液相色譜-四極桿-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè)定 雞蛋及雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留的研究

劉善菁，劉雨昕，陸桂萍，曲 斌，耿士偉

(江蘇省畜產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，南京 210036)

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.10.05

液相色譜-四極桿-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜測(cè)定 雞蛋及雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留的研究

劉善菁，劉雨昕，陸桂萍，曲 斌，耿士偉

(江蘇省畜產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，南京 210036)

建立了一種測(cè)定雞蛋與雞肉中氟蟲腈及其3種代謝物(氟甲腈、氟蟲腈硫醚及氟蟲腈砜)的液相色譜-四極桿-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜方法。樣品經(jīng)提取和鹽析后，PRiME HLB凈化柱快速凈化，液相色譜分離后，四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜準(zhǔn)確定性并定量，平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)。4種待測(cè)組分均獲得足夠的色譜保留和分離，各藥物在 0.1～5.0 μg/kg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，日內(nèi)日間精密度小于20 %，方法回收率在75%～115 %之間，方法的定量限為0.1 μg/kg。此方法快速、準(zhǔn)確且靈敏度高，為目前國(guó)際上爆發(fā)的“毒雞蛋”事件提供了準(zhǔn)確有效的技術(shù)手段。

氟蟲腈及其代謝物；雞蛋；雞肉；液相色譜-高分辨質(zhì)譜

氟蟲腈(Fipronil，商品名：銳勁特；又名：芬普尼)是一種苯基吡唑類的廣譜殺蟲劑[1]，由法國(guó)羅納-普朗克公司研發(fā)[2]，作用于昆蟲的γ-氨基丁酸受體，干擾昆蟲中樞神經(jīng)，引起昆蟲神經(jīng)和肌肉過度興奮直至死亡，從而起到殺蟲作用。1994年，氟蟲腈進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)[3]。研究表明，氟蟲腈對(duì)甲殼類水生生物和蜜蜂風(fēng)險(xiǎn)極高[3]；在對(duì)人體毒性方面，溫州某醫(yī)院曾有過2例關(guān)于氟蟲腈急性中毒的病患報(bào)道，患者出現(xiàn)四肢抽搐、精神異常、胡言亂語(yǔ)、狂躁等中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮癥狀[4]。近日，歐洲各國(guó)出現(xiàn)被氟蟲腈污染的“毒雞蛋”新聞?dòng)忠淮伟阉粕狭孙L(fēng)口浪尖。歐盟395/2005號(hào)法規(guī)[5]以及1127/2014補(bǔ)充條例[6]中，明確規(guī)定了各種農(nóng)作物、畜禽產(chǎn)品及其制品(包括肉、蛋、奶、蜂蜜等)中氟蟲腈的最大殘留限量，其中雞蛋的限量為0.005 mg/kg。日本的肯定列表也對(duì)此有明確規(guī)定。我國(guó)于2009年發(fā)布農(nóng)業(yè)部1157號(hào)公告[7]：除衛(wèi)生用、部分旱田種子包衣劑外，在中國(guó)境內(nèi)停止銷售和使用用于其他方面的含氟蟲腈成分的農(nóng)藥制劑。食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2763-2016[8]對(duì)谷物、油料和油脂、蔬菜、水果、糖料和食用菌6項(xiàng)農(nóng)作物中氟蟲腈的殘留量進(jìn)行了規(guī)定，最大殘留限量為0.02 mg/kg。對(duì)畜禽產(chǎn)品中的氟蟲腈最大殘留限量沒有明確規(guī)定；亦沒有涉及畜禽產(chǎn)品中氟蟲腈殘留檢測(cè)方法的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)雖已嚴(yán)格禁用氟蟲腈，但在相關(guān)限量規(guī)定及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的跟進(jìn)上有一定滯后。氟蟲腈在動(dòng)物、植物、環(huán)境中會(huì)代謝生成與氟蟲腈相當(dāng)或毒性更高的砜化物或亞砜化合物[1]，根據(jù)GB2763-2016和歐盟法規(guī)中規(guī)定，食品中氟蟲腈的殘留量以氟蟲腈及其3種代謝物(氟甲腈(MB46513)、氟蟲腈硫醚(MB45950)、氟蟲腈砜(MB46136))之和計(jì)算。

