朱文淵，霍翠梅，郝晴晴

（山東省濟(jì)寧市畜牧獸醫(yī)局，山東 濟(jì)寧 272037）

克倫特羅在豬尿液和血液中的殘留消除規(guī)律研究

朱文淵，霍翠梅，郝晴晴

（山東省濟(jì)寧市畜牧獸醫(yī)局，山東 濟(jì)寧 272037）

在飼料中添加10mg/kg的克倫特羅，使用HPLC法研究了克倫特羅在豬尿液和血液中的殘留消除規(guī)律。研究結(jié)果表明：喂藥期前3d尿液和血液中克倫特羅的含量逐步上升，4～15d無(wú)明顯變化趨勢(shì)；停藥期前3d尿液和血液中克倫特羅的含量急劇下降，4～15d呈平緩下降趨勢(shì)；喂藥期和停藥期尿液和血液中克倫特羅的含量變化成正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.64、r=0.9961。因此，使用HPLC法以血液樣本代替尿樣進(jìn)行克倫特羅檢測(cè)是可行的。

克倫特羅；豬；尿液；血液；殘留消除

克倫特羅（Clenbuterol，CL）在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中被非法添加，具有使用最早、使用范圍最為廣泛、毒性最強(qiáng)的特點(diǎn)。對(duì)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中CL違禁添加的監(jiān)測(cè)是當(dāng)前畜產(chǎn)品安全監(jiān)管工作的重點(diǎn)之一，一般以動(dòng)物尿液做為檢測(cè)樣本。但是，采集尿液時(shí)動(dòng)物群體應(yīng)激較大，并受限于動(dòng)物排尿時(shí)間不固定，在采樣過程中存在諸多不便。動(dòng)物血液是獸醫(yī)檢測(cè)的最主要樣本來(lái)源，且易于采集。因此，CL在豬尿液和血液中殘留消除規(guī)律的研究，能為監(jiān)測(cè)過程中以血液樣本代替尿液樣本提供參考依據(jù)，具有較大的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇體重、年齡相近的健康公豬（70±2.5kg）10頭，飼料為不含任何藥物的配合日糧，按既有養(yǎng)殖模式飼養(yǎng)，自由飲水。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在基礎(chǔ)日糧中添加10mg/kg的CL，連續(xù)飼喂15d，自由采食、飲水。在用藥的第1、2、3、4、6、8、10、15天，停藥后的1、2、3、4、6、8、10、15d，于早8：00～9：00時(shí)，采集100mL尿液、10mL血液，用于測(cè)定尿液和血清中的CL含量。

1.3 儀器與試劑

主要儀器、耗材：高效液相色譜儀（Waters2695，配紫外檢測(cè)器）、氮吹儀（Organomation N-EVAP 24）、SPE柱（Oasis WCX，Waters公司）等。主要試劑：克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品（Waters，98%）、乙腈（色譜純、迪馬），其余試劑均為分析純。

1.4 檢測(cè)方法與條件

樣品前處理過程按照國(guó)標(biāo)：動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定（GB/T 5009.192-2003）操作，色譜條件參考姚開薇等（2011）、王琦等（2011）的條件進(jìn)行調(diào)整，具體如下：色譜柱：waters sunfire C18柱（150×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈30%+0.02mol/L乙酸銨70%（以體積百分濃度計(jì)）；流速1mL/min；上樣體積：10μL；檢測(cè)溫度：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm。

1.5 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果計(jì)算使用waters Empower2.0，相關(guān)性分析使用Excel軟件。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同用藥期豬尿液、血清中CL含量變化規(guī)律

如表1所示：在整個(gè)用藥期，尿液中CL濃度在903～1542 ng/mL之間，血清中CL濃度在15.1～27.9 ng/mL之間。飼喂克倫特羅1d后，血清和尿液中均可檢出較高濃度的CL，而且在前3d有逐步升高的趨勢(shì)，這與李慧（2005）的研究結(jié)果相同。喂藥期3～15d血清和尿液中CL濃度分別在16.9～27.9ng/mL和1127.3～1542.6ng/mL之間，未呈現(xiàn)明顯變化趨勢(shì)與孫澤祥等（2010）報(bào)道的一致。

2.2 不同停藥期豬尿液、血清中CL含量變化規(guī)律

如表2所示：停藥后15d內(nèi)，尿液中CL濃度從1127.3下降至5.7ng/mL，血清中CL濃度從19.6下降至1.2ng/mL。停藥后1～3d，血清和尿液中CL濃度急劇下降。停藥3～15d，血清和尿液中CL濃度呈現(xiàn)平緩的下降趨勢(shì)，特別是血清中，停藥6d以后CL濃度僅從1.7ng/mL下降至1.2ng/mL。這一變化趨勢(shì)和李慧（2005）、孫澤祥等（2010）報(bào)道的結(jié)果一致。

2.3 血清和尿液中CL含量變化相關(guān)性研究

對(duì)用藥期間血清和尿液中CL含量變化進(jìn)行相關(guān)性分析，r=0.64屬于顯著正相關(guān)。孫澤祥等（2010）研究表明，在豬飼料中添加4mg/kg克倫特羅，在用藥1～14d內(nèi)，血清和尿液中CL含量呈正相關(guān)，r=0.9385，其相關(guān)性高于本試驗(yàn)。

停藥1～15d血清和尿液中CL含量變化呈現(xiàn)出基本一致的變化趨勢(shì)，對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析r=0.9961，此結(jié)果與孫澤祥等（2010）報(bào)道的停藥后血清和尿液中CL含量呈正相關(guān)（r=0.94）的結(jié)果一致。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明CL在豬血液和尿液中具有相同的殘留消除規(guī)律，且含量變化存在正相關(guān)。因此，在CL監(jiān)測(cè)工作中使用HPLC法以血液替代尿液做為檢測(cè)樣本是可行的，并能與重大動(dòng)物疫病防控監(jiān)測(cè)采樣相結(jié)合，極大提高工作效率。

表1 不同用藥期尿液/血清中CL含量（單位：ng/mL）

表2 不同停藥期尿液/血清中CL含量（單位：ng/mL）

[1]姚開薇，等.高效液相色譜法檢測(cè)克倫特羅的探討[J].職業(yè)衛(wèi)生與病傷，2011，26（4）：259-260．

[2]王琦，等.動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定高效液相色譜法方法改進(jìn)[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2001，23（8）：50-52．

[3]李慧.克倫特羅在豬組織和尿液中的殘留消除規(guī)律及其在豬毛發(fā)中檢測(cè)方法（GC/MS）的研究[D].新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[4]孫澤祥，等.克倫特羅在豬尿液和血液中殘留消除相關(guān)性研究[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2010，37（8）：160-163.

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．07.117