戚 游， 王 玉

?

血漿炎性因子變化與進(jìn)展性腦梗死關(guān)聯(lián)性的研究

戚 游1， 王 玉2

目的 探討血漿炎性因子與進(jìn)展性腦梗死之間的相關(guān)性。 方法 選擇2013年8月-2015年8月在我科治療的100例腦梗死患者，根據(jù)病情的發(fā)展分為兩個(gè)亞組：穩(wěn)定型腦梗死組和進(jìn)展性腦梗死組，檢測(cè)并比較兩組血漿(interleukin-6,IL-6)、(interleukin-8,IL-8)和(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平差異；根據(jù)病史、體檢、無創(chuàng)性檢查及腦梗死診斷和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),將進(jìn)展性腦梗死患者嚴(yán)重度分級(jí)為重度、中度和輕度，比較穩(wěn)定型腦梗死組和進(jìn)展性腦梗死組兩組之間及進(jìn)展性腦梗死不同等級(jí)之間IL-6、IL-8和TNF-α水平。結(jié)果 與穩(wěn)定型腦梗死組相比，進(jìn)展性腦梗死組IL-6、IL-8表達(dá)水平明顯高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；TNF-α表達(dá)水平兩組無明顯差異(P>0.05)；采用配對(duì)四格表的卡方檢驗(yàn)(McNemar檢驗(yàn))進(jìn)行分析，結(jié)果顯示重度、中度和輕度分組之間，IL-6、IL-8和TNF-α表達(dá)水平存在兩兩差異(P<0.05)，并隨著病情的加重逐步升高。結(jié)論 血漿炎性因子變化與進(jìn)展性腦梗死之間存在一定的關(guān)聯(lián)性，炎癥反應(yīng)可能參與了腦梗死進(jìn)展的病理生理機(jī)制。

血漿； 炎性因子； 進(jìn)展性腦梗死； 關(guān)聯(lián)性

急性腦梗死中急性進(jìn)展性腦梗死(acute progressive cerebral infarction,APCI)較為常見，且病死率較高，屬于急性腦梗死的一種臨床亞型，大約占據(jù)了腦梗死全部人數(shù)中的9.8%～43%[1]。進(jìn)展性腦梗死在發(fā)病以后，神經(jīng)功能缺失等癥狀呈現(xiàn)漸進(jìn)式的加重，這種情況會(huì)持續(xù)6 h到1 w[2,3]。急性進(jìn)展性腦梗死患者的致死率和致殘率都相對(duì)較高，屬難治性的腦血管病[4]，而目前有許多研究表示，進(jìn)展性腦梗死患者的血漿炎性因子水平與腦梗死的嚴(yán)重程度有一定的關(guān)系，但是尚未形成定論。

本研究選取在我院收治的2013年8月-2015年8月收治的腦梗死患者100例，通過血漿炎性因子的檢測(cè)探討血漿炎性因子水平變化和進(jìn)展性腦梗死之間的相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1 一般材料 100例腦梗死患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均符合參照2007年《中國(guó)腦血管病防治指南》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)如：①患者多數(shù)在靜態(tài)或動(dòng)態(tài)下急性起病，部分病例發(fā)病前可有(transient ischemic attack,TIA)發(fā)作;②病情多在幾小時(shí)或幾天內(nèi)達(dá)到高峰．部分患者癥狀可進(jìn)行性加重或波動(dòng);③患者有局灶性神經(jīng)功能缺損的癥狀和體征，如偏癱、偏身感覺障礙、失語，共濟(jì)失調(diào)等，部分可有頭痛、嘔吐、昏迷等全腦癥狀[5]。(2)頭部CT或MRI確診。(3)發(fā)病72 h內(nèi)入院。(4)(National Institute of Health Stroke Scale,NHISS)評(píng)分≤17分。(5)均行頸動(dòng)脈彩色多普勒超聲檢查。(6)性別不限，年齡40～75周歲。(7)自愿參與本研究，簽署知情同意書。(8)無近期使用維生素、未近期使用降脂藥物等影響脂質(zhì)代謝的藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)出血性腦梗死、無癥狀性腦梗死、動(dòng)脈炎、各種出凝血功能異常疾??；(2)顱腦損傷、腦腫瘤、腦寄生蟲病、心臟病導(dǎo)致的腦梗死；(3)急性感染、外傷及其他應(yīng)激情況；(4)合并肝腎功能不全、免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾??；(5)過敏體質(zhì)及對(duì)本試驗(yàn)用藥組成成分過敏者；(6)合并近期有消化道潰瘍出血、嚴(yán)重的心律失常、未控制的高血壓及其他重要器官嚴(yán)重疾??；(7)近期使用抗凝、抗血小板治療者；(8)正在參與其他臨床試驗(yàn)或采用其他藥物治療者。剔除脫落或中途退出的病例、不符合納入及排除標(biāo)準(zhǔn)的病例。

