程云鋒
(枝江市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督局,湖北枝江 443200)
沙門氏菌病
——雞白痢研究概述
程云鋒
(枝江市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督局,湖北枝江 443200)
雞白痢沙門氏菌病——雞白痢是造成養(yǎng)禽業(yè)嚴(yán)重危害的一種細(xì)菌性疾病,因其傳播范圍大,根除凈化難,特別又具有垂直傳播的特點(diǎn),所以在養(yǎng)禽業(yè)的過程中,備受人們的關(guān)注。本文就雞白痢沙門氏菌病的病原學(xué)、流行病學(xué)、病理學(xué)、致病機(jī)理、診斷學(xué)及防控方面做出概述。
沙門氏菌 雞白痢 流行 防治
雞白?。≒ullorum disease)是由雞白痢沙門氏(Salmonella pullorum)引起的禽類感染。為國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生組織法定報(bào)告的B類傳染病,是我國(guó)農(nóng)業(yè)部要求重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的十四種動(dòng)物疫病之一。由于本病具有垂直傳播的特點(diǎn),所以由于雞場(chǎng)的凈化措施不夠嚴(yán)格,從而導(dǎo)致雛雞發(fā)病。所以雛雞白痢是育雛期最先遇到的傳染疾病,3周齡以內(nèi)雛雞發(fā)病死亡率較高,其傳播途徑廣、污染面積大;對(duì)育成雞則造成貧血、消瘦,有時(shí)也發(fā)生急性敗血癥。雞白痢對(duì)養(yǎng)雞造成巨大的危害。
雞白痢的病原菌為雞白痢沙門氏菌,屬腸桿菌科,具有高度的專一宿主適應(yīng)性,為兩端鈍圓的細(xì)長(zhǎng)桿菌,對(duì)一般堿性的苯胺染料著色良好,革蘭氏陰性。菌體單獨(dú),極少見兩菌以上的長(zhǎng)鏈。在抹片中偶然可見長(zhǎng)絲狀或大型菌體。不能運(yùn)動(dòng),不液化明膠,并且沒有色素產(chǎn)生,為沒有芽孢的兼性厭氧菌。本菌抵抗力強(qiáng),室溫下本菌至少可生存7d之久,在被污染的土壤內(nèi)毒力可保持14個(gè)月,雞糞懸液中可存活3月以上。本菌的抗原結(jié)構(gòu)不同,抗原型上存在變異。其抗原型的變異主要表現(xiàn)在抗原型122與123上。
沙門氏菌的H抗原對(duì)熱不穩(wěn)定,而O抗原對(duì)熱穩(wěn)定,一個(gè)菌體具有多個(gè)不同的O抗原雞白痢沙門氏菌O抗原和腸炎沙門氏菌O抗原是完全一致的??乖Y(jié)構(gòu)為1、9、12,因此,可用提純的多糖抗原進(jìn)行敏感的ELISA試驗(yàn),從而可快速準(zhǔn)確的提供一種血清學(xué)診斷方法。
2.1 傳染來(lái)源
由于本病能夠垂直傳播,所以經(jīng)種蛋傳遞是本病傳播的主要途徑。感染雞常為永久帶菌者,產(chǎn)出被感染了的受精蛋,孵出患白痢的雛雞?;疾⌒掖娴碾r雞及同群無(wú)臨床癥狀的雛雞,長(zhǎng)大后有高比率的帶菌者可達(dá)85%以上。病雞排除糞便,污染周圍水源、飼料及用具,從而造成環(huán)境的污染,即使健康的雛雞在污染的環(huán)境中也可感染本病。
