馮 軍，劉布鳴

(廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點實驗室，廣西南寧 530022)

三七花顆粒的質(zhì)量控制方法*

馮 軍，劉布鳴**

(廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點實驗室，廣西南寧 530022)

【目的】完善三七花顆粒制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)?！痉椒ā坎捎帽由V法對三七花顆粒進(jìn)行定性鑒別，并用高效液相色譜法對顆粒中的人參皂苷Rb3進(jìn)行定量測定?！窘Y(jié)果】三七花顆粒供試品與對照品及藥材在薄層色譜中相應(yīng)的位置上，顯現(xiàn)相同顏色的熒光斑點；人參皂苷Rb3在0.505～5.050 μg成良好線性關(guān)系(r=0.999 9)，平均回收率為101.25%，RSD為0.54% (n=6)?！窘Y(jié)論】該方法簡便、準(zhǔn)確，可用于三七花顆粒質(zhì)量的控制。

高效液相色譜 薄層色譜 三七花顆粒 人參皂苷Rb3

0 引言

【研究意義】三七花為五加科植物三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)的干燥花序[1]，學(xué)名：Panax pseudoginseng Wall.var.notoginseng (Burkill) Hoo et Tseng，英文名：Sanchi。三七花顆粒是以三七花為原料制成的單方制劑。三七主要含有皂苷類、黃酮類和揮發(fā)性成分，其中三七花中皂苷類成分人參皂苷Rb3的含量比根部要高[2],具有降血壓、降血脂、護肝、抗炎、抑制細(xì)胞增殖等作用[3-5]。【前人研究進(jìn)展】目前一般采用指標(biāo)性成分的定性鑒別和含量的測定對中藥材及其制劑的質(zhì)量進(jìn)行控制。張柯媛等[6]采用薄層色譜法和高效液相色譜法對四數(shù)九里香藥材中的補骨脂素進(jìn)行定性定量分析，以作為四數(shù)九里香藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法；李文琪等[7]采用薄層色譜定性鑒別，并用高效液相色譜測定芒果苷含量，為光石韋藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供分析方法和依據(jù)；中國藥典[8]采用薄層色譜法和高效液相色譜法對三七片中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1進(jìn)行定性定量分析，以控制制劑質(zhì)量。【本研究切入點】三七花顆粒收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第二冊[9]，現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中尚無定性鑒別和含量測定的相關(guān)規(guī)定項?！緮M解決的關(guān)鍵問題】參考文獻(xiàn)[6-7]，采用薄層色譜法和高效液相色譜法分別建立三七花顆粒的薄層色譜鑒別方法和人參皂苷Rb3的含量測定方法。

1 材料與方法

1.1 材料

美國Agilent 1260高效液相色譜儀(G1311C四元梯度泵，G1329B自動進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，DAD檢測器，OpenLAB CDS色譜工作站)，ZF-90D暗箱式紫外分析儀(上海光豪分析儀器有限公司)，HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)，KQ-5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)。

人參皂苷Rb3對照品(批號：111686-201504)，由中國食品藥品檢定研究院提供;三七花顆粒(批號：140802，140911，141018)，由廣西萬通制藥有限公司提供;三七花藥材由廣西萬通制藥有限公司提供。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純。

1.2 方法

1.2.1 薄層色譜(TLC)鑒別

1.2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷Rb3對照品5.05 mg，用純甲醇溶解并定容至10 mL的容量瓶中，制得每毫升約含0.505 mg人參皂苷Rb3的對照品溶液。

1.2.1.2 供試品溶液的制備

分別稱取三七花顆粒及陰性樣品各約2 g，三七花藥材約4 g，分別置于具塞錐形瓶中，加入甲醇20 mL，超聲提取1 h，放冷，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

1.2.1.3 薄層色譜鑒別方法

在同一塊G-硅膠板上點樣，點樣量為9 μL，以氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.5)為展開劑，預(yù)飽和10 min，

10%(V/V)硫酸乙醇溶液顯色，105℃的烘箱中烘5 min，紫外燈(365 nm)下檢視。

1.2.2 人參皂苷Rb3含量測定

1.2.2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

色譜柱為Pursuit 5 C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸(V∶V=33∶67)，檢測波長為203 nm，流速1.0 mL/min，柱溫為30℃。

1.2.2.2 對照品溶液的制備

取人參皂苷Rb3對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rb30.15 mg的溶液即得。

1.2.2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，研細(xì)，取約4 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱重，超聲提取1 h，取出，放冷，用甲醇補足重量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

1.2.2.4 線性范圍的考察

先取人參皂苷Rb3對照品適量，精密稱定，加甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.505 mg/mL的對照品母液，再分別精密量取對照品母液8.0 mL、6.0 mL、4.0 mL、2.0 mL、1.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，最后精密吸取上述對照品溶液及對照品母液各10 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測定。

1.2.2.5 精密度試驗

精密吸取對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀測定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，計算出人參皂苷Rb3峰面積的RSD值為0.13%。