分組：參考2004歐洲進(jìn)展性卒中研究[6](the European Pro-gressing Stroke Study,EPSS)提出的進(jìn)展性卒中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。入選患者采用斯堪的那維亞卒中量表(Scandinavian Stroke Scale,SSS )作為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，由同一醫(yī)師操作，分別在入院時(shí)、發(fā)病72 h以及1 w內(nèi)病情變化的任意時(shí)刻的神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)估。其中早發(fā)進(jìn)展性卒中(Early Pro-gressing Stroke,EPS)指發(fā)病72 h內(nèi)有神經(jīng)系統(tǒng)損害進(jìn)行性加重，晚發(fā)進(jìn)展性卒中(Late Pro-gressing Stroke,LPS)指發(fā)病第4天至第7天有神經(jīng)系統(tǒng)損害進(jìn)行性加重。發(fā)病72 h 內(nèi)或1 w內(nèi)任何兩次評(píng)估的評(píng)分中意識(shí)水平、上肢、下肢或眼球運(yùn)動(dòng)降低≥2分，和(或)語言功能降低≥3分，或者在發(fā)病72 h內(nèi)死亡者，入進(jìn)展組，否則入非進(jìn)展組。將符合條件的患者按照不同診斷結(jié)果分為穩(wěn)定型腦梗死組62例和進(jìn)展性腦梗死組38例，再根據(jù)高級(jí)中樞損傷嚴(yán)重程度評(píng)定(Modified Edinburgh-Scandinavian Stoke Scale,MESSS)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，此表最高分45分，最低分0分，(0～15 分)為輕度進(jìn)展；(16～30 分)為中度進(jìn)展；(31～45 分)為重度進(jìn)展[7]。將進(jìn)展性腦梗死組腦梗死患者按嚴(yán)重度分為重度、中度和輕度3個(gè)亞組，分別為6例、11例和21例。所有患者的基本資料情況如下文2.1所述。