2.2 易感日齡
3周齡以內(nèi)的雛雞極易發(fā)病,從10周齡開始,機(jī)體對(duì)本病的抵抗力逐漸上升。育成雞階段,由于環(huán)境、氣候、營(yíng)養(yǎng)等應(yīng)激因素的存在,發(fā)病年齡以50~80日齡多發(fā),這樣的雞群往往是發(fā)生過雞白痢而被控制的病史,由于應(yīng)激,而再次發(fā)病。
2.3 傳播方式和感染途徑
傳播方式主要是通過種蛋傳播,但環(huán)境及飼料飲水的污染可以通過消化道黏膜而感染,并且可以通過破損的傷口傳染,特別是在斷喙時(shí),由于斷喙工具的污染及環(huán)境的污染,從而可以使健康的雞群得病。
雛雞發(fā)生白痢常見的臨床病癥有三型:急性敗血型、關(guān)節(jié)炎型和神經(jīng)型。病雛表現(xiàn)為嗜睡、虛弱與食欲喪失或繼之以突然死亡,有的出殼后7~15d才開始發(fā)病。發(fā)病率和死亡率受年齡、易感性、飼養(yǎng)管理等因素的影響而變化很大。死亡最高峰發(fā)生在第2周齡,至第3、4 周齡時(shí)死亡迅速減少。急性敗血型又可表現(xiàn)以拉白痢和呼吸困難為主要特征兩種病型,其死亡率與飼養(yǎng)管理優(yōu)劣、品種、治療是否得當(dāng)以及有無(wú)并發(fā)癥等有關(guān),嚴(yán)重的可達(dá)100%的死亡率。關(guān)節(jié)炎型以附關(guān)節(jié)腫脹為特征,死亡率較低,在30%左右,多見于肉雞。神經(jīng)型以仰頭,偏頭轉(zhuǎn)圈啄觸地等運(yùn)動(dòng)機(jī)能障礙為特征,死亡率在10%左右。育成雞患雞白痢多呈亞急性經(jīng)過,發(fā)病率較高,以附關(guān)節(jié)和胸骨滑液囊腫脹為(外形似雞的嗉囊)特征,死亡率在10%左右。
成年雞雞白痢多為隱性感染,病愈后10~11個(gè)月的康復(fù)雞仍然處于隱性感染狀態(tài),以生殖器官病變?yōu)樘卣?,常見雞冠與黏膜貧血,冠呈鱗狀萎縮、灰白色,不安,逐漸委頓,兩翅下垂,縮頭縮頸,食欲消失,常有腹瀉。潛伏期16~21d。不僅影響生產(chǎn)性能,而且可長(zhǎng)期帶菌和經(jīng)蛋媒傳遞感染,成為危險(xiǎn)傳染源,在應(yīng)激因素作用下,偶爾可發(fā)生急性敗血型雞白痢,癥見下痢,產(chǎn)蛋量居減,肝脾腫大且結(jié)節(jié)壞死,卵泡變形,死亡率在20%左右(溫俊板等,1994,李華,1993,沙依染古麗,2001)。
在正常的情況下,腸黏膜的梭形細(xì)菌可產(chǎn)生揮發(fā)性有機(jī)酸而抑制沙門氏菌的生長(zhǎng),并且腸道內(nèi)正常菌群的蠕動(dòng),也不利于沙門氏菌的附著。當(dāng)機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí),腸道菌群失調(diào),從而導(dǎo)致沙門氏菌的大量滋生。侵入細(xì)菌進(jìn)入絨毛頂端,從而進(jìn)入上皮細(xì)胞,在其中繁殖,并感染臨近細(xì)胞或進(jìn)入固有層。機(jī)體受病菌侵害,刺激前列腺分泌,從而激活腺苷酸環(huán)化酶,使血管內(nèi)水分、HCO3-和Cl-向腸道外滲而引起腸炎,即白痢。在沙門氏菌引起的敗血癥時(shí),是由于沙門氏菌細(xì)胞壁里的脂多糖由低聚糖芯和脂質(zhì)A所組成,脂質(zhì)A成分具有內(nèi)毒素活性,可使機(jī)體發(fā)熱,黏膜出血,白細(xì)胞減少繼而增多,血小板減少,最后因休克而死亡。
