鄭明蘭

(山西省臨汾市環(huán)保局環(huán)境監(jiān)測站，山西臨汾 041000)

3種山西委陵菜屬植物總黃酮比較

鄭明蘭

(山西省臨汾市環(huán)保局環(huán)境監(jiān)測站，山西臨汾 041000)

[目的]研究3種山西委陵菜屬植物葉中總黃酮的含量。[方法]通過4因素3水平的正交試驗，考察料液比、乙醇濃度、提取溫度和提取時間對委陵菜、西山委陵菜、翻白草3種山西委陵菜屬植物總黃酮超聲波提取的影響。[結(jié)果]最終得到委陵菜、西山委陵菜和翻白草葉中總黃酮提取的最優(yōu)方案，在各自相應(yīng)的最佳方案下提取的總黃酮含量分別為13.13、36.48和45.97 mg/g，西山委陵菜和翻白草葉中總黃酮含量顯著高于委陵菜葉總黃酮含量。[結(jié)論]西山委陵菜和翻白草葉中黃酮類成分更為豐富，是很好的藥用植物資源。

委陵菜；西山委陵菜；翻白草；總黃酮；正交試驗；含量比較

委陵菜屬(Potentilla. L)植物屬于薔薇科(Rosaceae)薔薇亞科，多為多年生草本，全球共有500余種，我國約80余種，山西有20種8變種[1]。該屬植物分布廣，種類繁雜，很多種類有藥理作用[2-6]，如保肝[7]、抗腫瘤[8-9]、抗氧化[10-11]、抗腦缺血損傷[12]、抗菌[13]、抗過敏[14]、抗病毒[15-16]等。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對委陵菜屬植物的成分和活性進(jìn)行了研究[5，8，11-15]。中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)開放實驗室首次從翻白草甲醇提取物中分離得到2類化合物，分別為黃酮苷和三萜類化合物[17]。許正剛等[18]對安徽產(chǎn)委陵菜屬的7種藥用種類的全草進(jìn)行了總黃酮的提取及純化工藝研究。但有關(guān)于委陵菜屬各個物種的黃酮類物質(zhì)比較研究較少。筆者對分布于山西委陵菜屬中的3種植物進(jìn)行了總黃酮的提取，通過正交試驗設(shè)計選出最佳提取方案，建立快速、高效的提取黃酮類化合物的方法，并對比分析總黃酮含量的種間差異，為委陵菜屬植物的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 于2012年8月在山西霍山、山西呂梁山采集委陵菜(P.chinensis)、西山委陵菜(P.sischanensis)、翻白草(P.discolor)的葉，自然條件下陰干，粉碎成粉末后備用。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98 %)購于上海同田生物技術(shù)股份有限公司；亞硝酸鈉(NaNO2)、氫氧化鈉(NaOH)、無水乙醇、硝酸鋁[Al(NO3)3]均為分析純，購于天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。超純水自制。

1.2 方法

1.2.1 多因素正交試驗設(shè)計。根據(jù)文獻(xiàn)[19]，選擇料液比(g∶mL)、 乙醇濃度、 提取溫度、提取時間 4 個因素，以黃酮提取量作為評價指標(biāo)，然后使用L9(34)正交表進(jìn)行試驗設(shè)計，所選因素及水平如表 1 所示。

表1 超聲提取條件正交試驗的因素和水平

1.2.2 提取液的制備。準(zhǔn)確稱取5 g葉干粉，按單因素試驗和L9(34)正交試驗中相應(yīng)的提取條件，經(jīng)超聲儀提取，抽濾，合并濾液，將提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干。將提取物用50 mL蒸餾水溶解，經(jīng)石油醚萃取，母液加無水乙醇配成體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇溶液，冰箱過夜。沉淀葉綠素，經(jīng)5 000 r/min離心5 min，除去葉綠素層，澄清液完全轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)30%的乙醇定容至刻度。

1.2.3 總黃酮提取量的測定。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)樣，利用 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 系統(tǒng)顯色法顯色。在510 nm處測定吸光度值A(chǔ)，參照文獻(xiàn)[20]進(jìn)行操作。以蘆丁濃度值(C)為橫坐標(biāo)、吸光度值(A)為縱坐標(biāo)，對數(shù)據(jù)進(jìn)行線性擬合，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=14.84C-0.002(R2=0.999 3)。精確量取1.0 mL提取液，以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 系統(tǒng)顯色法顯色，并用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇定容至25 mL，在510 nm處測定吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算濃度C(mg/mL)。然后按照下列公式計算提取物中總黃酮提取量(mg/g)：總黃酮的提取量=C×100×V/W，式中，C為濃度(mg/mL)，V為定容體積(mL)，W為干粉量(g)。