1.2 炎性因子檢測(cè) 收集血液標(biāo)本的情況，所有研究對(duì)象均于發(fā)病后第一天早晨7：00，空腹時(shí)采集靜脈血3 ml，置于試管中，經(jīng)3000 r/min離心10 min，分離血清后轉(zhuǎn)人Eppendorf管，低溫(-20 ℃)保存待檢測(cè)。同時(shí)采用常規(guī)方法檢測(cè)患者的血糖、血脂等。本試驗(yàn)中主要檢測(cè)的血清指標(biāo)包括：TNF-α、IL-6、IL-8，采用酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法測(cè)定，采用Takara公司的實(shí)時(shí)熒光定量(polymerase chain reaction,PCR)試劑盒SYBR Premix Ex Taq，應(yīng)用Applied Biosystems 7500 Real-Time(polymerase chain reaction,PCR)System，采用U6基因作為內(nèi)參基因?qū)λ鶞y(cè)因子進(jìn)行相對(duì)定量(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)分析。反應(yīng)條件：95 ℃變性15 s，65 ℃退火15 s，72 ℃ 熒光檢測(cè)32 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)[8]。循環(huán)結(jié)束后，65 ℃～95 ℃繪制溶解曲線，每個(gè)樣品重復(fù)3次，通過MxProv4軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。用滅菌的超純水代替(complementary deoxyribonucleic acid,cDNA)模板作為空白對(duì)照，樣品目的基因的相對(duì)表達(dá)率(relative expression，RQ)采用2-△△CT(CT表示反應(yīng)的實(shí)時(shí)熒光強(qiáng)度顯著大于背景值時(shí)的循環(huán)數(shù))的方法計(jì)算。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，兩組之間的數(shù)據(jù)比較應(yīng)用卡方t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 基線分析 所有入組人群的年齡從40～75歲，平均年齡為(57.01±13.24)歲。穩(wěn)定型腦梗死組62例，男，32例,女，30例；平均年齡為(56.24±11.23)歲；吸煙者35例，其中合并高血壓病33例，高血脂20例，糖尿病13例。進(jìn)展性腦梗死組38例，男，21例，女，17例；平均年齡為(55.21±15.04)歲；吸煙者27例，其中合并高血壓病25例，高血脂17例，糖尿病11例。按照高級(jí)中樞損傷嚴(yán)重程度評(píng)定-MESSS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，并將進(jìn)展性腦梗死組中的重、中、輕組中患者的臨床基本特征情況列舉如下：重度進(jìn)展性腦梗死組中有男性患者4例，女性患者2例，合并高血壓病4例，高血脂3例，糖尿病3例；中度組中男性患者7例，女性患者4例，合并高血壓病7例，高血脂3例，糖尿病3例；輕度組中男性患者12例，女性患者9例，合并高血壓病9例，高血脂7例，糖尿病2例。所有組別的年齡、性別、吸煙人數(shù)、合并癥狀例數(shù)相比沒有明顯差異，具有可比性(P>0.05)(見表1)。

2.2 進(jìn)展性腦梗死組與穩(wěn)定型腦梗死組的炎性因子表達(dá)對(duì)比 與穩(wěn)定型腦梗死組相比，進(jìn)展性腦梗死組IL-6、IL-8表達(dá)水平明顯增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；TNF-α表達(dá)水平兩組無明顯差異(P>0.05)(見表2)。

2.3 不同程度的進(jìn)展性腦梗死組的炎性因子表達(dá)對(duì)比 采用配對(duì)四格表的卡方檢驗(yàn)(McNemar檢驗(yàn))進(jìn)行數(shù)據(jù)結(jié)果分析顯示，不同重度、中度和輕度分組之間，IL-6、IL-8和TNF-α表達(dá)水平存在兩兩差異(P<0.05)，病情越重，IL-6、IL-8和TNF-α表達(dá)水平增高越明顯(見表3)。

表1 兩組患者臨床基本特征情況

表2 進(jìn)展性腦梗死組與穩(wěn)定型腦梗死組的炎性因子表達(dá)對(duì)比

與穩(wěn)定型腦梗死組相比，有顯著差異△P<0.05

表3 不同程度的進(jìn)展性腦梗死組的炎性因子表達(dá)對(duì)比

與中度組相比，有顯著差異△P<0.05；與輕度組相比，有顯著差異*P<0.05

3 討 論

隨著我國(guó)人均預(yù)期壽命的延長(zhǎng)和人口老齡化速度的加快，腦梗死的發(fā)病率逐漸增高具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重的特點(diǎn)[9]。 有大量研究認(rèn)為腦梗死由于局部腦組織的血液循環(huán)障礙，導(dǎo)致缺血和缺氧，從而使得腦組織軟化壞死。當(dāng)前的研究結(jié)果顯示，供應(yīng)腦部血液的動(dòng)脈出現(xiàn)粥樣硬化以及血栓形成，使得管腔狹窄以及閉塞，使得局灶性急性腦供血不足而發(fā)病，但是也會(huì)因?yàn)樗ㄗ友刂貉h(huán)進(jìn)入腦動(dòng)脈或者供應(yīng)腦血液循環(huán)的頸部動(dòng)脈，造成血流阻斷或者血流量驟減，并導(dǎo)致相應(yīng)支配區(qū)域的腦組織軟化壞死。

