林亞軍，季建莉，趙紅瓊，江 萍，帕力達(dá)亞森，夏利寧*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉 831100)

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新疆地區(qū)牛和新引進(jìn)牛大腸埃希菌耐藥性比較

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉 831100)

為了解新疆地區(qū)牛和新引進(jìn)牛大腸埃希菌對(duì)臨床常用抗菌藥物的耐藥差異，采用微量肉湯稀釋法對(duì)分離的大腸埃希菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè)，通過(guò)卡方檢驗(yàn)比較新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛大腸埃希菌耐藥性的差異。結(jié)果顯示，新疆地區(qū)牛大腸埃希菌和引進(jìn)牛大腸埃希菌除對(duì)氨芐西林(地區(qū)牛為11.90%、引進(jìn)牛為6.25%)和阿莫西林(地區(qū)牛為5.55%、引進(jìn)牛為5.21%)有較高的耐藥率外，對(duì)其他臨床常用抗菌藥物的耐藥率均較低，但引進(jìn)牛對(duì)氟苯尼考、慶大霉素和安普霉素的中度敏感率分別為82.81%、44.79%和33.33%。經(jīng)卡方檢驗(yàn)比較，新疆引進(jìn)牛對(duì)氟苯尼考、慶大霉素、安普霉素、阿莫西林和氨芐西林的中度敏感率顯著高于新疆地區(qū)牛(P<0.05)。雖然被檢牛源大腸埃希菌對(duì)常用抗菌藥物耐藥較低，但引進(jìn)牛大腸埃希菌高中度敏感率會(huì)導(dǎo)致其耐藥率短期內(nèi)迅速增高，因此須在臨床治療引進(jìn)牛細(xì)菌性疾病中避免使用中度敏感率高的抗菌藥物。

地區(qū)牛；引進(jìn)牛；大腸埃希菌；耐藥率；比較

致病性大腸埃希菌為人醫(yī)和獸醫(yī)臨床感染中最常見(jiàn)的病原菌之一。從發(fā)病情況看，大腸埃希菌病發(fā)病率在細(xì)菌病引發(fā)的疾病中居世界首位[1]?？咕幬镆恢弊鳛橹委煷竽c埃希菌病的首選藥物，但隨著獸醫(yī)臨床上的廣泛應(yīng)用，使大腸埃希菌耐藥菌株增多，耐藥譜擴(kuò)大，同時(shí)加劇抗菌藥物在畜禽體內(nèi)的殘留，給我國(guó)畜牧業(yè)的持續(xù)發(fā)展和人類的身體健康帶來(lái)潛在危害[2]。目前，許多研究者對(duì)所在地牛源大腸埃希菌對(duì)臨床常用抗菌藥物的耐藥情況進(jìn)行檢測(cè)[3-6]，但對(duì)新疆地區(qū)牛與引進(jìn)牛大腸埃希菌的耐藥情況卻鮮見(jiàn)報(bào)道，耐藥情況不明。本試驗(yàn)對(duì)從新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛糞樣中分離的大腸埃希菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，并比較新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛大腸埃希菌對(duì)抗菌藥物的耐藥率，其耐藥結(jié)果可為臨床合理使用抗菌藥物提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 2015年1月在新疆阿克蘇某規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)和新疆伊犁某規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行樣品采集，采集對(duì)象為新疆地區(qū)牛，通過(guò)肛拭子在直腸采集新鮮糞樣共180份。

2015年6月在新疆石河子某規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行樣品采集，采集對(duì)象為引進(jìn)牛(新西蘭牛和澳洲牛)，通過(guò)肛拭子在直腸采集新鮮糞樣共192份。

1.1.2 菌株及培養(yǎng)基 大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌(ATCC25922)購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司；Mueller-Hinton(MH)培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、普通肉湯和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基均購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限公司。

1.1.3 藥品 β-內(nèi)酰胺類：阿莫西林(含量95.0%)(amoxicillin，AML)、頭孢噻呋(含量89.6%)(ceftiofur，CEF)和氨芐西林(含量99.4%)(ampicillin，AMP)；喹諾酮類：環(huán)丙沙星(含量93.9%)(ciprofloxacin，CIP)、諾氟沙星(含量99.9%)(norfloxacin，NOF)和恩諾沙星(含量99.5%)(enrofloxacin，ENR)；氨基糖苷類：安普霉素(含量55.9%)(apramycin，APR)、阿米卡星(含量65.5%)(amikacin，AMK)和慶大霉素(含量63.3%)(gentamicin，GEN)；酰胺醇類：氟苯尼考(含量98.0%)(florfenicol，F(xiàn)LR)。上述藥品均為標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所。

