大孔吸附樹脂分離純化紫穗槐葉類黃酮的研究

王競紅，王 非，楊成武，劉素欣，張秀梅，多 多，陳 艾

（東北林業(yè)大學(xué) 園林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040）

大孔吸附樹脂分離純化紫穗槐葉類黃酮的研究

王競紅，王 非，楊成武，劉素欣，張秀梅，多 多，陳 艾

（東北林業(yè)大學(xué) 園林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040）

為了篩選最優(yōu)大孔樹脂，研究了大孔樹脂分離純化紫穗槐葉類黃酮的最佳工藝條件。以總純化率為指標，在靜態(tài)吸附解吸下，篩選最佳大孔樹脂和溶解黃酮粗提物的乙醇濃度；在動態(tài)吸附解吸下，以單因素為基礎(chǔ)，采用正交實驗設(shè)計方法，研究上樣質(zhì)量濃度、上樣流速、上樣量、上樣pH值、洗脫乙醇體積分數(shù)、洗脫流速對總純化率的影響，并找到最佳工藝條件。結(jié)果表明： 用10%乙醇溶解黃酮粗提物，大孔樹脂D101分離純化樣品液，最佳工藝為上樣質(zhì)量濃度1.5 mg/mL、上樣流速3 mL/min、上樣量100 mL、上樣pH值4、洗脫乙醇體積分數(shù)70%、洗脫流速3 mL/min，在此工藝條件下，能科學(xué)合理地分離純化類黃酮，所得類黃酮含量為56.2%，較純化前18.9% 提高了2.9倍。

紫穗槐；紫穗槐葉；類黃酮；大孔吸附樹脂；分離純化

紫穗槐Amorpha fruticosa 為豆科紫穗槐屬的多年生落葉灌木[1]。生長快,萌蘗能力強，耐干旱，耐瘠薄，耐鹽堿，耐水濕，根系發(fā)達,具有很強的防風(fēng)固沙、保持水土、改良土壤等生態(tài)作用[2-3]，被譽為保持水土流失、防風(fēng)固沙的“活鋼筋”。黃酮類化合物是一類重要的天然有機化合物，是植物在長期自然選擇過程中產(chǎn)生的一類次生代謝產(chǎn)物[4]，廣泛存在于天然產(chǎn)物中[5]，于蕓香科、唇形科、豆科、傘形科、銀杏科與菊科植物中含量最高[6]，包括黃酮、異黃酮、黃酮醇、黃烷酮等，能增強植物的保護性，抵御外來生物和非生物的侵害，并能刺激植物的生長[7-8]。園林植物葉片中總黃酮、多酚物質(zhì)的存在及其含量對植物抗病蟲害的影響在特定條件下發(fā)揮較顯著的作用[9]。類黃酮具有多種生理活性，人體攝入后可產(chǎn)生包括抗衰老、抗病毒、抗炎鎮(zhèn)痛、抗癌抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松、血管舒張等功能[10]。在食品中，類黃酮的抗氧化性除了應(yīng)用于功能性食品添加劑外，還應(yīng)用于功能食品[11]。因此，類黃酮在環(huán)境保護、藥物和食品領(lǐng)域的開發(fā)方面具有很好的社會效益和經(jīng)濟效益前景。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，類黃酮分離純化有很多方法，如硅膠柱色譜法[12]、高速逆流色譜[13]、聚酰胺層析法[14]等。大孔樹脂作為新興純化技術(shù)，具有吸附速度快、吸附容量大、選擇性良好、再生簡便等優(yōu)點[15-17]，近年來，在類黃酮的分離純化中被廣泛應(yīng)用[18-19]。本文中主要研究純化紫穗槐葉中類黃酮的大孔樹脂型號以及純化類黃酮的最佳工藝條件，為以后分離鑒定紫穗槐葉中類黃酮單體奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

紫穗槐葉，東北林業(yè)大學(xué)林場苗圃采取，經(jīng)東北林業(yè)大學(xué)園林學(xué)院周蘊薇教授鑒定；蘆丁標準品，純度≥99%，上海金穗生物科技公司；無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為分析純；大孔樹脂AB-8、D101、S-8、X-5、D4020，天津市光復(fù)精細化工研究所。

