趙 利，陳紅娟

(1.扶風(fēng)縣中醫(yī)醫(yī)院，陜西 寶雞722200;2.扶風(fēng)縣婦幼保健醫(yī)院)

試劑交叉污染對(duì)生化分析儀測(cè)定總膽汁酸的影響

趙 利1，陳紅娟2

(1.扶風(fēng)縣中醫(yī)醫(yī)院，陜西 寶雞722200;2.扶風(fēng)縣婦幼保健醫(yī)院)

目的:分析生化分析儀測(cè)定總膽汁酸產(chǎn)生試劑交叉污染的原因，并提出相應(yīng)的對(duì)策。方法:隨機(jī)選取混合血清標(biāo)本，采用交叉污染的項(xiàng)目篩選方法，對(duì)總膽汁酸測(cè)定干擾項(xiàng)目進(jìn)行篩查，并分析生化分析儀試劑間交叉污染對(duì)總膽汁酸測(cè)定的影響。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目中甘油三酯、尿酸、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇及總膽固醇5個(gè)項(xiàng)目對(duì)總膽汁酸(total bile acid，TBA)的測(cè)定有干擾(P＜0.05)，通過(guò)設(shè)置特殊清洗程序后，各組的交叉污染能被有效消除，與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論:在進(jìn)行總膽汁酸測(cè)定時(shí)，應(yīng)盡量避免試劑間的交叉污染，減少測(cè)定結(jié)果的干擾，加強(qiáng)儀器維護(hù)，通過(guò)特殊清洗程序，減少測(cè)定結(jié)果影響因素。

試劑交叉污染;生化分析儀;總膽汁酸

總膽汁酸(total bile acid，TBA)作為膽固醇的代謝物，是膽汁的主要成分［1］。TBA是一項(xiàng)十分敏感的肝功生化指標(biāo)，通過(guò)測(cè)定TBA，能夠有效的獲得肝臟病變的相關(guān)信息。全自動(dòng)生化分析儀是一種檢測(cè)分析生命化學(xué)物質(zhì)的儀器，具有快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、微量并能同時(shí)檢測(cè)多項(xiàng)指標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的檢驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)工作中，TBA就是常用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)分析的化學(xué)成分之一［2］。然而，在日常檢驗(yàn)工作中，筆者發(fā)現(xiàn)TBA的測(cè)定會(huì)由于多種因素干擾，導(dǎo)致其分析結(jié)果出現(xiàn)偏高現(xiàn)象。為了尋找其出現(xiàn)的原因及有效的解決方法，我們采用OLYMPUS AU 400全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行了一系列相關(guān)實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 試劑 總膽汁酸(total bile acid，TBA)酶循環(huán)法測(cè)定，高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)直接法測(cè)定，低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)直接法測(cè)定，總蛋白(total protein，TP)雙縮脲法測(cè)定，白蛋白(albumin，ALB)透射比濁法測(cè)定，總膽紅素(total bilirubin，TBIL)釩酸氧化法測(cè)定，直接膽紅素(bilirubin direct，DBIL)釩酸氧化法測(cè)定，肌酐(creatinine，CREA)苦味酸法測(cè)定，總膽固醇(total cholesterol，TCHOL)酶比色法測(cè)定，甘油三酯(triglyceride，TG)酶比色法測(cè)定，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine amino transferase，ALT)連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定，天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate amino transferase，AST)連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定，載脂蛋白A/B(apolipoprotein A/B，ApoA/B)免疫透射比濁法測(cè)定，葡萄糖(glucose，GLU)己糖激酶法測(cè)定，尿酸(uric acid，UA)酶比色法測(cè)定，γ-谷胺酰轉(zhuǎn)移酶(γ -glutamyl transferase，γ-GT)速率法測(cè)定，測(cè)定所用試劑均購(gòu)自上海豐匯生物研究有限公司，均采用OLYMPUS AU 400全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行分析檢測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 干擾項(xiàng)目篩查 將無(wú)溶血、無(wú)乳濁及無(wú)黃疸的新鮮血清充分混合后在無(wú)污染的條件下連續(xù)測(cè)定血清TBA濃度10次作為對(duì)照管。實(shí)驗(yàn)管用同一份血清，分別進(jìn)行HDL-C、LDL-C、TP、ALB、TBIL、DBIL、CREA、TCHOL、TG、AST、ALT、ApoA/B、GLU、UA、γ-GT等生化檢測(cè)項(xiàng)目，并逐一與TBA配對(duì)測(cè)定10次(先進(jìn)行測(cè)定常規(guī)生化檢測(cè)項(xiàng)目，再進(jìn)行TBA測(cè)定)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析篩查發(fā)現(xiàn)干擾項(xiàng)目。