2 結(jié)果與分析

2.1 委陵菜總黃酮提取的最佳條件篩選 從表2可以看出，各因素對委陵菜總黃酮提取量的影響從大到小依次為料液比、提取時間、提取溫度、乙醇濃度，且初步確定提取的最佳方案是A3B2C2D3，即料液比為1∶100，濃度為60%的乙醇，在70 ℃下提取60 min；在此條件下提取得到的總黃酮含量為13.13 mg/g，較此次正交試驗中的最高提取量(12.97 mg/g)有所增加，說明該方案有效可行。

表2 委陵菜的L9(34)正交試驗結(jié)果

方差分析結(jié)果表明，料液比對委陵菜總黃酮提取量具有極顯著的影響，即在所設(shè)置的3個水平條件下提取得到的總黃酮含量差異很大，從而便于選擇最優(yōu)水平；乙醇濃度、提取溫度和提取時間三者在所設(shè)定的范圍內(nèi)對委陵菜總黃酮提取量的影響不顯著。

2.2 西山委陵菜總黃酮提取的最佳條件篩選 由表3可以看出，各因素對西山委陵菜總黃酮提取量的影響從大到小依次為料液比、提取時間、乙醇濃度、提取溫度，并初步確定提取的最佳方案為A3B2C3D3，即料液比1∶100、乙醇濃度60%、

表3 西山委陵菜的L9(34)正交試驗結(jié)果

提取時間70 min、提取溫度70 ℃，在此條件下提取得到的總黃酮含量為36.48 mg/g，較此次正交試驗中最高提取量(34.37 mg/g)有所增加，說明該方案提取效果較好。

方差分析結(jié)果表明，料液比和提取時間對西山委陵菜總黃酮提取量分別具有極顯著和顯著的影響，即在所設(shè)置的3個水平條件下提取得到的總黃酮含量差異很大，從而便于選擇最優(yōu)水平；而乙醇濃度和提取溫度在所設(shè)定的范圍內(nèi)對西山委陵菜總黃酮提取量的影響不顯著。

2.3 翻白草總黃酮提取的最佳條件篩選 從表4可以看出，各因素對翻白草總黃酮提取量的影響從大到小依次為乙醇濃度、提取時間、提取溫度、料液比，并初步確定最佳提取方案為A3B2C2D1，即料液比1∶100、乙醇濃度60%、提取時間60 min、提取溫度50 ℃，在此條件下提取得到的總黃酮含量為45.97 mg/g，較此次正交試驗中最高提取量(44.07 mg/g)有所增加，說明該方案提取效果較好。

表4 翻白草的L9(34)正交試驗結(jié)果

方差分析結(jié)果表明，乙醇濃度和提取時間對翻白草總黃酮提取量分別具有極顯著和顯著的影響，即在所設(shè)置的3個水平條件下提取得到的總黃酮含量差異很大，從而便于選擇最優(yōu)水平；而料液比和提取時間在設(shè)定的范圍內(nèi)對翻白草總黃酮提取量的影響不顯著。

3 結(jié)論與討論

該研究采用超聲波輔助提取的方法，對委陵菜屬3種植物葉片進(jìn)行總黃酮的提取，通過正交試驗設(shè)計得出委陵菜屬3種植物葉片總黃酮提取的最佳方案，分別為：委陵菜料液比1∶100、乙醇濃度60%、提取溫度70 ℃、提取時間60 min，西山委陵菜料液比1∶100、乙醇濃度60%、提取溫度70 ℃、提取時間70 min，翻白草料液比1∶100、乙醇濃度60%、提取溫度50 ℃、提取時間60 min。在各自相應(yīng)的最佳方案下提取得到的總黃酮含量依次為13.13、36.48和45.97 mg/g。西山委陵菜和翻白草葉中黃酮類成分更為豐富，是很好的藥用植物資源。

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Comparison of Total Flavonoids of Three Kinds ofPotentillaL. Plants in Shanxi

ZHENG Ming-lan

(Environmental Monitoring Station, Environmental Protection Bureau of Linfen, Linfen, Shanxi 041000)

[Objective] The aim was to study total flavonoids content in leaves of three species inPotentillaL. in Shanxi. [Method] The effects of solid-liquid ratio, ethanol concentration, extraction temperature and extraction time on the ultrasound-assisted extraction of total flavonoids from three species inPotentillaL. were investigated by orthogonal test with 4 factors and 3 levels. [Result] The optimal solutions were obtained for the extraction of total flavonoids. Under respective optimal solutions, the yields of total flavonoids fromP.chinensis,P.sischanensisandP.discolorwere 13.13, 36.48 and 45.97 mg/g, respectively. The contents of total flavonoids inP.sischanensisandP.discolorwere significantly higher than that inP.chinensis. [Conclusion] The flavonoids was richer inP.sischanensisandP.discolorleaves which were excellent medicinal plant resources.

P.chinensis;P.sischanensis;P.discolor; Total flavonoids; Orthogonal test; Content comparison

山西省自然科學(xué)基金項目(No2008011058-2)。

鄭明蘭(1973- )，女，山西臨汾人，工程師，從事環(huán)境污染物監(jiān)測研究。

2016-11-02

S 567.23+9

A

0517-6611(2016)35-0149-02