1.2 儀 器

紫外分光光度計，珀金埃爾默儀器（上海）有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；循環(huán)真空泵，上海亞榮生化儀器廠；低溫高速臺式離心機，德國Eppendorf公司；電子天平，北京賽多利斯儀器有限公司；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海森信儀器有限公司。

1.3 標準曲線的制定

精確稱取8 mg標準品蘆丁，超聲溶于80 mL體積分數(shù)為60%乙醇中，制備濃度100 μg/mL的標準液。分別吸取 1.0、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 mL標準液于10 mL容量瓶中，不足5 mL用60%乙醇加至5 mL。加入5% NaNO20.3 mL，靜置6 min；加入10%Al(NO3)30.3 mL，靜置6 min；加入4%NaOH 4.0 mL，靜置15 min，最后用蒸餾水定容至10 mL。在505 nm處測吸光度。得標準曲線A505nm=0.0114 7ρ-0.005 7，R2=0.998 616。

1.4 類黃酮樣品液的制備

稱取1 g紫穗槐葉粉末→微波提取→70℃水浴→合并濾液→旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)→離心→蒸發(fā)至膏狀→冷凍干燥。將冷凍干燥的干粉溶于一定濃度的乙醇溶液中，制備成樣品液。

1.5 大孔樹脂的預(yù)處理

稱取一定量的樹脂，在95%乙醇中浸泡24 h，使其充分膨脹，用蒸餾水洗至澄清，無白色溶液流出。再用5%HCl浸泡24 h，除去樹脂中堿類化合物，用蒸餾水洗至中性。然后用5% NaOH浸泡24 h，除去樹脂中酸類化合物，蒸餾水洗至中性。浸泡在蒸餾水中待用。

1.6 靜態(tài)優(yōu)化試驗

分別稱取3 g處理后的大孔樹脂：AB-8、D101、S-8、X-5、D4020，于100 mL錐形瓶中，加40 mL樣品液。在室溫下，以150 r/min轉(zhuǎn)速搖動吸附12 h，吸取上清液，按照1.3方法測定吸光度。將吸附后樹脂抽濾，倒入100 mL錐形瓶中，加入40 mL70%乙醇溶液。室溫下，以150 r/min轉(zhuǎn)速解吸12 h，吸取上清液，測定吸光度。通過靜態(tài)吸附解吸，以總純化率為指標，篩選最優(yōu)樹脂。

式中：C1為吸附前樣品液的質(zhì)量濃度（mg/mL）；C2為吸附后流出液的質(zhì)量濃度（mg/mL）；C3為洗脫液的質(zhì)量濃度（mg/mL）；X1、X2、X分別為吸附率、解吸率和總純化率。

1.6.1 溶解粗提物乙醇體積分數(shù)的選擇

分別用蒸餾水、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇溶解粗提物干粉，按照1.3方法測定吸附液和解析液的吸光度，計算吸附率、解吸率和總純化率。

1.6.2 最優(yōu)大孔樹脂的選擇

AB-8、D101、S-8、X-5、D4020中總純化率最高，為最優(yōu)樹脂，進行純化試驗。5種大孔樹脂的參數(shù)見表1。

1.7 動態(tài)優(yōu)化試驗

1.7.1 流出液和洗脫液動態(tài)曲線

在上樣流速3 mL/min、上樣濃度1 mg/mL、上樣量100 mL、上樣pH值7、洗脫流速3 mL/min、洗脫乙醇70%的固定條件下：當(dāng)樣液吸附時，每3 min收集一管吸附后的流出液，直至流出液的吸光度接近于0；當(dāng)用乙醇洗脫時，每3 min收集一管洗脫液，直至洗脫液的吸光度接近于0。

表1 5種大孔樹脂的參數(shù)Table 1 Parameters of five macroporous resins

1.7.2 上樣因素和洗脫因素對總純化率的影響

在1.7.1中的固定條件下，分別考察上樣濃度（mg/mL）、上樣量（mL）、上樣pH值、上樣流速（mL/min）、洗脫流速（mL/min）、洗脫乙醇濃度（%）這6個因素對總純化率的影響。