5.1 臨床診斷
觀察雛雞、育成雞及成年雞中的發(fā)病情況,考查病群發(fā)病史。歷史上1~3周齡雛雞常發(fā)病死亡,3周齡以上的雞很少發(fā)病。病雛肝腫大充血或出血,多處臟器常有灰白色結(jié)節(jié)等即可做出假定診斷。
5.2 病菌的分離鑒定
5.2.1 光鏡下雞白痢沙門氏菌的形態(tài)特征檢查
本病的病原菌為雞白痢沙門氏桿菌(Salmonella Pullorum),為革蘭氏陰性短桿菌,有時(shí)呈多形性,無(wú)鞭毛,故不能運(yùn)動(dòng),不形成莢膜和芽孢,所以抵抗力較弱,對(duì)熱的抵抗力不強(qiáng),70℃、20min死亡,高錳酸鉀,來(lái)蘇兒,升汞,福爾馬林,石碳酸溶液在短短的幾分鐘內(nèi)可將其殺死(圖布丹扎布等,1993)。
5.2.2 培養(yǎng)特性檢查
雞白痢沙門氏桿菌為需氧或兼性厭氧菌,在普通瓊脂上不生長(zhǎng),在伊紅亞甲藍(lán)瓊脂平板(EMB)上菌落針尖大(0.3~0.5mm),乳糖不發(fā)酵,菌落圓形,半透明,稍微隆起,淡黃白色,光滑,表面濕潤(rùn),邊緣整齊:在含0.5%酵母浸膏的胰化大豆陳肉中中度混濁,底部有絨條狀少量沉淀物,能形成菌環(huán)(湛南輝等1995)。
5.2.3 生化特性檢查
雞白痢沙門氏桿菌表現(xiàn)為葡萄+、乳糖-、衛(wèi)矛醇一、山梨醇一(個(gè)別+)、伯膠糖一、水楊昔一、蔗糖一(個(gè)別+)、麥芽糖一、甘露醇+(個(gè)別一)、鼠李糖+(個(gè)別一)、木膠糖一(個(gè)別十或弱+)、覃糖+、尿素酶一、H2S+、檸檬酸鹽利用一、VP一、M.R弱+、吲噪一、動(dòng)力一等生化特性(堪南輝,1995;圖布丹扎布等,1993)。
5.2.4 雞白痢沙門氏桿菌的血清學(xué)鑒定
雞白痢沙門氏桿菌是腸桿菌科沙門氏菌屬中的一個(gè)成員,按照Kauffman-white體系,雞白痢沙門氏菌屬于D血清群,其抗原結(jié)構(gòu)式為1,9,12:-:-。Younie(1941)首次發(fā)現(xiàn)并用通常的標(biāo)準(zhǔn)抗原對(duì)正在流行雞白痢的雞群采用標(biāo)準(zhǔn)凝集試驗(yàn)檢疫。劉秀梵、焦新安(1989)應(yīng)用抗O抗原克隆抗體對(duì)雞白痢沙門氏菌分離株做了分群鑒定??祫P(1998)用因子血清分型法,對(duì)我國(guó)8個(gè)省市區(qū)分離的174株雞白痢沙門氏菌進(jìn)行血清學(xué)分型,分為標(biāo)準(zhǔn)型菌株(79.31%),中間型菌株(17.24%)和變異型菌株(3.45%)三型。雞白痢沙門氏菌分離物經(jīng)噬菌體分型可分為不同的噬菌體型,絕大多數(shù)為2200型(堪南輝,1995)。
分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)、血清學(xué)鑒定的檢測(cè)程序?qū)z驗(yàn)部門和使用者均是一種沉重的負(fù)擔(dān),因此,需要建立快速而準(zhǔn)確的鑒定方法。噬菌體裂解法和屬特異抗體Elisa、屬特異核酸探針雜交實(shí)驗(yàn)或PCR技術(shù)是目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道的快速而準(zhǔn)確的鑒定方法。另外,給雞白痢沙門氏菌做基因(質(zhì)粒、染色體)分型和指紋圖譜分析也正在進(jìn)行中。
