫水、透明、封片。PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照。隨機觀察5個高倍視野，Ki67和Ebp陽性細胞呈淡黃色或棕黃色顆粒，根據(jù)陽性細胞所占百分比與染色程度判定結(jié)果。陽性細胞所占百分比<10%為1分，10%～<50%為2分，50%～<75%為3分，≥75%為4分；細胞無染色為0分，淡黃色為1分，中度黃色為2分，棕黃色為3分。兩項相乘0為-，1～3為+，4～6為+ +，7～9為+ + +。+ + +為強陽性，+、+ +為陽性，-為陰性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。陽性率比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki67與Ebp1在宮頸癌及癌旁正常組織中的表達 Ki67陽性染色主要位于細胞核，Ebp1陽性染色主要位于胞質(zhì)或細胞膜。42例宮頸癌組織切片中，Ki67 陰性11例、陽性26例、強陽性5例，陽性率為73.8%；Ebp1陰性29例、陽性11例、強陽性2例，陽性率為31.0%。42例癌旁正常組織切片中，Ki67陰性42例、陽性0例，陽性率為0；Ebp1陰性41例、陽性1例，陽性率為2.4%。宮頸癌組織中Ebp1與Ki67表達陽性率明顯高于癌旁正常組織，且其差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 Ki67和Ebp1表達與宮頸癌臨床病理特征的關系 宮頸癌組織中Ki67、Ebp1表達與患者年齡、腫瘤直徑、家族史無明顯關系(P均>0.05)，與腫瘤的TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P均<0.05)。

表1 Ki67和Ebp1表達與宮頸癌臨床病理特征的關系

2.3 宮頸癌組織中Ki67與Ebp1表達的關系 在31例Ki67陽性表達的宮頸癌組織中，Ebp1陽性表達11例、陰性表達20例；在11例Ki67陰性表達的宮頸癌組織中，Ebp1陽性表達2例、陰性表達9例。經(jīng)Spearman相關性分析結(jié)果顯示，兩者表達呈正相關(r=0.113,P<0.05)。

3 討論

宮頸癌是一種發(fā)生在子宮頸上皮的惡性腫瘤,腫瘤的發(fā)生與細胞的異常增生有關。Ki67是存在于增殖細胞核的標志蛋白，與細胞增殖密切相關，參與細胞周期的調(diào)控。Ki67在有絲分裂期的G1、S、G2期和M期均有合成，但在G0期缺失；由于其半衰期短，可以準確地反映細胞的增殖活性，被認為是較理想的檢測細胞增殖活性的抗體[3],對惡性腫瘤診斷和預測腫瘤的預后具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中Ki67表達陽性率為73.8%，明顯高于癌旁正常組織，而且腫瘤分期越高、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率越高，患者預后也越差，與其他研究[4～6]報道結(jié)論一致。

Ebp1是新發(fā)現(xiàn)的ErbB-3胞內(nèi)結(jié)合蛋白，屬于增殖相關的PA2G4家族中的一員。在外界刺激作用下，Ebp1與ErbB-3分離并遷移至核內(nèi)，從而抑制腫瘤細胞的生長增殖[7]。本研究結(jié)果顯示，42例宮頸癌組織中Ebp1表達陽性率為31.0%，明顯高于癌旁正常組織的2.4%，而且其表達與腫瘤的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關，與之前研究[8,9]結(jié)果一致。但部分文獻報道，Ebp1在一些腫瘤組織中表達水平下調(diào)，而且Ebp1的表達情況與腫瘤的分期及轉(zhuǎn)移呈負相關[10～13]。這可能與Ebp1的兩個不同片段p42、p48有關，其對細胞增殖起不同效應。p48主要位于胞質(zhì)及胞核內(nèi)，過表達促進細胞增殖；p42主要位于胞質(zhì)內(nèi)，過表達抑制細胞增殖[14]。組織類型不同，兩個片段的表達量也不同，從而影響腫瘤細胞的生長與分化。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展受多種基因的調(diào)控。有文獻報道，在子宮內(nèi)膜癌組織中ErbB-2與Ki67表達呈正相關，ErbB-2可通過過度表達，降低機體對細胞增殖的負調(diào)節(jié)作用，使Ki67表達增強，促使細胞增殖異常，最終導致惡變[15]。但是，目前有關Ki67與Ebp1在宮頸癌組織中表達相關性研究尚未見報道。本研究結(jié)果顯示，Ki67與Ebp1在宮頸癌組織中表達呈正相關。由此可見，在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移過程中Ki67與Ebp1同時發(fā)揮重要作用，二者協(xié)同作用促進宮頸癌的浸潤和轉(zhuǎn)移。因此，兩者的聯(lián)合檢測有助于宮頸癌惡性程度的判斷，可為宮頸癌的預防、診斷及治療提供更多的理論依據(jù)。