1.2 方法

1.2.1 大腸埃希菌分離鑒定方法 用滅菌肛拭子輕插入牛的肛門內(nèi)，將沾有糞樣的肛拭子放入內(nèi)含1 mL滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯的2 mL EP管中，恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)37 ℃ 培養(yǎng)12 h，用接種環(huán)將樣液在麥康凱瓊脂平板上劃線，置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)37 ℃ 培養(yǎng)18 h～24 h 后，平板上生長(zhǎng)出一致的粉紅色菌落，挑取單菌落，經(jīng)革蘭染色及生化鑒定后，確定為大腸埃希菌后保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 大腸埃希菌藥敏試驗(yàn)及其判定方法 按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法進(jìn)行，分別對(duì)地區(qū)牛和引進(jìn)牛大腸埃希菌進(jìn)行上述10種藥物最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定，判斷結(jié)果分別以敏感、中介和耐藥3種形式記錄結(jié)果[7-8]。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析 耐藥率差異性統(tǒng)計(jì)采用SPSS 20軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 大腸埃希菌的分離鑒定

對(duì)新疆地區(qū)牛共采集的180份糞樣經(jīng)細(xì)菌的分離培養(yǎng)共分離得到126株大腸埃希菌，分離率為70.0%。對(duì)新疆引進(jìn)牛共采集的192份糞樣經(jīng)細(xì)菌的分離培養(yǎng)共分離得到192株大腸埃希菌，分離率為100%。

2.2 新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛大腸埃希菌耐藥情況及其差異性比較

由表1可知，新疆地區(qū)牛大腸埃希菌對(duì)氨芐西林(11.90%，15/126)、阿莫西林(5.55%，7/126)、環(huán)丙沙星(2.38%，3/126)和諾氟沙星(1.59%，2/126)耐藥。同時(shí)，對(duì)阿莫西林(12.70%，16/126)、氨芐西林(10.32%，13/126)和慶大霉素(8.73%，11/126)有相對(duì)較高的中度敏感率。新疆引進(jìn)牛大腸埃希菌對(duì)氨芐西林(6.25 %，12/192)、阿莫西林(5.21%，10/192)、頭孢噻呋(0.52%，1/192)、慶大霉素(0.52%，1/192)、恩諾沙星(0.52%，1/192)、環(huán)丙沙星(0.52%，1/192)和氟苯尼考(0.52%，1/192)耐藥。引進(jìn)牛對(duì)氟苯尼考(82.81%，159/192)、慶大霉素(44.79%，86/192)、安普霉素(33.33%，64/192)和阿莫西林(28.65%，55/192)有較高的中度敏感率。通過(guò)卡方檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，新疆地區(qū)牛對(duì)氨芐西林的耐藥率顯著高于引進(jìn)牛(P<0.05)，新疆引進(jìn)牛對(duì)氟苯尼考、慶大霉素、安普霉素、阿莫西林和氨芐西林的中度敏感率顯著高于新疆地區(qū)牛(P<0.05)。

表1 新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛大腸埃希菌對(duì)被檢藥物的耐藥性比較

Table 1 Comparison of resistance rate ofE.colifrom local cattle and imported cattle of Xinjiang to detected drugs

藥物Drugs地區(qū)牛大腸埃希菌(n=126)E.colifromlocalcattle敏感率/%Sensitiverate中度敏感率/%Mediationrate耐藥率/%Resistancerate引進(jìn)牛大腸埃希菌(n=192)E.colifromimportedcattle敏感率/%Sensitiverate中度敏感率/%Mediationrate耐藥率/%Resistancerate環(huán)丙沙星Ciprofloxacin95.242.382.3898.950.520.52諾氟沙星Norfloxacin97.620.791.5999.480.520恩諾沙星Enrofloxacin93.656.35096.882.60.52安普霉素Apramycin92.06A7.94B066.67a33.33b0阿米卡星Amikacin1000098.441.560慶大霉素Gentamicin91.27A8.73B054.69a44.79b0.52阿莫西林Amoxicillin81.75A12.7B5.5566.15a28.65b5.21頭孢噻呋Ceftiofur98.411.59094.275.210.52氨芐西林Ampicillin77.7810.32B11.90C7518.75b6.25c氟苯尼考Florfenicol100A0B016.67a82.81b0.52

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)大小寫字母(敏感率用A和a，中度敏感率用B和b，耐藥率用C和c)表示差異顯著(P<0.05)。

Note:Different lowerease letters in the same row mean significant difference atP<0.05 level (Sensitivity rates were A and a, intermediate rates were B and b, and the resistance rates were C and c).