1.8 正交試驗

在單因素的基礎(chǔ)上，為了獲取最佳工藝條件，篩選總純化率變化較大的因素作為試驗因素進行正交試驗，并應(yīng)用SPSS 19.0軟件進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 靜態(tài)優(yōu)化實驗結(jié)果

2.1.1 溶解粗提物乙醇濃度的選擇

由圖1可知，隨著乙醇體積分數(shù)的增大，S-8的吸附率變化很小，而且其吸附率都在93%以上，這可能是極性S-8大孔樹脂與類黃酮極性基團形成較強的范德華力。其余4種樹脂隨著乙醇濃度的增大而減小，這可能是乙醇溶液的極性不斷增大，非極性和弱極性的大孔樹脂不能把類黃酮物質(zhì)從極性較大的乙醇溶液中分離出來。

由圖1可知，用蒸餾水溶解的吸附率最高，但經(jīng)過一段時間的吸附后，溶液變得渾濁，故選取10%乙醇溶解類黃酮粗提物。

圖1 不同體積分數(shù)乙醇溶解粗提物的吸附率Fig.1 Adsorption rates of different ethanol concentration to dissolve crude extracts

2.1.2 最優(yōu)大孔樹脂的選擇

不同型號大孔樹脂的吸附率、解吸率和總純化率如圖2～4所示。吸附能力方面，S-8＞X-5＞D101＞AB-8＞D4020（見圖2）；解吸能力方面，D101＞D4020＞X-5＞AB-8＞S-8（見圖3）；總純化率方面，D101＞X-5＞D4020＞AB-8＞S-8（見圖4）。由表1可知，S-8具有強極性，所以在吸附類黃酮時吸附率達到96%。也正是由于S-8與類黃酮形成了較強的極性鍵，乙醇溶液不能把類黃酮從大孔樹脂上洗脫下來，總純化率最低。因此，綜合吸附率和解析率，以總純化率高者為最優(yōu)，最后確定D101為最優(yōu)大孔樹脂。

圖2 不同類型大孔樹脂的吸附率Fig.2 Adsorption rate change of different types of macroporous resins

圖3 不同類型大孔樹脂的解吸率Fig.3 Desorption rate change of different types of macroporous resins

2.2 動態(tài)優(yōu)化實驗結(jié)果

2.2.1 流出液與洗脫液動態(tài)曲線

通過動態(tài)吸附與解吸曲線，可以確定收集流出液和洗脫液的大致時間，既能節(jié)約資源，又能減少試驗的誤差。

由圖5可知，在上樣時間12 min以前，流出液的吸光度小于0.005，可以舍棄，第12 min起開始收集流出液 ；在上樣時間為39 min時，吸光度開始小于0.005且趨于0，故在第39 min起，停止收集流出液。

圖4 不同大孔樹脂的總純化率Fig.4 Total puri fi cation rate change of different types of macroporous resins

圖5 流出液動態(tài)曲線Fig .5 Dynamic curve of ef fl uent liquid

由圖6可知，在洗脫時間9 min以前，洗脫液吸光度很小，可以舍棄，第9 min起開始收集洗脫液；在洗脫時間為42 min時，吸光度開始趨于為0，因此可以在第45 min起，停止收集洗脫液。

圖6 洗脫液動態(tài)曲線Fig.6 Dynamic curve of eluent

2.2.2 上樣質(zhì)量濃度對總純化率的影響

在1.7.1中的固定條件下，分別考察上樣質(zhì)量濃度（mg/mL ）0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 對總純化率的影響。

由圖7可知，上樣質(zhì)量濃度低時總純化率也低，當(dāng)質(zhì)量濃度為1.5 mg/mL時達到最大，質(zhì)量濃度繼續(xù)增大，總純化率會相應(yīng)地降低。這可能由于質(zhì)量濃度低，類黃酮物質(zhì)能充分進入到大孔樹脂內(nèi)部，在洗脫時乙醇溶液不能完全把類黃酮從樹脂深處洗脫出來；而隨著質(zhì)量濃度增大，大孔樹脂在短時間內(nèi)不能充分吸附即流出，吸附率降低，導(dǎo)致總純化率下降。因此，從節(jié)約材料來看，應(yīng)選取1.5 mg/mL作為最優(yōu)條件。