1.2.2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一批供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h進(jìn)樣，計算出人參皂苷Rb3峰面積的RSD為0.42%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.2.7 重復(fù)性試驗

取同一批樣品6份，分別按1.2.2.3項方法制備供試品溶液，測定峰面積，計算人參皂苷Rb3含量， RSD值為0.34%。

1.2.2.8 回收率試驗

取已知含量的本品6份，每份約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入0.91 mg/mL的人參皂苷Rb3對照品溶液5 mL，再分別精密加入甲醇45 mL，自稱重，超聲提取1 h后參考1.2.2.3項供試品溶液的制備方法制備供試品溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 薄層色譜鑒別

從圖1可以看出，三七花顆粒供試品與人參皂苷Rb3對照品在相應(yīng)位置上有相同斑點，陰性樣品在人參皂苷Rb3對照品相應(yīng)位置上無斑點，比移值符合要求，說明薄層色譜可作為三七花顆粒的鑒別方法。

1～3：樣品；4：人參皂苷Rb3對照品；5：三七花；6：陰性

1～3：Sample；4：Ginsenoside Rb3；5：Sanchi；6：Negative sample

圖1 三七花顆粒TLC鑒定

Fig.1 TLC of sanchi granuLe

2.2 人參皂苷Rb3含量

2.2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

按1.2.2.1節(jié)的色譜條件，分別吸取供試品溶液和對照品溶液并進(jìn)樣，理論塔板數(shù)按人參皂苷Rb3計大于7 000，分離度大于1.5，結(jié)果見圖2。

A：對照品Standard； B：供試品Sample； 1：人參皂苷Rb3Ginsenoside Rb3

圖2 三七花顆粒HPLC分析

Fig.2 HPLC of sanchi granuLe

2.2.2 線性范圍

以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，得人參皂苷Rb3對照品的回歸方程：y=298.329 31x+2.784 11(r =0.999 9)。結(jié)果表明，人參皂苷Rb3進(jìn)樣量為0.505～5.050 μg時，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3 回收率試驗

分別吸取1.2.2.8節(jié)中所列供試品溶液注入液相色譜儀，測定峰面積，計算回收率。表1結(jié)果顯示平均回收率為101.25%，RSD值為0.54%，表明方法準(zhǔn)確性良好。

表1 人參皂苷Rb3加樣回收率試驗結(jié)果

Table 1 Recovery test result of ginsenoside Rb3

序號Number取樣重量Sampleweight(g)樣品含量Samplecontent(mg)加入重量Standardweight(mg)峰面積Peakarea測得量Testcontent(mg)回收率Rateofrecovery(%)平均回收率Averagerateofrecovery(%)RSD(%)12.00014.34.55471.108.91101.30101.250.5422.00044.34.55473.108.95102.1132.00034.34.55471.708.92101.5442.00054.34.55470.858.90101.1751.99984.34.55469.858.89100.7962.00024.34.55469.408.88100.59

2.2.4 樣品測定

按上述方法分別對3批三七花顆粒樣品中的人參皂苷Rb3含量進(jìn)行測定，結(jié)果分別為2.15 mg/g、2.23 mg/g、1.98 mg/g。

3 結(jié)論

選擇超聲提取方法，并參照三七花藥材標(biāo)準(zhǔn)[1]中的鑒別項調(diào)整TLC展開系統(tǒng)比例為氯仿∶甲醇∶水為7∶3∶0.5，再對比考察了不同提取溶劑、提取時間及溶劑用量對人參皂苷Rb3提取效率的影響，又參照文獻(xiàn)[10-12]選擇色譜條件，建立了三七花顆粒的薄層色譜鑒別方法和人參皂苷Rb3的含量測定方法。該方法準(zhǔn)確、簡便，可操作性強，可為提升三七花顆粒現(xiàn)有質(zhì)量控制水平提供實驗參考。

[1] 廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):第二卷[S].南寧:廣西科學(xué)技術(shù)出版社,2011. Guangxi Food and Drug Administration.Quality Standard of Guangxi Zhuang Medicine:Vol.2[S].Nanning:Guangxi Science and Technology Press,2011.

[2] 朱潔,楊蓉,張洪彬.HPLC-ELSD法測定三七葉中人參皂苷Rb3、Rc、Rb1的含量[J].中草藥,2004,35(12):1365-1366. ZHU J,YANG R,ZHANG H B.Content determination of ginsenoside Rb3,ginsenoside Rc,ginsenoside Rb1 in Panax notoginseng leaf by HPLC-ELSD[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs,2004,35(12):1365-1366.

[3] 曹敏,王佑華,王福波,等.三七花總皂苷降壓作用研究[J].光明中醫(yī),2012,27(7):1314-1315. CAO M,WANG Y H,WANG F B,et al.Effect study on blood pressure by Panax notoginseng flower saponins[J].Guangming Journal of Chinese Medicine,2012,27(7):1314-1315.

[4] 王彥武,趙鵬,李彬,等.三七花含片對酒精性肝損傷保護作用的實驗研究[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2005,22(1):62-63. WANG Y W,ZHAO P,LI B,et al.The study of protective effects of sanchi tablet on alcoholic liver injury[J].Journal of Guangxi Medical University,2005,22(1):62-63.