[1] Yao J, Zhao X, Ding X. Systematic profiling of chemotherapeutic drug response to EGFR gatekeeper mutation in non-small cell lungcancer[J]. Comput Biol Chem, 2016,64:126-133.

[2] 陳玉梅,趙軍偉,劉繼敏,等.p53,Ki67在宮頸癌組織中的表達及意義[J].光明中醫(yī)， 2009, 24(1):109-110.

[3] 文艷紅,張永建,徐洪.消化道類癌43 例Ki-67 表達與腫瘤分期相關性研究[J].交通醫(yī)學，2013,27(2):131-133.

[4] 雷蕾,葉斌,王西川. p16、p53 和Ki67 在宮頸癌中的表達及其臨床意義[J].實用醫(yī)院臨床雜志,2014,11(40)：123-125.

[5] 王曉英, 黃永宏, 張宏偉,等. Ki67、p53、survivin在宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸炎中的表達及意義[J].山東醫(yī)藥,2010,50(25)：88-89.

[6] 常麗琴,吳素慧,李超,等.Ki67、survivin在早期宮須癌中的表達與預后相關性分析[J].中國醫(yī)藥科學,2013,3(4):20-22.

[7] Protrka Z, Arsenijevic S, Arsenijevic P, et al. Prognostic significance of co-overexpression of bcl-2 and c-erbB-2/neu in uterine cervix carcinomas and premalignant lesions[J]. Med Glas(Zenica), 2012,9(2):248-255.

[8] 李香丹,劉蘭.宮頸癌組織中Ebp1蛋白的表達及意義[J].山東醫(yī)藥，2013,53(8)：44-45.

[9] Liu L, Li XD, Chen HY, et al. Significance of Ebp1 and p53 protein expression in cervical cancer[J].Genet Mol Res, 2015,14(4):11860-11866.

[10] Zhang Y, Ali TZ, Zhou H. ErbB-3 binding protein 1 represses metastasis promoting gene anterior gradient protein 2 in prostate cancer[J]. Cancer Res, 2010,70(1):240-248.

[11] 崔玲玲,朱明宇,陳幕華,等.Ebp1蛋白在賁門癌組織中的表達及臨床意義[J].中國實驗診斷學,2010,14(3)：419-422.

[12] 王慶,余優(yōu)成.Ebp1基因?qū)ι圜[狀細胞癌Tca8113細胞增殖的抑制作用[J].復旦學報(醫(yī)學版),2009,36(2)：201-205.

[13] Yu Y, Chen W, Zhang Y. Suppression of salivary adenoid cystic carcinoma growth and metastasis by ErbB-3 binding protein Ebp1 gene transfer[J]. Int J Cancer,2007,120(9):1909-1913.

[14] 孫鳳丹,許東元,劉蘭,等.肝細胞癌組織中Ebp1蛋白的表達變化及意義[J].山東醫(yī)藥,2012,52(2)：34-35.

[15] 丁堪鑠,盧麗娜,余莉萍,等.C-erbB-2、p53、Ki-67、ER、PR在子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床相關性[J].實用醫(yī)學雜志,2015,31(24):4069-4071.

國家自然科學基金資助項目(31560324，81560400)。

李香丹(E-mail: lixiangdan@ybu.edu.cn)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.38.028

R737.33

B

1002-266X(2016)38-0078-03

2016-08-12)