圖7 上樣質(zhì)量濃度對總純化率的影響Fig.7 Effect of sampling in fl ution concentration on total puri fi cation rate

2.2.3 上樣流速對總純化率的影響

在固定條件下，分別考察上樣流速（mL/min）1、2、3、4、5對總純化率的影響。由圖8可知，在上樣流速較慢時，總純化率較低，可能是流速慢，樣液中非類黃酮物質(zhì)與大孔樹脂吸附時間長，產(chǎn)生微弱的范德華力，洗脫時一起被洗出來，使總純化率降低。當(dāng)流速增大時，樣液吸附時間短，吸附率低，導(dǎo)致總純化率低。故選取3 mL/min作為最優(yōu)條件。

圖8 上樣流速對總純化率的影響Fig.8 Effect of sampling fl ow rate to the total puri fi cation rate

2.2.4 上樣量對總純化率的影響

在固定條件下，分別考察上樣量（mL）50、100、150、200、250對總純化率的影響。

由圖9可知，在上樣量小于100 mL時，總純化率較低，這可能是上樣量少，大孔樹脂能夠把類黃酮充分吸附至孔隙內(nèi)部，在洗脫時，不能完全地洗脫下來，解吸率低，導(dǎo)致總純化率降低。當(dāng)上樣量增大時，樣品液中類黃酮物質(zhì)總量變多，使大孔樹脂不能充分吸附，吸附率下降，總純化率降低。在上樣量為100 mL和150 mL時，總純化率相近，從節(jié)約資源角度來看，選100 mL作為最佳上樣量。

圖9 上樣量對總純化率的影響Fig.9 Effect of sampling volume to total puri fi cation rate

2.2.5 上樣pH值對總純化率的影響

在固定條件下，分別考察上樣pH值3、4、5、6、7、8、9對總純化率的影響。

由圖10可知，在上樣液偏酸或偏堿時，總純化率低，在pH值為5時，總純化率最高。這可能是由于類黃酮為多羥基酚類物質(zhì)，偏弱酸性，故在弱酸性溶液中較易吸附。而在強酸下，類黃酮易生成佯鹽；在偏堿下，易破壞類黃酮的結(jié)構(gòu)，都不利于類黃酮的吸附。

2.2.6 洗脫乙醇體積分數(shù)對總純化率的影響

在固定條件下，分別考察洗脫乙醇體積分數(shù)（%）40、50、60、70、80、90對總純化率的影響。

圖10 上樣pH值對總純化率的影響Fig.10 Effect of sampling pH to total puri fi cation rate

由圖11可知，用低體積分數(shù)乙醇洗脫時，總純化率很低，隨著乙醇體積分數(shù)的增加，總純化率隨之變大。在乙醇體積分數(shù)為70%時，總純化率達到最大值。這是由于相似相溶的原理，70%乙醇的極性與類黃酮的極性相近，在洗脫時能最大限度地把類黃酮物質(zhì)從樹脂上解吸下來。在用90%乙醇洗脫時，洗脫液渾濁，且無峰值，可能是把其他雜質(zhì)同時洗脫下來，造成污染。

圖11 洗脫乙醇濃度對總純化率的影響Fig.11 Effect of sampling eluent concentration to total puri fi cation rate

2.2.7 洗脫流速對總純化率的影響

在固定條件下，分別考察洗脫流速（mL/min）1、2、3、4、5對總純化率的影響。

由圖12可知，洗脫流速為3 mL/min時，總純化率最大。在低流速時，可能由于流速太慢，洗脫下來的類黃酮又被重新吸附；流速過快，洗脫乙醇與類黃酮物質(zhì)接觸時間短，不能完全從樹脂上分離下來。洗脫率降低，導(dǎo)致總純化率下降。

圖12 洗脫流速對總純化率的影響Fig.12 Effect of sampling eluent rate to total puri fi cation rate