目前，關(guān)于氟蟲腈及其代謝物的檢測(cè)方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法[9-11]、液相色譜法[12]和液相色譜-質(zhì)譜法[13-14]，但是,這些方法主要針對(duì)的是蔬菜水果或者環(huán)境水體中的氟蟲腈及其代謝物殘留檢測(cè)，Meiyu Zhang等于2016年針對(duì)雞蛋和雞肉中的氟蟲腈殘留建立了LC-MS/MS分析方法，但僅涉及氟蟲腈原形藥物，未涉及其代謝物的分析。本研究建立了一種高效簡(jiǎn)便的分析雞蛋與雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留的液質(zhì)聯(lián)用方法，前處理簡(jiǎn)單快速、方法靈敏度高，適合高通量樣品的檢測(cè)分析。

1 材料與方法

1.1 儀器 Thermo Q-ExtractiveTM液相色譜-四極桿-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用儀，含高壓二元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、四極桿-靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)量分析器、Xcalibur 3.1數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)；Sigma 3K30 冷凍離心機(jī)，Sartorius公司；Heraeus Multifuge X1R離心機(jī)，Thermo公司；MS3 basic 渦旋儀，IKA公司；KS501 振蕩器，IKA公司；N-EVAPTM112 氮吹儀，Organomation公司；LINK BLOW 氮?dú)獍l(fā)生器，金浪科技有限公司。

1.2 試劑與材料 甲醇、乙腈，色譜純，Merck公司；乙腈，分析純，南京化學(xué)試劑有限公司；甲酸，LC-MS級(jí)，F(xiàn)isher公司；純凈水，自制。固相萃取凈化柱(PRiME HLB，60mg/3mL)，Waters公司。

標(biāo)準(zhǔn)品純度及來(lái)源：氟蟲腈(Fipronil，99.2%，Dr.Ehrenstorfer)、氟甲腈(Fipronil-desulfinyl，101 μg/mL(±3%)，北京曼哈格生物科技有限公司)、氟蟲腈硫醚(Fipronil-sulfide，99.0%，Dr.Ehrenstorfer)、氟蟲腈砜(Fipronil-sulfone，98.2%，Dr.Ehrenstorfer)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 取氟蟲腈、氟蟲腈硫醚、氟蟲腈砜標(biāo)準(zhǔn)品各適量，精密稱定，用乙腈溶解并定容于100 mL容量瓶中，制成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；精密量取氟甲腈標(biāo)準(zhǔn)品1 mL于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配置成1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 ℃冷藏保存。臨用前用定容溶液逐級(jí)稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 樣品前處理 稱取2 g(精確至0.01 g)樣品于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋使之充分混合，振蕩提取30 min，4 ℃下10000 r/min離心5 min。將上清液轉(zhuǎn)移至含有1 g NaCl和2 g無(wú)水硫酸鎂的15 mL離心管中，搖勻，4 ℃下5000 r/min離心3 min。移取約5 mL上清液，備用固相萃取凈化。

PRiME HLB固相萃取柱凈化：取5 mL上清液上樣，棄去初始約1 mL初濾液，收集續(xù)濾液，精密移取2.5 mL續(xù)濾液于氮吹管中，50 ℃水浴下氮?dú)饬鞔蹈?，? mL乙腈∶0.1%甲酸(50∶50,V/V)溶液復(fù)溶溶解殘?jiān)?，超?5 min，渦旋1 min，過0.22 μm微孔濾膜，待測(cè)。