5.2.5 ELISA法診斷
沈國(guó)順等(1997)認(rèn)為采用全血EIiSA(比較血清EliSA)檢測(cè)剛孵出雛雞的抗體更方便,因?yàn)閯偡醭龅碾r雞采血量少,分離血清比較困難,而且難于定量,而對(duì)成年雞,育成雞抗體的檢測(cè),用血清和全血EIiSA檢測(cè)均可,二者檢測(cè)結(jié)果的陰陽(yáng)性符合率均為100%,檢出的抗體水平(OD值)比較接近。Chart等認(rèn)為單獨(dú)應(yīng)用ELISA檢測(cè)是不全面的,即不具完全可靠性,因?yàn)閼?yīng)用ELISA檢測(cè),LPS抗體水平有相當(dāng)大的變化,所以應(yīng)將ELISA同凝集試驗(yàn)等結(jié)合起來(lái)應(yīng)用,1990年焦新安、劉秀梵等用玻板凝集試驗(yàn)(PAT),間接血凝試驗(yàn)(PHA)、抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA、瓊脂擴(kuò)散沉淀試驗(yàn)(AGPT)四種方法檢疫雞白痢做了比較,四種方法各有優(yōu)劣。王志亮、文其乙、焦新安等(1995)研制和建立了屬特異單抗試劑CB8+DE7檢測(cè)沙門氏菌的方法,該方法的準(zhǔn)確率高于噬菌體裂解法.隨后,文其乙、焦新安等(1996)研制成了沙門氏菌快速檢測(cè)試劑盒。
5.2.6 凝集試驗(yàn)法
凝集試驗(yàn)法是目前國(guó)內(nèi)外對(duì)雞白痢的常用檢疫診斷方法之一。自從Runnels等首先應(yīng)用玻板凝集試驗(yàn)檢測(cè)雞白痢以來(lái),人們?cè)诖嘶A(chǔ)上作了一定的改進(jìn),發(fā)展了簡(jiǎn)便、實(shí)用、快速的凝集試驗(yàn)法,例如血清、全血、單克隆抗體、LPS敏化RBC。閻一德(1993)研制的玻板間接血凝抗原試驗(yàn),對(duì)人工感染雞和自然感染雞可早期測(cè)出高檢出率的抗體,而且對(duì)雛雞的母源抗體的檢出率和檢出數(shù)量比標(biāo)準(zhǔn)抗原提高40%。
5.2.7 卵黃抗體檢測(cè)法
已經(jīng)發(fā)現(xiàn),卵黃提取物可以取代血清進(jìn)行雞白痢沙門氏菌病抗體的檢測(cè),檢測(cè)感染母雞的卵黃抗體,其敏感性與血清方法相似。1993年譚芹香等用雞白痢卵黃平板凝集法研究了各器官雞白痢沙門氏桿菌的特異性和敏感性。卵黃平板凝集檢測(cè)試驗(yàn),從抗體滴度方面來(lái)說,卵黃要低于全血,也就是血檢陽(yáng)性雞中平均11.10%不能用卵檢法檢測(cè)出來(lái).但卵檢法可免去驚擾雞群,特別是在雞群產(chǎn)蛋量上升階段,而血檢對(duì)雞有很大的副作用。一般認(rèn)為凝集反應(yīng)出現(xiàn)速度在10秒鐘左右,血檢效價(jià)在1:20~1:640之間,雞白痢沙門氏檢出率是比較高的。
5.2.8 雞白痢沙門氏菌脂多糖敏化紅細(xì)胞的間接血凝試驗(yàn)