2.3 新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛大腸埃希菌多藥耐藥比較

新疆地區(qū)牛多藥耐藥在0～4耐均有分布，以0耐(87.3%，110/126)為主導(dǎo)，其次為1耐(6.35%，8/126)、2耐(5.56%，7/126)和4耐(0.79%，1/126),其他幾耐均為0 %；新疆引進(jìn)牛0～3耐均有分布，以0耐(92.71%，178/192)為主導(dǎo)，其次1耐(2.08%，4/192)、2耐(3.65%，7/192)和3耐(1.56%，3/192)，4～9耐均為0 %。新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛比較，其多藥耐藥情況相似，均以0耐為主。

2.4 新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛大腸埃希菌的耐藥譜型

新疆地區(qū)牛大腸埃希菌1耐的主要耐藥譜型為AMP(6.35%，8/126)；2耐的主要耐藥譜型為AMP/AML(5.56%，7/126)；4耐的耐藥譜型為AMP/AML/NOR/CIP(0.79%，1/126)。新疆引進(jìn)牛大腸埃希菌1耐的主要耐藥譜型為AMP(2.08%，4/192)；2耐的主要耐藥譜型為AMP/AML(3.65%，7/192)；3耐的耐藥譜型為AMP/AML/EFT(1.56%，3/192)。

3 討論

3.1 新疆地區(qū)牛與引進(jìn)牛大腸埃希菌耐藥情況分析

新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛大腸埃希菌對(duì)被檢藥物有不同程度的耐藥，但是耐藥情況都較輕。新疆地區(qū)牛對(duì)氨芐西林的耐藥率最高也僅為11.9%，地區(qū)牛對(duì)被檢藥物都較為敏感，造成這一現(xiàn)象的原因可能有：養(yǎng)殖場(chǎng)規(guī)模較小，發(fā)病率低，較少使用上述被檢藥物。新疆引進(jìn)牛對(duì)部分被檢藥物有較高的中度敏感率，如氟苯尼考的中度敏感率高達(dá)82.81%，顯著高于新疆地區(qū)牛(0%)。氟苯尼考注射液于1996年通過(guò)美國(guó)FDA(Food and Drug Administration)注冊(cè)登記，被批準(zhǔn)用于牛呼吸系統(tǒng)疾病[10]，此后，在許多國(guó)家養(yǎng)殖場(chǎng)將氟苯尼考作為抗菌藥物廣泛應(yīng)用于治療牛的細(xì)菌性疾病。對(duì)新疆養(yǎng)牛場(chǎng)的用藥調(diào)研中發(fā)現(xiàn)，鮮見(jiàn)氟苯尼考用于治療牛細(xì)菌性疾病，這可能是新疆地區(qū)牛大腸埃希菌對(duì)氟苯尼考中度敏感率低的主要原因。