腦動(dòng)脈粥樣硬化是腦梗死的重要基本原因之一[10]，動(dòng)脈硬化是一種慢性炎癥病變,有多種炎癥因子,如高敏 C-反應(yīng)蛋白、腫瘤壞死因子、白介素、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子、尿酸等在急性腦梗死中升高,檢測(cè)這些炎性因子,可以作為判斷腦梗死病情、預(yù)后的預(yù)測(cè)因子[11,12]，并為探索阻抑腦梗死發(fā)病、進(jìn)展的治療方法提供參考。

腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)可分為TNF- α和TNF-β兩種，前者來自單核巨噬細(xì)胞，后者由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，是具有重要生物活性的細(xì)胞因子，腦梗死后TNF-α的表達(dá)顯著性升高，并可以激活(P38 mitogen protein kinase,P38 MAPK)通路路徑的下游，細(xì)胞內(nèi)鈣含量的上升乃至于超載最終會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷，破壞神經(jīng)細(xì)胞質(zhì)膜功能，影響神經(jīng)細(xì)胞蛋白的合成以及神經(jīng)塑性，干擾神經(jīng)細(xì)胞正常發(fā)育，并且抑制神經(jīng)細(xì)胞線粒體功能的發(fā)揮，最終導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡。P38 MAPK激活之后，能夠起到的生物學(xué)作用非常多，包括了對(duì)TNF-α、IL-1β及IL-6等，從而容易導(dǎo)致白細(xì)胞的聚集以及激活。在腦梗死之后，在腦缺血核心區(qū)域的巨噬細(xì)胞細(xì)胞之中，可以明顯的發(fā)現(xiàn)激活之后的P38 MAPK，這提示P38 MAPK可能會(huì)直接參與到腦缺血損傷之后的炎性反應(yīng)之中來[13,14]。據(jù)此，可以推測(cè)炎性因子表達(dá)水平與進(jìn)展性腦梗死的嚴(yán)重程度以及發(fā)展可能也有一定的關(guān)系。本文研究結(jié)果顯示，與穩(wěn)定型腦梗死組相比，進(jìn)展性腦梗死組IL-6、IL-8表達(dá)水平明顯增高， 且IL-6、IL-8和TNF-α表達(dá)水平與進(jìn)展性腦梗死的梗死程度(重度、中度和輕度)密切相關(guān)，梗死分級(jí)越重則IL-6、IL-8和TNF-α表達(dá)水平越高，提示這些炎性因子參與了腦梗死進(jìn)展的病理生理過程中。

綜上，血漿炎性因子變化與進(jìn)展性腦梗死之間存在著密切的關(guān)聯(lián)性，對(duì)此進(jìn)一步的探索將為進(jìn)展性腦梗死的病理生理機(jī)制和干預(yù)治療研究思路提供新的依據(jù)。

[1]Audebert HJ,Pellkofer TS,WImmer ML,et al.Progression in lacunar stroke is related to elevated acute phase parameters[J].Eur Neurol,2004,51(3):125-131.

[2]楊 磊,胡文立.應(yīng)該規(guī)范進(jìn)展性卒中的定義[J].中華神經(jīng)科雜志,2011,44(4):292-293.

[3]劉國(guó)鋒,徐文儉,鄭建新.進(jìn)展性腦梗死危險(xiǎn)因素Logistic回歸分析[J].中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志,2009,12(11):8-11.