1.5 液相色譜-質(zhì)譜條件

1.5.1 色譜條件 色譜柱：Waters BEH C18柱(2.1×100 mm，1.7 μm)。流動(dòng)相A：0.1%甲酸，流動(dòng)相B：乙腈(含0.1 %甲酸，V/V)，梯度洗脫條件見表1。流速0.3 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

1.5.2 質(zhì)譜條件 質(zhì)譜分析采用PRM(平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，parallel reaction monitoring, PRM)模式。測(cè)試前使用Thermo Pierce負(fù)離子校正液在m/z為265.14790、514.28440、1279.99721、1379.99083、1479.98444、1579.97805、1679.97166、1779.96528處校正，校正有效期維持在3 d內(nèi)。質(zhì)譜參數(shù)：噴霧電壓：-4500 V，霧化氣：40 L/h，輔助氣：15 L/h，離子傳輸溫度：350 ℃，輔助加熱溫度：400 ℃。分辨率：17500 FMWH@m/z200，AGC target：5×104，C-trap最大注入時(shí)間：50 ms。目標(biāo)物及其定量子離子的精確質(zhì)量數(shù)見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法專屬性 空白雞蛋及雞肉、陽(yáng)性添加的空白雞蛋及雞肉樣品用于評(píng)價(jià)方法的專屬性。結(jié)果表明，空白雞蛋及雞肉樣品中不含干擾測(cè)定的物質(zhì)；而在陽(yáng)性添加樣品中，4種目標(biāo)化合物保留時(shí)間在5.0～6.0 min之間，且峰形良好。標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白雞蛋及雞蛋中陽(yáng)性添加(添加量為1 μg /kg)色譜圖見圖1。同時(shí)獲得了氟蟲腈及其3種代謝物的子離子掃描圖(圖2)，在定量測(cè)定的同時(shí)，可以和標(biāo)準(zhǔn)品圖譜比對(duì)，進(jìn)行定性判定。

2.2 基質(zhì)效應(yīng) 質(zhì)譜分析過程中，樣品基質(zhì)中的干擾組分會(huì)對(duì)目標(biāo)待測(cè)物產(chǎn)生影響，從而產(chǎn)生基質(zhì)增強(qiáng)或基質(zhì)抑制效應(yīng)。本研究中評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)的方法是：基質(zhì)效應(yīng)=空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)響應(yīng)值/溶劑配制標(biāo)準(zhǔn)響應(yīng)值×100%。當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)在80%～120%之間時(shí)，可用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)<80%，為基質(zhì)抑制效應(yīng)，當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)>120%時(shí)，為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，此時(shí)可考慮用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

本研究在0.1 μg/kg(LOQ)、0.2 μg/kg(2LOQ)和1.0 μg/kg(10LOQ)3個(gè)加標(biāo)水平上分別考察了雞蛋和雞肉中氟蟲腈及其3種代謝物的基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果如表3所示。表中數(shù)據(jù)表明，氟蟲腈和氟蟲腈砜受基質(zhì)干擾較弱，而氟甲腈和氟蟲腈硫醚受到的基質(zhì)干擾作用較強(qiáng)；氟蟲腈的基質(zhì)效應(yīng)在80%～120%之間，而它的3種代謝物在1個(gè)或多個(gè)水平上基質(zhì)效應(yīng)<80%，因此，為了更為準(zhǔn)確的定量，本研究中分別采用空白雞蛋和空白雞肉的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 準(zhǔn)確稱取空白雞蛋及雞肉樣品各2 g，分別置于50 mL聚丙烯塑料離心管中，按樣品前處理步驟處理得到空白基質(zhì)液，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，制成一系列的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行LC-HRMS測(cè)定。以試樣的藥物添加濃度為橫坐標(biāo)，以目標(biāo)化合物峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。按信噪比(S/N)為3確定檢測(cè)限(LOD)，按S/N為10確定定量限(LOQ)。雞蛋及雞肉中各化合物的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)以及方法靈敏度參數(shù)見表4。

