孫 巍 王曉華 栗 莉

（吉林省四平市中心人民醫(yī)院血液科，吉林 四平 136000）

WT1基因在急性白血病中的水平觀察

孫 巍 王曉華 栗 莉

（吉林省四平市中心人民醫(yī)院血液科，吉林 四平 136000）

目的探討腎母細(xì)胞瘤基因（WT1基因）在急性白血病中的水平變化情況。方法回顧性分析2013年12月至2016年12月本院收治的102例急性白血病患者的一般資料，所有患者均經(jīng)臨床檢查確診，并自愿簽署知情同意書。其中，66例為急性髓細(xì)胞性白血病，36例為急性淋巴細(xì)胞白血病。檢測(cè)102例急性白血病患者的WT1基因表達(dá)水平。結(jié)果急性髓細(xì)胞性白血病患者WT1基因表達(dá)陽(yáng)性表達(dá)率為77.3%（51/66），急性淋巴細(xì)胞白血病患者WT1基因表達(dá)陽(yáng)性表達(dá)率為88.9%（32/36）在陽(yáng)性表達(dá)上無(wú)顯著性差異（Pgt;0.05）；M1型急性髓細(xì)胞性白血病患者WT1基因表達(dá)水平最高，M3型較低，各亞型相比，結(jié)果有顯著性差異（Plt;0.05）。結(jié)論急性白血病患者WT1基因表達(dá)水平異常增高，且與急性白血病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系，便于評(píng)估白血病病情進(jìn)展和治療效果，值得進(jìn)行深入研究和推廣。

急性白血病；WT1基因；表達(dá)水平

腎母細(xì)胞瘤基因（Wilm's tumor I gene ，WT1基因）主要定位于人類染色體11p13，最早是作為腎母細(xì)胞瘤的抑癌基因被發(fā)現(xiàn)的。近年來(lái)，有研究認(rèn)為，WT1基因可能是潛在的白血病相關(guān)分子[1]。也會(huì)學(xué)者認(rèn)為，WT1基因可能作為調(diào)控造血細(xì)胞增生的轉(zhuǎn)錄抑制劑或分化基因的激活劑，在急性白血病的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中發(fā)揮著重要的作用[2]。但是，當(dāng)前臨床上針對(duì)WT1基因在急性白血病中的表達(dá)水平變化的研究仍較少[3]。本研究以102例急性白血病患者為研究對(duì)象，探討WT1基因表達(dá)水平變化情況及臨床意義，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：回顧性分析2013年12月至2016年12月本院收治的102例急性白血病患者的一般資料，所有患者均經(jīng)血象檢查、染色體檢查、免疫分型等臨床檢查確診。102例患者中，男59例，女43例；年齡12～65歲，平均年齡（45.3±2.4）歲；按照《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[4]分型：66例為急性髓細(xì)胞性白血病，3例M1，18例M2，27例M3，10例M4，8例M5；36例為急性淋巴細(xì)胞白血病。本研究排除含其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病的患者。

1.2 方法：①試劑：本研究所用試劑包括熒光定量PCR反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系、淋巴細(xì)胞分離液等。②提取單個(gè)核細(xì)胞RNA：取患者5 mL外周血，以肝素做抗凝處理，以0.9%氯化鈉溶液5 mL稀釋，堅(jiān)持無(wú)菌操作，在5 mL淋巴細(xì)胞分離液上平鋪，進(jìn)行15 min離心處理，吸取白膜層，置入另一根離心管，洗滌2次，進(jìn)行10 min離心處理。去除上清液，置于-80 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。按照儀器操作使用說(shuō)明書提取RNA，以紫外線分光光度儀檢測(cè)RNA量和純度。③PCR擴(kuò)增：本研究所使用的WT1基因引物由中國(guó)科學(xué)院合成，481 bp為主要擴(kuò)增產(chǎn)物，以β-actin為內(nèi)參基因，以240 bp為過(guò)增產(chǎn)物，應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，在5×緩沖液5 μL中加入1 μg PNA，確?；旌弦汗?.5 μL，加入雙蒸水以后，確?？傮w積為25 μL。PCR擴(kuò)增完成后，取0.5 μL PCR產(chǎn)物，融入1.3%瓊脂糖凝膠，進(jìn)行電泳，以GDS 8000凝膠成像分析儀進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：將收集到的數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料，用（-x±s）表示計(jì)量資料，以t檢驗(yàn)，以Plt;0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 急性白血病患者WT1基因變化情況：急性髓細(xì)胞性白血病患者WT1基因陽(yáng)性表達(dá)率為77.3%（51/66）。其中，2例M1，8例M2，12例M3，15例M4，14例M5。急性淋巴細(xì)胞白血病陽(yáng)性率為88.9%（32/36）。急性髓細(xì)胞性白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病在陽(yáng)性表達(dá)上無(wú)顯著性差異（Pgt;0.05）。