張如寬,甘軍紀(jì)(1989)用熱酚一水法取雞白痢沙門氏菌脂多糖抗原(LPS)經(jīng)PH8.0熱處理后,致敏醛化的綿羊紅細(xì)胞,用其與被檢雞全血或血清作玻板間接血凝試驗(yàn)檢疫雞白痢,并與雞白痢全血玻板凝集反應(yīng)作比較,前法的陽(yáng)性檢出率比后法高10%~30%,而且在1~2min即可判定結(jié)果,為檢疫雞白痢提供了一種特異,快速簡(jiǎn)便的新方法。
5.3 鑒別診斷
曲霉菌或其他霉菌病與本病在發(fā)病日齡、死亡情況、臨床癥狀和病理變化等方面都很相似,在診斷中易混淆。主要區(qū)別是:①曲霉菌病雛雞無(wú)白色、糨糊狀粘稀糞,肛門周圍絨毛干凈,排糞時(shí)無(wú)痛苦的尖叫聲。②剖檢病雞,曲霉菌病心肌上無(wú)白色結(jié)節(jié)病灶。③曲霉菌病雞肺部結(jié)節(jié)雖顏色同本病相同,但結(jié)節(jié)明顯突出肺表面,大小懸殊,形態(tài)多樣,柔軟有彈性,結(jié)節(jié)里呈干酪樣。④曲霉菌病雛雞氣囊和胸腹膜可見小結(jié)節(jié)或成團(tuán)的霉菌斑點(diǎn),而本病則無(wú)。使用某些磺胺類藥和抗生素防治本病效果較佳,而對(duì)曲霉菌病無(wú)效。
本病病原的某些菌株對(duì)關(guān)節(jié)和膛鞘組織有特殊的嗜性,在不少雛雞中產(chǎn)生局限于關(guān)節(jié)和健鞘及囊內(nèi)容物的病變,這與滑液囊支原體及其他病原菌在該處所發(fā)生的腫脹、跛行等病變相似。本病育成雞的感染在發(fā)病年齡及病理變化易與MD相混淆,實(shí)際上外觀和組織學(xué)變化兩者的結(jié)節(jié)顯著不同。MD的腫瘤結(jié)節(jié)是灰白色,脂肪樣的,在肝臟上不會(huì)是小的壞死灶和有小紅點(diǎn)出現(xiàn)。本病成年帶菌者中的局限性感染,尤其是在心包囊與卵巢,有時(shí)與大腸桿菌以及其他沙門氏菌所致的病變完全一樣,均須做出鑒別診斷。
6.1 綜合預(yù)防措施
加強(qiáng)種蛋的衛(wèi)生管理:污蛋是本病的主要傳染源,要防白痢病,首先應(yīng)從種蛋入手,注意種蛋的收集、消毒和存放,剔除不合格種蛋。嚴(yán)格孵化場(chǎng)衛(wèi)生消毒制度:在孵化器中,病雛散落的絨毛及排出的污糞都含有很多雞白痢沙門氏菌,因此要做好孵化場(chǎng)的衛(wèi)生工作,加強(qiáng)孵化器、出雛器和運(yùn)輸工具的消毒。種雞場(chǎng)的衛(wèi)生措施:雞場(chǎng)應(yīng)實(shí)行隔離制度,生產(chǎn)人員進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)須經(jīng)消毒,飼養(yǎng)員不串舍,用具不互不堅(jiān)持全進(jìn)全出制度;定期對(duì)種雞進(jìn)行白痢病監(jiān)測(cè)淘汰陽(yáng)性雞。
6.2 疫苗接種
對(duì)于雞白痢的接種,各方學(xué)者從各個(gè)方面努力,研制出不同的疫苗。如潘志明,焦新安(2001)應(yīng)用減毒菌株-97A研制成雞沙門氏菌弱毒凍干苗,能提供90%以上的保護(hù)率,且具有很好的安全性。根據(jù)抗Lps抗體是機(jī)體中最主要的抗體,所以Lps是主要的抗原,提取菌體的Lps而制作的亞單位苗,不但可以激活體液免疫,而且還激活細(xì)胞免疫,且細(xì)胞免疫的產(chǎn)生早于體液免疫。關(guān)于滅活苗,只是有學(xué)者進(jìn)行一定的研究工作,由于技術(shù)及效果問題在實(shí)踐中并沒有得到推廣。現(xiàn)在,各方學(xué)者又在卵黃抗體方面研究,在實(shí)驗(yàn)階段,收到良好的效果,卵黃抗體的應(yīng)用,可能為今后緊急控制雞白痢提供一個(gè)有效的工具。