1.2.2 交叉污染的試劑確認(rèn) 將0.8 mL混合血清與0.2 mL生理鹽水混合作為對(duì)照管，分別用0.8 mL的混合血清與0.2 mL TG、UA、HDL-C、LDL-C及TCHOL試劑的R1、R2混合作為實(shí)驗(yàn)管(TG與TCHOL均無(wú)R2試劑)，每份樣本重復(fù)進(jìn)行10次TBA濃度測(cè)定，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.2.3 交叉污染的影響因素 實(shí)驗(yàn)管利用儀器自帶的防交叉污染清洗程序，在測(cè)定TG、UA、HDL-C、LDL-C及TCHOL后，用堿性洗液清洗比色杯及吸樣針后，再行測(cè)定TBA濃度10次，并將測(cè)定結(jié)果與對(duì)照管比對(duì)，觀(guān)察交叉污染的情況是否依然存在。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 干擾項(xiàng)目篩查實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)管中TG、UA、HDLC、LDL-C、TCHOL檢測(cè)后血清 TBA測(cè)定值分別為(17.55±0.38)(22.17±0.54)、(37.28±1.37)、(36.84 ±1.27)、(19.65±0.46)μmol/L，與對(duì)照管中TBA測(cè)定值(13.34±0.33)μmol/L比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，即此5個(gè)項(xiàng)目對(duì)TBA測(cè)定有干擾。

2.2 交叉污染的試劑確認(rèn)結(jié)果 對(duì)TG、UA、HDL-C、LDL-C及TCHOL5個(gè)項(xiàng)目的試劑R1和R2進(jìn)行干擾試劑確認(rèn)，見(jiàn)表1。

表1 5種試劑中TBA的測(cè)定值

2.3 設(shè)置特殊清洗 設(shè)置特殊清洗程序后，各組的交叉污染能被有效消除，實(shí)驗(yàn)管中TG、UA、HDL-C、LDL-C、TCHOL檢測(cè)后血清TBA測(cè)定值分別為(13.03±0.30)、(12.87±0.26)、(13.11±0.28)、(12.93±0.35)、(13.29±0.17)μmol/L，與對(duì)照管中TBA測(cè)定值(13.34 ±0.33)μmol/L比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，即通過(guò)防交叉污染清洗程序可以有效避免試劑間出現(xiàn)交叉感染。

3 討論

隨著全自動(dòng)生化分析儀及測(cè)定試劑盒的廣泛使用，給日常的檢驗(yàn)工作帶來(lái)了極大的便利［3，4］。但在試劑操作中，試劑間的交叉污染的現(xiàn)象卻難以避免，影響了檢測(cè)結(jié)果的同時(shí)，也給工作帶來(lái)了不小的麻煩［5］。通常試劑間交叉污染的原因主要來(lái)自于3個(gè)方面:(1)由于設(shè)備的長(zhǎng)期使用，造成對(duì)吸樣針、攪拌棒、比色杯的清洗能力下降，從而因上述部件的試劑殘留造成污染;(2)某種試劑中恰好含有下一個(gè)要檢測(cè)項(xiàng)目的底物，結(jié)果使得該試劑的成分同樣被當(dāng)做底物測(cè)定出來(lái)，測(cè)定值加成于下一組檢測(cè)項(xiàng)上，造成試劑間的交叉污染;(3)某種試劑中所含物質(zhì)對(duì)下一組的檢測(cè)項(xiàng)目的反應(yīng)進(jìn)程有所影響，從而帶來(lái)間接干擾。

本研究表明，本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目中TG、UA、HDL -C、LDL-C及TCHOL5個(gè)項(xiàng)目對(duì)TBA的測(cè)定有干擾，因此，在進(jìn)行分析儀參數(shù)設(shè)定時(shí)，應(yīng)將上述5種項(xiàng)目設(shè)定在總膽汁酸項(xiàng)目測(cè)定后，若不可避免的設(shè)定總膽汁酸測(cè)定之間，則可以采用特殊清洗的方法，對(duì)比色杯和吸樣針進(jìn)行清洗，盡量避免試劑間出現(xiàn)交叉感染的情況。

綜上所述，在進(jìn)行總膽汁酸測(cè)定時(shí)，應(yīng)盡量避免試劑間的交叉污染，減少測(cè)定結(jié)果的干擾，加強(qiáng)儀器維護(hù)，通過(guò)特殊清洗程序，減少測(cè)定結(jié)果影響因素。

［1］ 文春蓉，渠巍，趙勝兵.血清甘膽酸測(cè)定在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥中的臨床意義［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2011，27 (14):2104-2106.

［2］ 余書(shū)武，王霞.生化試劑污染對(duì)全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)結(jié)果的影響和分析［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(24): 3403-3404.

［3］ 鄧述歡.膽固醇對(duì)總膽汁酸在自動(dòng)分析中是否存在交叉污染的探討［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(5):604-605.

［4］ 孫金蓮.試劑交叉污染對(duì)血清總膽汁酸測(cè)定結(jié)果的影響［J］.臨床合理用藥雜志，2012，5(28):133-134.

［5］ 呂偉標(biāo)，黃倩婷，賈璋林，等.常用生化試劑間交叉污染調(diào)查及測(cè)試順序的研究［J］.海南醫(yī)學(xué)，2011，1(6):100-102.

2015-07-07)