葛黃顆粒水提取工藝研究

陳玉蘭++蒲清榮++魏嵋++沈宏萍++趙劍++羅群

摘要：目的優(yōu)選葛黃顆粒水提取工藝。方法以水提取物中有效組分多糖為指標(biāo)，采用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖的含量，運(yùn)用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選葛黃顆粒水提取工藝。結(jié)果葛黃顆粒的最佳水提取工藝為加12倍量水浸泡1 h，煎煮 3 次，每次煎煮1 h。結(jié)論采用該水提工藝提取，水提取物中多糖的收率較高且穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞：水提取工藝；正交設(shè)計(jì)；多糖

中圖分類(lèi)號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）11-0079-02

葛黃顆粒是本院自制的復(fù)方中藥制劑，具有醒酒解毒、健脾疏肝、清熱利濕之功效，具有良好的解酒、保肝和降脂作用。處方含茯苓、黨參、柴胡等中藥均含有多糖，多糖具有解酒、保肝等藥理作用且易溶于水，所以采用煎煮法提取。用苯酚—硫酸法測(cè)定多糖的含量，采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選最佳水提取工藝。

1實(shí)驗(yàn)部分

儀器與材料：HH-S8水浴鍋；JA203H天平；AUW120D精密天平；754型紫外可見(jiàn)分光；JPCT0328超聲機(jī)；D-無(wú)水葡萄糖（批號(hào)110833-201205，供含量測(cè)定用，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；苯酚（分析純）；硫酸（分析純）；多效蒸餾水（西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室）。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)樣品的制備選擇加水量、浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為因素，選用L9（34）因素水平表安排正交試驗(yàn)。按1/2處方準(zhǔn)確稱取9 份樣品，每份85 g，按表 1中9 種工藝條件組合進(jìn)行水提取法提取，提取液水浴濃縮成干浸膏備用。

2.2正交試驗(yàn)樣品中總多糖含量測(cè)定

2.2.1干浸膏收率的測(cè)定取正交試驗(yàn)浸膏，水浴蒸干，105℃烘至恒重，精密稱定，計(jì)算干浸膏收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.2.2對(duì)照品溶液的配制精密稱取105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品18.9 mg，加水使之溶解于100 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.189 mg/ml的葡萄糖對(duì)照品溶液。

2.2.35%苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加鋁粉100 mg，碳酸氫鈉50 mg，蒸餾收集182℃餾分，取餾分5 g，加水至100 mL，搖勻，置棕色瓶中備用。

2.2.4供試品溶液的制備精密稱取干浸膏粉0.05 g，精密加入50 mL蒸餾水，超聲提取30 min，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.5硫酸用量的選擇精密吸取供試品溶液0.1 mL 3份，分別置于10 mL試管中，加水使成2.0mL，各精密加入5%苯酚1.0 mL，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0、6.0、7.0 mL，搖勻，放置30 min冷卻后，在分光光度儀上490 nm處測(cè)定吸光度值，為0.309，0.308，0.310。結(jié)果表明：濃硫酸用量為5.0 mL時(shí)，反應(yīng)即可完全。

2.2.6試驗(yàn)溫度的選擇精密吸取供試品溶液各0.1 mL，分別置10 mL試管中，加水使成2.0 mL，各精密加入5%苯酚1.0 mL，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0 mL，搖勻，分為3組：室溫放置30 min；40℃保溫30 min，放冷至室溫；置沸水浴中加熱25 min，再放于冰水浴中15 min。分別在490 nm處測(cè)定吸光度值，分別為0.311，0.322，0.336。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：置沸水浴中加熱25 min，再放于冰水浴中15 min較其他方法反應(yīng)完全。

2.2.7葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取葡萄糖對(duì)照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.0 mL分別置10 mL試管中，加水使成2.0 mL，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0 mL，搖勻，置沸水浴中加熱25 min，再放于冰水浴中15 min，取出。在490 nm處測(cè)定吸光度值，分別測(cè)得吸光度值為0.124，0.233，0.489，0.977，1.186。以葡萄糖對(duì)照品溶液的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：Y=6.3289X+0.0037（r=0.9993），葡萄糖在0.0189 mg～0.189 mg之間線性關(guān)系良好。

2.2.8顯色穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品0.1 mL，按標(biāo)注曲線步驟操作，將同一份反應(yīng)液間隔一定時(shí)間（0.5、1、1.5、2、2.5、3 h）測(cè)定吸光度值，結(jié)果分別為0.330，0.342，0.326，0.332，0.329，0.338。計(jì)算RSD為0.6%，結(jié)果表明在3 h內(nèi)顯色穩(wěn)定。

2.2.9精密度試驗(yàn)精密吸取葡萄糖對(duì)照品溶液0.1 mL，按標(biāo)注曲線步驟操作，重復(fù)測(cè)定5次，記錄吸光度值分別為0.128，0.129，0.125，0.131，0.130，RSD為0.2%。結(jié)果RSD<3%，表明儀器精密度良好。

2.2.10重復(fù)性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液0.1 mL，共5 份，按標(biāo)注曲線步驟操作，測(cè)定吸光度值，分別為0.324，0.315，0.322，0.328，0.331，RSD為0.6%。結(jié)果RSD<3%，表明重復(fù)性良好。

2.2.11加樣回收率試驗(yàn)精密稱取干浸膏0.025 g，共6份，精密加入50 mL蒸餾水，超聲處理30 min，濾過(guò)，取續(xù)濾液。精密吸取續(xù)濾液0.1 mL置10 mL試管中，各加入0.1 mL的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，加水至2.0 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟操作，測(cè)定吸光度值，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果回收率平均值為103.28%，RSD為0.99%。

2.12樣品的測(cè)定取正交試驗(yàn)干浸膏，依法制備供試品溶液。按上述條件，測(cè)定吸光度值，計(jì)算含量。根據(jù)各因素對(duì)提取工藝影響的貢獻(xiàn)大小給予不同的權(quán)重系數(shù)：干浸膏得率為50%，總多糖含量為50%，再進(jìn)行加權(quán)求和：綜合評(píng)分=（干浸膏收率/干浸膏收率最大值）× 50% +（多糖含量/多糖含量最大值）×50%。正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3和表4。

3討論

葛黃解酒顆粒處方來(lái)源于名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，該方成分比較復(fù)雜，由黨參、白術(shù)、茯苓、柴胡、枳椇等組成，多味中藥均富含水溶性有效成分，但其水溶性成分不明確，故以總多糖含量及干浸膏收率為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察水提工藝，得出最佳提取工藝條件。

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