肥豬散中制何首烏的薄層鑒別方法研究

單乃榮，余蓮，陳幸

(廣西獸藥監(jiān)察所，南寧 530001)

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肥豬散中制何首烏的薄層鑒別方法研究

單乃榮，余蓮*，陳幸

(廣西獸藥監(jiān)察所，南寧 530001)

建立了肥豬散中制何首烏的薄層色譜(TLC)定性鑒別法。以制何首烏為對照藥材，采用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶0.8)為展開劑，在UV365 nm波長下檢視,氨蒸氣為顯色劑，對肥豬散中制何首烏進(jìn)行薄層色譜法鑒別。結(jié)果顯示制何首烏斑點清晰，陰性無干擾。本方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

肥豬散；制何首烏；TLC；質(zhì)量控制

肥豬散是由綿馬貫眾、制何首烏、麥芽和黃豆(炒)四味藥材粉碎、過篩、混勻的散劑，收載于《中華人民共和國獸藥典》2010年版二部的成方制劑，具有開胃、驅(qū)蟲、催肥的功能，主要用于食少、瘦弱、生長緩慢的治療[1]。目前該產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有性狀、顯微鑒別以及常規(guī)檢查，不能有效的控制肥豬散的質(zhì)量。近年來未見有關(guān)肥豬散質(zhì)量控制方面的報道。組方中的制何首烏來源于蓼科植物何首烏，干燥塊根的炮制加工品，主要成分為二苯乙烯和蒽醌類[1-4]。生、制首烏性味相同，功效主治不同。有研究表明生首烏和制首烏相比，生首烏結(jié)合蒽醌含量高，游離蒽醌含量低；生首烏的瀉下作用主要是由結(jié)合蒽醌引起的，經(jīng)炮制后，結(jié)合蒽醌水解游離蒽醌，故其瀉下作用明顯降低，臨床功效也發(fā)生了變化[2]，具有補肝腎，益精血，壯筋骨的功效[1-3]。據(jù)黃權(quán)芳[4]報道不同產(chǎn)地、氣候環(huán)境生長的何首烏有效成分含量具有較大的差異；據(jù)周文杰[5]、李正勇[6]、梁洪華[7]等報道制何首烏的質(zhì)量問題比較嚴(yán)重，主要存在的問題是用同科或其它科屬植物加工冒充或用生首烏染色，而且正品者的質(zhì)量也參差不齊，嚴(yán)重影響藥品質(zhì)量。因此，本試驗以肥豬散中制何首烏的化學(xué)成分蒽醌類為指標(biāo)，建立了肥豬散的薄層色譜鑒別方法，對于提高肥豬散的質(zhì)量控制水平和完善標(biāo)準(zhǔn)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 上海精密科學(xué)儀器有限公司YP802N電子天平，感量0.01 g；上海安亭電子儀器廠ZF-2型三用紫外儀，可見光、254及365 nm紫外光源；微量移液器5 μL，美國Drummond Microcaps?微量毛細(xì)管；玻璃噴霧瓶；硅膠H薄層板，青島海洋化工廠，厚0.2～0.5 mm，批號20130408；雙槽玻璃展開缸。

1.2 試劑 制何首烏對照藥材，批號為121454-201104，中國食品藥品檢定研究所提供。甲醇、氫氧化鈉、鹽酸、乙酸乙酯、甲苯、甲酸、氨水為分析純；試驗用水為超純水。

1.3 供試品 自配肥豬散樣品3批，從廣西玉林市藥材市場購進(jìn)原料藥材，按《中華人民共和國獸藥典》2010年版二部收載的藥材標(biāo)準(zhǔn)檢驗符合規(guī)定，按成方制劑肥豬散的處方投料，混合粉碎，過二號篩，混勻，即得[1]。

1.4 陰性對照樣品 未添加制何首烏的“肥豬散”同供試品制法制得。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備 取本品10 g，加甲醇50 mL，0.5%氫氧化鈉液5 mL，浸漬過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40 mL溶解，加鹽酸4 mL，于水浴上加熱20 min，降溫，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解,作為供試品溶液。

2.2 對照品藥材溶液的制備 取制何首烏對照藥材0.3 g，同2.1項下的方法制成對照藥材溶液。

2.3 制何首烏陰性對照溶液的制備 取不含制何首烏的“肥豬散”陰性對照樣品，照2.1項下的方法，制成陰性對照溶液。

2.4 薄層鑒別 吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶0.8)為展開劑，展開，取出，晾干。

2.5 顯色和檢視方式 分別置于紫外光燈(365 nm)下和用氨蒸氣熏后，觀察結(jié)果。

2.6 結(jié)果 色譜分離效果良好，斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同的兩個橙黃色熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變?yōu)榧t色。陰性對照樣品在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上無此斑點；置氨蒸氣中熏后，無紅色斑點。結(jié)果見圖1、圖2。

3 討 論

3.1 提取方法的選擇 試驗考察制何首烏中的主要有效成分游離蒽醌中大黃素和大黃素甲醚。參照大黃的薄層鑒別及借鑒乙肝扶正膠囊的薄層定性鑒別[9]醇提法，提取分離過程中發(fā)現(xiàn)，供試樣品中制何首烏的游離蒽醌溶于乙酸乙酯，不溶于部分含蒽醌類成分藥材如大黃、虎杖等常用的乙醚或三氯甲烷，這個特點可與大黃、虎杖等藥材相區(qū)別開來。方中制何首烏的處方量2.8%，為提高其檢出量，一是使用醇提冷浸法提取，避免處方中用量較大的黃豆受熱時，使其所含的油脂成分遇熱易析出，減少油脂吸附待測物質(zhì)的干擾；二是利用大黃素和大黃甲醚等蒽醌類物質(zhì)在堿性環(huán)境中溶解度較好的性質(zhì)，用氫氧化鈉[9-11]溶解增加其提取率。通過大量的薄層條件和樣品溶解前處理方法摸索試驗，篩選出了分離效果較好，重復(fù)性高的薄層條件。