3.2 與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)牛源大腸埃希菌耐藥情況比較

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)也有很多關(guān)于牛源大腸埃希菌耐藥性報(bào)道，姚瓊芬等[4]在豬源和牛源大腸埃希菌耐藥性比較試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)牛源大腸埃希菌對(duì)氨芐西林耐藥率為 24.0%、慶大霉素 10.2%、頭孢噻呋 5.7%、阿米卡星 4.5%、環(huán)丙沙星 10.3%和恩諾沙星 10.2%，該結(jié)果均高于本試驗(yàn)中新疆地區(qū)牛和引進(jìn)牛的耐藥結(jié)果，但與本研究相近之處在于對(duì)氨芐西林的耐藥率都是最高，耐藥情況都不是很嚴(yán)重。且該試驗(yàn)中氟苯尼考(75.0%)有較高的中度敏感率，該結(jié)果遠(yuǎn)高于本試驗(yàn)中新疆地區(qū)牛對(duì)氟苯尼考(0%)的中度敏感率，但低于新疆引進(jìn)牛對(duì)氟苯尼考(82.81%)的中度敏感率；余婷等[11]對(duì)寧夏牛源大腸埃希菌進(jìn)行耐藥性監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)對(duì)慶大霉素、恩諾沙星、阿米卡星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星的耐藥率分別為 40.9%、19.7%、15.1%、7.6%、6.1%，該結(jié)果均高于本試驗(yàn)。但其對(duì)慶大霉素(12.12%)、氨芐西林(3.03%)和氟苯尼考(0%)的中度敏感率均低于本試驗(yàn)中新疆引進(jìn)牛的試驗(yàn)結(jié)果；余致山等[12]對(duì)內(nèi)蒙古牛源大腸埃希菌耐藥進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示環(huán)丙沙星的耐藥率為 13.8%、諾氟沙星 7.58%、慶大霉素 40.91%、恩諾沙星 19.7%、阿莫西林/克拉維酸 31.04%、氨芐西林75.86%和阿米卡星 17.24%，均高于本試驗(yàn)結(jié)果；張陸等[13]對(duì)腹瀉犢牛進(jìn)行耐藥檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)頭孢噻呋耐藥率為 19.2%、諾氟沙星 11.5%、環(huán)丙沙星 11.5%和恩諾沙星 7.7%，該結(jié)果均高于本試驗(yàn)；南海辰等[14]對(duì)塔城牛源大腸埃希菌進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示氨芐西林 60.0%、阿莫西林/克拉維酸 50.0%、恩諾沙星 40.0%、慶大霉素 40.0%、頭孢噻呋 35.0%、阿米卡星 25.0%、諾氟沙星 10.0% 和環(huán)丙沙星 10.0%的耐藥率均高于本試驗(yàn)；對(duì)阿莫西林/克拉維酸14.5%、氨芐西林 18.2%、頭孢噻呋1.8%和恩諾沙星1.8%的中度敏感率均高于本試驗(yàn)中新疆地區(qū)牛，但均低于本試驗(yàn)中新疆引進(jìn)牛。從以上比較中可以看出，牛源大腸埃希菌耐藥率普遍較低，對(duì)各種被檢抗菌藥物的耐藥率各有不同，但新疆引進(jìn)牛有耐藥情況加重的風(fēng)險(xiǎn)，出現(xiàn)這種差異的原因可能是，不同地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)用藥方案根據(jù)各地區(qū)的實(shí)際發(fā)病情況而定，導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)各種抗菌藥物的耐藥率不同。

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Comparisons of Antimicrobial Resistance ofE.coliof Local Cattle and Imported Cattle in Xinjiang

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,XinjiangUrumqi,830052,China; 2.XinjiangAgriculturalVocationalTechnicalCollege,Changji,Xinjiang,831100,China)

In order to compare the antimicrobial resistance ofE.colifrom local cattle and imported cattle to clinical antimicrobial drugs,the broth dilution method was used to detect resistance ofE.colito clinical antimicrobial drugs, and by chi square test to compare the difference of resistant rate ofE.colifrom local cattle and imported cattle.The results showed thatE.colifrom local cattle and imported cattle in Xinjiang had higher resistant rate to ampicillin (local cattle was 11.90%, imported cattle was 6.25%) and amoxicillin (local cattle was 5.55%, imported cattle was 5.21%), and had low resistant rate to other detected drugs.But intermediary rates ofE.colifrom imported cattle were higher to florfenicol (82.81%), gentamicin (44.79%) and apramycin (33.33%).The chi-square test results showed that resistant rate ofE.colifrom imported cattle was significantly higher than that of local cattle in Xinjiang to florfenicol, gentamicin, apramycin, amoxicillin and ampicillin (P<0.05).Although resistant rate ofE.colifrom cattle in Xinjiang is low to commonly used antimicrobial, the high intermediary rate ofE.colifrom imported cattle made resistance rates increasing rapidly, so we should avoid to use the drugs with high intermediary rate to imported cattle in the clinical treatment.

local cattle; imported cattle;E.coli; drug resistance rate; comparison

2016-03-07

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31260614)

林亞軍(1992-)，女，河北邢臺(tái)人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)藥理與毒理學(xué)研究。*通訊作者

S852.612

B

1007-5038(2016)11-0126-04