2.3 正交試驗結(jié)果分析

根據(jù)單因素實驗結(jié)果，可知上樣質(zhì)量濃度(mg/mL)、上樣pH值、洗脫乙醇體積分數(shù)(%)、洗脫流速(mL/min)在不同梯度下，總純化率的變化明顯。因此，選這4個因素做L16(45)正交試驗。

以總純化率為指標，大孔樹脂純化紫穗槐葉類黃酮的正交實驗結(jié)果見表3和表4。

表2 正交實驗因素與水平Table 2 Factors and levers of orthogonal array design

表3 正交實驗設(shè)計及結(jié)果Table 3 Orthogonal array design and results

表4 正交實驗方差分析?Table 4 Variance analysis on experimental results of orthogonal array design

由表3極差分析可知，各因素對總純化率的影響順序為：洗脫流速＞洗脫乙醇＞上樣質(zhì)量濃度＞上樣pH值。因為E為空列，且R值最小，所以符合設(shè)計要求。最佳搭配為A2B1C3D2。由表4方差分析可知，校正模型的P=0.013＜0.05，所以該模型能很好地描述各個因素對總純化率影響的差異性。4個因素中，洗脫流速、洗脫乙醇體積分數(shù)對總純化率的影響極顯著，上樣質(zhì)量濃度和上樣pH值對總純化率的影響不顯著。綜合分析，確定最佳大孔樹脂純化類黃酮的工藝條件為：上樣質(zhì)量濃度1.5 mg/mL、上樣pH值4、洗脫乙醇體積分數(shù)70%、洗脫流速3 min/mL。在此條件下平行試驗5次，平均總純化率為87.35%。

2.4 純化前后的比較

將紫穗槐葉的類黃酮提取液進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、冷凍干燥，得到類黃酮粗提物干粉，按照1.3方法測定粗提物中類黃酮的含量。然后將粗提物的干粉配置成1.5 mg/mL的上樣液，按照最佳工藝條件進行純化。分別做5次平行實驗，純化前類黃酮的平均含量為18.9%，純化后類黃酮的平均含量為56.2%，純化后較純化前提高了2.9倍。

3 結(jié)論與討論

本文應(yīng)用D101大孔樹脂吸附技術(shù)進行純化，以吸附率、解吸率和總純化率為純化指標做靜態(tài)和動態(tài)吸附，研究大孔樹脂純化類黃酮物質(zhì)的工藝條件。結(jié)果表明：（1）靜態(tài)實驗中，確定D101在10%乙醇溶液中對類黃酮物質(zhì)吸附解吸效果最好，總純化率達65.88%，優(yōu)于其他型號的大孔樹脂。（2）動態(tài)實驗中，確定類黃酮溶液配制成1.5 mg/mL，pH值4的上樣液，以3 mL/min的流速，100 mL體積的樣品液上樣，再用70%乙醇，以3 mL/min的流速進行洗脫。（3）優(yōu)化工藝條件下，收集洗脫液，經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、冷凍干燥制得純化后的類黃酮物質(zhì)。經(jīng)測定類黃酮物質(zhì)的含量由純化前的18.9%變成56.2%，提高了2.9倍。因此，運用大孔樹脂吸附技術(shù)能對類黃酮物質(zhì)進行很好的分離純化 。