[5] 苑素云,王佑華,曹敏,等.三七花總皂苷對內(nèi)皮素誘導(dǎo)的人主動脈血管平滑肌細(xì)胞c-myc、c-fos表達(dá)的影響[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2012,26(3):95-97. YUAN S Y,WANG Y H,CAO M,et al.Influence of Panax notoginseng flower saponins on c-myc and c-fos expressions in ET-1-induced human aortic vascular smooth muscle cells[J].Acta Universitatis Traditionis Medicalis Sinensis Pharmacologiaeque Shanghai,2012,26(3):95-97.

[6] 張柯媛,黃艷,劉布鳴,等.四數(shù)九里香藥材中補骨脂素的定性定量分析方法研究[J].廣西科學(xué),2012,19(4):352-354. ZHANG K Y,HUANG Y,LIU B M,et al.Qualitative and quantitative analysis of psoralen in Murraya tetraera Huang[J].Guangxi Sciences,2012,19(4):352-354.

[7] 李文琪,陳明生,溫幼敏,等.光石韋藥材中芒果苷的定性定量分析方法研究[J].廣西科學(xué),2012,19(1):77-79. LI W Q,CHEN M S,WEN Y M,et al.Qualitative and quantitative analysis of mangiferin in Pyrrosia hclavata (Bak.) Ching[J].Guangxi Sciences,2012,19(1):77-79.

[8] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015年版:一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015. Chinese Pharmacopoeia Commission.The People’s Republic of China Pharmacopoeia:2015 Edition[S].Beijing:Chinese Medical Science and Technology Press,2015.

[9] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn):中藥成方制劑:第二冊[S].北京:中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會,1990. The Ministry of Health of the People’s Republic of China Pharmacopoeia Committee.The Traditional Chinese Medicine Preparation of Chinese Medicine Standard:Vol.2[S].Beijing:The Ministry of Health of the People’s Republic of China Pharmacopoeia Committee,1990.

[10] 魏莉,杜奕,周浩.不同產(chǎn)地和生長年限三七花蕾中總皂苷及單體皂苷的含量測定[J].上海中醫(yī)藥雜志,2008,42(4):76-78. WEI L,DU Y,ZHOU H.Content determination of total saponin and monomer saponin of Panax notoginseng flower bud in different habitats and growth ages[J].Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine,2008,42(4):76-78.

[11] 何軼,范震洪,趙靜沛,等.HPLC測定三七花葉顆粒中人參皂苷Rb3的含量[J].中國中藥雜志,2006,31(22):1894-1895. HE Y,FAN Z H,ZHAO J P,et al.Content determination of ginsenoside Rb3 in Panax notoginseng flower and leaf granuLe by HPLC[J].China Journal of Chinese Materia Medica,2006,31(22):1894-1895.

[12] 赫玉芳,趙昱瑋,司學(xué)玲,等.HPLC法同時測定三七花盤中人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3的含量[J].中國醫(yī)藥科學(xué),2015,5(5):42-44. HE Y F,ZHAO Y W,SI X L,et al.Content determination of ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rb3 in flower disc of Panax notoginseng by HPLC[J].China Medicine and Pharmacy,2015,5(5):42-44.

(責(zé)任編輯：尹 闖)

Study on the Quality Control Method of Sanchi GranuLe

FENG Jun，LIU Buming

(Guangxi Key Laboratory of Tradtitonal Chinese Medicine Quality Standards,Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences,Nanning,Guangxi,530022,China)

【Objective】To perfect the quality control standard of sanchi granuLe.【Methods】The TLC method was used to identify the sanchi granuLe and the HPLC method was used for the determination of ginsenoside Rb3in it.【Results】Each of the sanchi,sanchi granuLe and ginsenoside Rb3had a similar fluorescent spot which performed the same colour and Rf in the TLC.The calibration curve of ginsenoside Rb3showed a good linearity within 0.505～5.050 μg,r=0.999 9.The average recovery was 101.25%,RSD was 0.54% (n=6).【Conclusion】The method was simple and accurate,it could be used for the quality control of sanchi granuLe.

HPLC，TLC，sanchi granuLe，ginsenoside Rb3

http://www.cnki.net/kcms/detail/45.1075.N.20161128.1439.002.html

2016-06-10

馮 軍(1984-)，男，助理研究員，碩士，主要從事中藥、天然藥化學(xué)成分與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

*廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點實驗室系統(tǒng)性研究課題(桂中重系201310)和廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)項目(重大專項計劃，桂科重14124002-11)資助。

R286

A

1002-7378(2016)04-0278-04

網(wǎng)絡(luò)優(yōu)先數(shù)字出版時間:2016-11-28 【DOI】10.13657/j.cnki.gxkxyxb.20161128.001

**通信作者：劉布鳴(1956-)，男，研究員，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥、天然藥化學(xué)成分與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究,E-mail:liubuming@aliyun.com。