6.3 碳水化合物和有機(jī)酸的應(yīng)用
乳糖等碳水化合物可減少雞白痢沙門氏菌在腸道內(nèi)定居,從而降低發(fā)并率,并且乳糖可以提高腸道的酸性環(huán)境,從而抑制本菌的過量繁殖。朱太其等在1994年報(bào)道,飼料中加0.4%的緩沖丙酸或0.25%的甲酸或0.36%的甲酸鈣鹽對(duì)雞白痢有一定的預(yù)防效果。
6.4 應(yīng)用生物競(jìng)爭(zhēng)劑
在集約化雞場(chǎng),利用競(jìng)爭(zhēng)排斥機(jī)制,使雞緩慢獲得抵抗本病的微生態(tài)環(huán)境,抵抗沙門氏菌的侵入。并且利用微生態(tài)制劑沒有環(huán)境的污染,且不具有藥物殘留,這必將是一個(gè)大有前途的方向。
6.5 藥物治療措施
在藥物的治療上,鄭明學(xué)等在1999年報(bào)道:瀉痢康,干姜,蒼術(shù),白頭翁,對(duì)沙門氏菌有較好的抑制作用。對(duì)于抗生素的選擇上,可根據(jù)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果,選擇經(jīng)濟(jì)的藥物進(jìn)行本病的治療。又見報(bào)道,抗生素的添加,可以降低機(jī)體產(chǎn)生免疫力的效果,所以,在免疫時(shí),盡量不要應(yīng)用抗生素。再者,抗生素的添加,對(duì)預(yù)防雛雞白痢確實(shí)有一定的療效。
雞白痢是雞場(chǎng)普遍存在的一種具有垂直傳播的疾病,為切斷本病的傳染源,要加強(qiáng)對(duì)種雞場(chǎng)的檢驗(yàn)凈化,且要保證孵化廠的安全,要把工作落到實(shí)處,從源頭上根除本病,而當(dāng)前,由于某些因素的驅(qū)使,在某些方面,做的并不是非常有效,從而使雞白痢還是頻繁出現(xiàn)。
為了本病的根除,要加強(qiáng)快速診斷方法的研究,加強(qiáng)凝集試驗(yàn)的準(zhǔn)確性;加大標(biāo)準(zhǔn)抗原的篩選工作,為本病的診斷提供合適的工具。雖然,疫苗不是根除本病的最佳方法,但是在現(xiàn)在養(yǎng)殖階段,對(duì)疫苗的利用所帶來(lái)得經(jīng)濟(jì)效益還是值得我們重視的,所以,由于市場(chǎng)上現(xiàn)在還沒有大家所公認(rèn)的良好疫苗,所以,疫苗的研制以確實(shí)迫在眉睫。各方學(xué)者,要注重對(duì)沙門氏菌的致病機(jī)理方面的基礎(chǔ)研究,為找到菌體的免疫機(jī)制提供平臺(tái),從而開發(fā)出效果明顯的新型疫苗。再者,一個(gè)可喜的方向是加快微生態(tài)制劑的研制,因其具有無(wú)殘留、無(wú)污染的優(yōu)點(diǎn),有利于人民的身體健康,所以微生態(tài)制劑的開發(fā)必將是鼓勵(lì)科研的方向。
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