大孔樹脂吸附與解吸特性與它的化學(xué)結(jié)構(gòu)、孔隙率、孔徑、顆粒大小和表面積有關(guān)[20]。本實驗發(fā)現(xiàn)樹脂孔徑與純化率有很大的關(guān)系。在5種樹脂中，D101的孔徑最小，但總純化率最高?？赡芤驗椴煌参锊牧咸崛〉念慄S酮不同，紫穗槐葉中類黃酮分子結(jié)構(gòu)較小，大孔徑樹脂泄露的類黃酮多，而小孔徑樹脂能吸附得更充分，這與劉靜等[21]應(yīng)用D101純化有柄石韋總黃酮的結(jié)果相同。上樣質(zhì)量濃度也可能與樹脂孔徑有關(guān)系。當(dāng)上樣質(zhì)量濃度較大時，提取物會覆蓋在樹脂表面，D101孔徑小進入樹脂內(nèi)部的提取物速度慢，沒完全吸附就流走了；而上樣質(zhì)量濃度較小時，D101能充分吸附，從而總純化率就會提高。楊佳等[22]在研究D101純化臍橙皮中橙皮苷時，確定上樣質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL，橙皮苷含量達到91.41%，富集倍數(shù)為1.49倍，回收率為 70.27%。黃榮等[23]利用D101研究火棘果總黃酮的提取和純化時，確定上樣質(zhì)量濃度為0.899 mg/mL，純度由原來的9.00% 提高至 28.11 %。而相比較X-5孔徑最大，需要的上樣質(zhì)量濃度就大。葛亮等[24]用X-5研究天山雪蓮黃酮類成分大孔樹脂純化時，確定上樣質(zhì)量濃度為50 mg/mL。因此，選擇合適的樹脂類型，并對其參數(shù)進行深入分析，有利于純化效率。

由本文可知，大孔樹脂純化類黃酮物質(zhì)需要控制的因素很多，所以需要前期科學(xué)的實驗設(shè)計和后期精準的操作。經(jīng)大孔樹脂純化，類黃酮化合物純度得到了顯著的提高，與陳志科等[25]研究相符。這就為以后運用高效液相色譜、核磁共振等高科技手段分析類黃酮單體和單體結(jié)構(gòu)奠定了基礎(chǔ)。

[1]中國藥科大學(xué) . 中藥辭海 [M]. 北京 : 中國醫(yī)藥科技出版社 ,1997: 563-565.

[2]顏淑云,周志宇,鄒麗娜,等. 干旱脅迫對紫穗槐幼苗生理生化特性的影響[J].干旱區(qū)研究,2011,38(1):139-143.

[3]雷麗麗,李 楊. 遼北地區(qū)紫穗槐育苗技術(shù)措施[J].農(nóng)民致富之友,2014,2(下半月):104.

[4]王 芳,高 瑾,張 艷,等.白三葉草黃酮含量及其抑菌活性研究[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報,2015,35(3):43-47.

[5]孫業(yè)良,姜明杉,陳 暄,等.基于響應(yīng)面分析法對綠茶中黃酮提取工藝的優(yōu)化[J].經(jīng)濟林研究,2009,27(3):33-37.

[6]劉 璐,付明哲,劉 俠,等. 植物黃酮類化合物提取及測定方法研究進展[J].動物醫(yī)學(xué)進展,2011,32(6):151-155.

[7]Somleva T,Ognyanov I. New rotenoids in Amorpha fruticosa fruits[J]. Plant Medica.,1985,51(3): 219-221.

[8]Masayoshi O,Toshiyuki Y,Munekazu I. Aprenylated fl avanone from roots of Amorpha fruticosa[J]. PHytochemistry,1998,48(5): 907-909.

[9]王 明,李阿娜,張偉偉,等. 園林植物葉片中多酚及總黃酮含量與病蟲害的關(guān)系[J].經(jīng)濟林研究,2010,28(2):42-48.

[10]王 倩,常麗新,唐紅梅. 黃酮類化合物的提取分離及其生物活性研究進展[J]. 河北理工大學(xué)學(xué)報,2011,33(1):110-115.

[11]彭程程,王青山,趙國祥,等. 黃酮類化合物的研究進展[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2010,5:38-41.

[12]劉 湘,汪秋安. 天然產(chǎn)物化學(xué)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[13]歐 霞,李勁平,佘志堅,等. 高速逆流色譜法在天然藥物研究中的應(yīng)用概況[J].中南藥學(xué),2014,12(3):246-250.

[14]林春梅. 聚酰胺層析法分離純化牛蒡葉中的總黃酮[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2014,40(2):236-238.

[15]PANYG,VELOE,PUIGJANER L.Pyrolysisof blends of biomass withpoor coals[J].Fuel,1996,75 (4):412-418.

[16]BLACQUEOE,PERENSEA. Functional genomics of the cilium,a sens ory organelle[J]. Current Biology,2005,15(10):935-941.