3.2 提取方法的優(yōu)化 在樣品的提取處理方法中考察了不同溶劑、溶劑用量比例及提取次數(shù)和時間。

對肥豬散供試品分別用甲醇、乙酸乙酯、乙醇、50%乙醇、甲醇和0.1%氫氧化鈉液、甲醇和0.5%氫氧化鈉液提取進(jìn)行了試驗研究，結(jié)果甲醇和0.5%氫氧化鈉液提取對其薄層分離效果較好。

稱取肥豬散10 g 3份，分別加入10、30、50 mL的甲醇，各加入0.5%氫氧化鈉液5 mL提取，試驗結(jié)果表明甲醇50 mL和0.5%氫氧化鈉液5 mL最佳。

稱取肥豬散10 g 5份，4份分別浸泡1、6、12、24 h后提取，1份超聲30 min后提取，結(jié)果表明：供試品溶液提取24 h最佳。

稱取肥豬散10 g 3份，將提取液蒸干后第1份加水20 mL和1 mL鹽酸，第2份加水40 mL和鹽酸2 mL，第3份加水40 mL和鹽酸4 mL加熱酸化20 min，結(jié)果表明：加入水40 mL和鹽酸4 mL提取的效果最佳。

3.3 展開劑的優(yōu)化 先后試驗了不同組分展開劑，石油醚(30～40 ℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(9∶2∶0.1)[7]、石油醚(30～40 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)[12]、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)[8]、正已烷-醋酸乙酯(5∶1)[10]，甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)的結(jié)果相對較好，但供試樣品展開結(jié)果中仍有兩個斑點太近且有一雜質(zhì)斑點干擾，經(jīng)調(diào)整甲酸用量為0.8 mL，分離度達(dá)到薄層色譜鑒別的要求，經(jīng)調(diào)整取樣量和點樣量，結(jié)果以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶0.8)作為本品的展開系統(tǒng)，使之達(dá)到供試品和對照藥材的薄層色譜鑒別斑點清晰、圓整、無拖尾、并且對照藥材制何首烏的斑點與供試品中制何首烏的斑點大小相近。

3.4 對照品藥材的選擇 中藥材的有效成分是復(fù)雜的，單一的化學(xué)對照品不能完全體現(xiàn)藥材整體特性，對照品藥材的選擇應(yīng)能反映藥材相關(guān)化學(xué)物質(zhì)的整體信息(位置、次序、顏色等)。在選擇對照品藥材的試驗中比較了何首烏對照藥材與制何首烏對照藥材，供試品溶液、對照藥材溶液均定量制備，在薄層板上定量點樣，則樣品的色譜結(jié)果不僅可以回答“有”或“沒有”，即“真”與“偽”的問題，還可以直觀、粗略地進(jìn)行量化評價，相比較沒有規(guī)定量化的顯微鑒別，在一定程度上提供優(yōu)劣的信息。結(jié)果表明：雖然何首烏對照藥材的結(jié)果與供試品中制何首烏的斑點大小相近，但與未添加制何首烏的陰性樣品比較有一處干擾的紅色斑點存在，而制何首烏對照藥材無相同顏色的斑點，所以選擇制何首烏為指標(biāo)對照藥材。

薄層色譜法(TLC)是一種快速、靈敏、高效地分離微量物質(zhì)的方法，是最簡單的色譜技術(shù)之一，具有操作方便、設(shè)備簡單、分離效率高、專屬性好、分析速度快、色譜參數(shù)易調(diào)整等特點，在藥物分析中應(yīng)用廣泛[8]。通過紫外、化學(xué)顯色等方式，可以多層面地呈現(xiàn)藥材特征，特別是通過化學(xué)顯色，可以將分析結(jié)果以直觀的彩色圖像表達(dá)出來。因此，即使在液相色譜技術(shù)普及的今日，薄層色譜仍具有其獨特的應(yīng)用價值。該方法簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，對于完善產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高藥品質(zhì)量具有現(xiàn)實意義。

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(編輯：陳希)

Polygoni Multiflori Radix Praeparata by TLC Identification in Feizhu San

SHAN Nai-rong, YU Lian*, CHEN Xing

(Guangxi Institute of Veterinary Drug Control，Nanning 530001, China)

Yulian, E-mail: 672829563 @qq.com

To establish a method of thin layer chromatography(TLC)identification for Polygoni Multiflori Radix Praeparata in Feizhu San. Using Polygoni Multiflori Radix Praeparata as contrast medicinal material,methylbenzene-ethyl acetate-methanoic acid(15∶2∶0.8) as developing reagent,inspected in ultraviolet light (365 nm),ammonia vapor as color developing rengent,to carry out experiment of TLC for Polygoni Multiflori Radix Praeparata in Feizhu San. The TLC chromatograms of Polygoni Multiflori Radix Praeparata is not only feasible with clear spots,good separation,and no interference．The method is simple,quick,accurate,reproducible and can be used for the quality control of Feizhu San.

Feizhu San; Polygoni Multiflori Radix Praeparata; TLC; quality contorl

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.5.08

單乃榮，獸醫(yī)師，從事獸藥殘留檢測與研究。

余蓮。E-mail: 672829563 @qq.com

2017-01-21

A

1002-1280 (2017) 05-0037-04

S853.76