2.2 WT1基因表達(dá)水平在急性髓細(xì)胞性白血病亞型中的差異：急性髓細(xì)胞性白血病患者M(jìn)1型、M2型、M3型、M4型、M5型WT1基因表達(dá)水平分別為（-1.216±0.081）、（-1.390±0.053）、（-0.614±1.000）、（-0.840±0.308）、（-0.666±0.626）。其中，M1型WT1基因表達(dá)水平最高，M3較低，結(jié)果有顯著性差異（Plt;0.05）。

3 討 論

WT1基因是自Wilms瘤細(xì)胞中分離出來(lái)的，在Wilms瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。WT1基因主要表達(dá)在胚胎發(fā)生過(guò)程中，且直接影響著患者泌尿生殖系統(tǒng)的發(fā)育。對(duì)成人來(lái)說(shuō)，WT1基因僅少量表達(dá)在子宮內(nèi)膜、卵巢、脾臟、睪丸、腎臟及正常的造血細(xì)胞中[5]。但是，WT1基因在人類白血病細(xì)胞中的表達(dá)水平較高，能直接影響白血病細(xì)胞的增殖和分化過(guò)程，在白血病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。

對(duì)WT1基因結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析可知，WT1基因外顯子共10個(gè)，長(zhǎng)度約為50 kb，mPNA約為2.9 kb，蛋白質(zhì)含2個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，DNA結(jié)合功能區(qū)是羧基末端，鋅指結(jié)構(gòu)共4個(gè)，類似于早期生長(zhǎng)反應(yīng)1的相應(yīng)鋅指結(jié)構(gòu)[6]。WT1基因可結(jié)合血小板源生長(zhǎng)因子2A、胰島素樣生長(zhǎng)因子2Ι等生長(zhǎng)因子基因相應(yīng)的DNA，且能調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。

WT1基因?yàn)殡p向轉(zhuǎn)錄因子，具有雙重作用，即抑癌和致癌。WT1基因在造血系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)生過(guò)程中，能發(fā)揮一定的轉(zhuǎn)錄抑制因子作用，阻滯造血干細(xì)胞的正常分化，促使惡性腫瘤發(fā)生。此外，在多種因素的共同影響下，WT1基因會(huì)出現(xiàn)致點(diǎn)突變或缺失，導(dǎo)致其喪失正常的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能，致使細(xì)胞過(guò)度增殖，也會(huì)導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生。臨床上多項(xiàng)研究顯示，WT1基因表達(dá)水平異常增高與造血惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系。因此，將WT1基因作為泛白血病的標(biāo)志，用來(lái)檢測(cè)臨床疾病、評(píng)估治療效果和預(yù)后，有著重要的意義。

當(dāng)前，臨床上已有多項(xiàng)研究證實(shí)急性白血病患者WT1基因表達(dá)水平異常增高，但對(duì)急性白血病進(jìn)行分型，具體探討急性髓細(xì)胞性白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病陽(yáng)性率的研究仍較少。本研究結(jié)果顯示，急性髓細(xì)胞性白血病患者WT1基因陽(yáng)性表達(dá)率為77.3%（51/66），急性淋巴細(xì)胞白血病陽(yáng)性率為88.9%（32/36），陽(yáng)性表達(dá)上無(wú)顯著性差異（Pgt;0.05）。這可能是與患者疾病分布差異較大，以及本研究所采用的樣本數(shù)量較少有關(guān)。此外，M1型急性髓細(xì)胞性白血病患者WT1基因表達(dá)水平最高，M3較低，結(jié)果有顯著性差異（Plt;0.05）。這可能是因?yàn)楸狙芯克捎玫臉颖緮?shù)量較少，存在不典型病例，導(dǎo)致檢查結(jié)果存在一定偏差。

綜上所述，急性白血病患者WT1基因表達(dá)水平增高，且與急性白血病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系，便于評(píng)估白血病病情和治療效果，值得進(jìn)行深入研究和推廣。

[1]劉青,蔣慧,楊永臣.WT1、PRAME和ERG基因在兒童急性白血病中的表達(dá)[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2013,33(6):801-805+817.

[2]王旭莉,柴憶歡,胡紹燕,等.WT1基因在急性白血病患兒中的表達(dá)及其臨床意義[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2010,25(3):167-169.

[3]曾春梅,冉學(xué)紅,趙莎莎,等.WT1基因在急性白血病患者中的表達(dá)及其臨床意義[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2011,27(7):974-976.

[4]李曉云,張劍,徐萍,等.WT1基因在骨髓增生異常綜合征及急性白血病中的表達(dá)與臨床相關(guān)性研究[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,47(6):526-528.

[5]張團(tuán)結(jié),鄧寬國(guó),孫征.WT1基因在急性白血病患者中的表達(dá)及臨床意義[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2014,12(20):81-83.

[6]劉華勝,朱明山,張海玲,等.WT1基因在白血病與非白血病中的表達(dá)差異及其臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2014,22(5):1217-1221.

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1671-8194（2017）33-0196-02