[17]徐 寬,楊棟梁,劉佳佳,等.大孔樹脂純化萼翅藤總黃酮工藝[J].化學(xué)工程,2012,40(9):64-68.

[18]陳學(xué)澤,甘正偉. 用大孔吸附樹脂分離純化香薷總黃酮[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報,2012,32(2):105-108.

[19]普義鑫,周文化,李 嵐,等. 用大孔樹脂純化檳榔多酚的工藝條件優(yōu)化[J]. 中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報,2012,32(2):100-104.

[20]Ma C,Tao G,Tang J,et al. Preparative separation and puri fi cation of rosavin in Rhodiola rosea by macroporous adsorption resins[J].Separation and Puri fi cation Technology,2009,69:22-28.

[21]劉 靜,程丹丹,辛?xí)詡?等. 大孔樹脂分離純化有柄石韋總黃酮的工藝優(yōu)化[J].亞熱帶植物學(xué),2014,43(3):202-205.

[22]楊 佳,張國文,汪佳蓉,等. 大孔樹脂分離純化臍橙皮中橙皮苷的工藝研究[J].食品科技,2010,35(6):210-213.

[23]黃 榮,傅小紅. 火棘果總黃酮的提取和純化研究[J].化學(xué)研究與應(yīng)用,2014,26(5):690-695.

[24]葛 亮,豆浩然,張 晉,等. 天山雪蓮黃酮類成分大孔樹脂純化工藝優(yōu)選[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2014,20(7):1-3.

[25]陳志科,謝碧霞.大孔樹脂對竹葉黃酮的吸附分離特性研究[J].經(jīng)濟林研究,2003,21(3):1-4.

[26]許 偉,姜惠仙,鄭 劍,等.水酶法提取板栗殼棕色素工藝條件的篩選[J].經(jīng)濟林研究,2015,33(2):101-106.

Separation and puri fi cation of fl avones in Amorpha fruticosa leaf by macroporous adsorption resins

WANG Jing-hong,WANG Fei,YANG Cheng-wu,LIU Su-xin,ZHANG Xiu-mei,DUO Duo,CHEN Ai
(College of Landscape Architecture,Northeast Forestry University,Harbin 150040,Heilongjiang,China)

In order to selecting the most optimal macroporous resins,the optimalized process conditions of separation and puri fi cation for fl avones in Amorpha fruticosa. leaves by macroporous adsorption resin were studied. With the total puri fi cation rate as the evaluation index,under the static absorption and desorption,the ethanol concentrations for the most optimal macroporous resin and crude extractings from dissolved fl avones were screened out. Under the dynamic absorption and desorption,by using orthogonal experiment design of single factor,the effects of injecting concentration,sampling flow rate,sampling volume,sampling pH,eluting ethanol concentration,elution fl ow rate on the total puri fi cation rate were investigated,and the optimum process conditions were obtained. The results show that with 10% ethanol,the crude extracts of fl avones were dissolved; with D101 macroporous resins,the puri fi ed sample solution was separated and puri fi ed; the optimum technology were determined as follows: sampling concentration 1.5 mg/mL,sampling fl ow rate 3 mL/min,sampling volume 100 mL,sampling pH=4,eluting ethanol concentration 70%,the elution fl ow rate 3 mL/min. With the optimum technology conditions,the fl avones in A. fruticosa leaves can be scienti fi cally and rationally separated and puri fi ed,the yield rate of fl avones content was 56.2%,was 2.9 times more than that of before puri fi ed (18.9%).

Amorpha fruticosa; Amorpha fruticosa leaves; fl avones; macroporous adsorption resin; separation and puri fi cation

S759.8

A

1673-923X(2016)01-0112-07

10.14067/j.cnki.1673-923x.2016.01.019

2015-03-16

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金項目（2572014CA27）

王競紅，副教授，博士 通訊作者：王 非，副教授；E-mail：175494899@qq.com

王競紅，王 非，楊成武，等. 大孔吸附樹脂分離純化紫穗槐葉類黃酮的研究[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報，2016,36(1):112-118.

[本文編校：謝榮秀]