[4]楊秀平,袁建新,何洪濤.進(jìn)展性腦梗死的影響因素[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2013,33(6):1387-1388.

[5]衛(wèi)生部疾病控制司,中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì).中國(guó)腦血管病防治指南(節(jié)選),第二節(jié)腦梗死[J].中國(guó)現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志,2007,7(2):200.

[6]Birschel P,Ellul J,Barer D,et al.Progressing stroke :towards an internationally agreed definition[J].Cerebrovase Dis,2004,17(2/3):242-252.

[7]李春生,高艷紅,胡法富,等.疏血通注射液聯(lián)合依達(dá)拉奉治療急性進(jìn)展性腦梗死臨床研究[J].中國(guó)醫(yī)療前沿,2010，5(11):55-56.

[8]肖 戈.miR-205抑制腎上腺皮質(zhì)癌的體內(nèi)研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2013.

[9]黃海濤,林 敏,錢 琦.3D ASL在急性腦梗死模型評(píng)估中的研究進(jìn)展[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2016,14(2):150-152.

[10]黃華錳,鄧偉華,潘小平.進(jìn)展性腦梗死患者的炎癥因子變化[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊,2014,41(3):34-35.

[11]景麗英,景麗麗,劉 敏.缺血性腦卒中神經(jīng)功能缺損與炎癥因子的相關(guān)性[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué),2013,3(6):215-216.

[12]劉愛菊.腦梗死后炎性因子的動(dòng)態(tài)變化研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2012,39(19):5111-5115.

[13]Ikhlas,Karim El,Maeliosa TC,et al.TNF-α-induced p38MAPK activation regulates TRPA1 and TRPV4 activity in odontoblast-like cells[J].Am J Pathol,2015,185(11):2994-3002.

[14]Seghaye MC.Myocardial remodeling in pediatric congenital cardiac diseases[J].Revue medicale de Lieage,2014,69:3-7.

A study on the correlation between the changes of plasma inflammatory factors and progressive cerebral infarction

QIYou,WANGYu.

(DepartmentofNeurology,ThefirstaffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230022,China)

Objective This paper is intended to investigate the correlation between the changes of plasma inflammatory factor levels and progression of cerebral infarction.Methods 100 cerebral infarction patients hospitalized in our department from August,2013 to August,2015 were enrolled in this study.Patients were divided into two groups,basing on the progression of the conditions of the cerebral infarction,the stable cerebral infarction group and progressive cerebral infarction group.Serum concentrations of IL-6 and IL-8 and TNF-α were measured and compared between two groups.According to the history,physical examination,non-invasive examination and diagnosing and classification criteria of cerebral vascular disease,progressive cerebral infarction were classified as mild,moderate and severe in severity.The levels of serum IL-6,IL-8 and TNF-α were compared among the three subgroups,mild,moderate and severe subgroups.Results Compared with the stable cerebral infarction group,IL-6 and IL-8 levels were significantly higher in the progressive cerebral infarction group (P<0.05) ;but there was no significant difference in TNF-α level between the two groups (P>0.05).Paired fourfold table card party test (McNamara test) for data analysis showed significant differences in IL-6 and IL-8 and TNF-α levels among the mild,moderate and severe subgroups of progressive cerebral infarction group,and the levels of IL-6 and IL-8 and TNF-α were positively related with the severity of the progressive cerebral infarction (P<0.05).Conclusion Serum inflammatory factors changes are correlated with the progression of cerebral infarction,and inflammatory responses may take part in the pathoohysiology of progressive cerebral infarction.

Serum； Inflammatory factors； Progressive cerebral infarction； Correlation

1003-2754(2016)12-1087-04

2016-08-12；

2016-11-29 基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81271444) 作者單位：(1.六安市第二人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，安徽 六安 237008；2.安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，安徽 合肥 230022) 通訊作者：王 玉，E-mail：yw4d@hotmail.com

R743.3

A