2.4 精密度與回收率 分別稱量雞蛋及雞肉的空白樣品，進(jìn)行氟蟲腈及其3種代謝物的1倍LOQ、2倍LOQ和10倍LOQ這三個(gè)濃度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，并且在每個(gè)濃度水平進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn)，分別考察3 d，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算回收率，并用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值(relative standard deviation，RSD，%)評(píng)價(jià)日內(nèi)和日間精密度，雞蛋及雞肉中氟蟲腈及其代謝物檢測(cè)結(jié)果見表5。

從表5可以發(fā)現(xiàn)，在低、中、高3個(gè)濃度，雞蛋及雞肉中氟蟲腈及其3種代謝物的回收率均在75%～115%之間，日內(nèi)、日間精密度均小于20%。

3 討論與小結(jié)

3.1 液相色譜柱與流動(dòng)相的選擇和優(yōu)化 根據(jù)氟蟲腈及其3種代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，采用常規(guī)的C18柱即可有效分離，本研究中采用1.7 μm粒徑C18柱，柱效高，分離速度快；流動(dòng)相體系采用乙腈-0.1%甲酸水溶液，乙腈黏度較小，可以有效降低色譜體系壓力，對(duì)設(shè)備起到一定的保護(hù)作用，實(shí)際分析過程中發(fā)現(xiàn)，4種待測(cè)物極性較小，保留較強(qiáng)，需要較高比例的有機(jī)相才能洗脫，在初始流動(dòng)相設(shè)置為50%時(shí)，4種待測(cè)物在5～6 min內(nèi)逐步洗脫，并且均獲得良好的峰形。本研究中采用乙腈和低濃度甲酸水溶液作為流動(dòng)相，檢測(cè)靈敏度可以達(dá)到0.1 μg/kg，在保證靈敏度的前提下獲得很好的色譜保留和分離效果。

3.2 平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式的選擇 本研究選用近年推出的具有快速二級(jí)質(zhì)譜功能的高分辨質(zhì)譜：四極桿-靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜(quadrupole-Orbitrap，Q-Orbitrap)作為檢測(cè)器，選擇其中的PRM模式(平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式)進(jìn)行定性定量，PRM是相對(duì)于傳統(tǒng)的MRM(多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式)建立起來(lái)的高分辨子離子監(jiān)測(cè)技術(shù)，屬于靶向MS/MS分析，和MRM只監(jiān)測(cè)目標(biāo)離子對(duì)的模式不同，PRM在整個(gè)液相分離過程中會(huì)在給定電壓下不斷地對(duì)每一個(gè)目標(biāo)母離子的全部碎片離子圖譜進(jìn)行記錄，而且是全部高分辨/高質(zhì)量精度子離子。和經(jīng)典的MRM方法相比，PRM提供更高的專屬性，因?yàn)樗诟叻直娴哪Ｊ较卤O(jiān)測(cè)子離子，很少受到干擾離子的影響，因而，PRM具有方法開發(fā)的潛在優(yōu)勢(shì)。

根據(jù)歐盟2002/657/EC[15]規(guī)定，當(dāng)使用低分辨質(zhì)譜進(jìn)行殘留分析時(shí)，要求LC-MS/MS在定性上提供一個(gè)母離子和兩個(gè)子離子，才能滿足法規(guī)中的“4分要求”；但是，部分化合物在復(fù)雜基質(zhì)中不易同時(shí)產(chǎn)生兩個(gè)子離子碎片，而使用高分辨質(zhì)譜對(duì)化合物進(jìn)行定性確證時(shí)，一個(gè)母離子2分，一個(gè)子離子2.5分，本研究在PRM模式下選擇一個(gè)母離子和一個(gè)子離子進(jìn)行定性和定量分析，超過歐盟的4分規(guī)定，并且方法抗干擾能力強(qiáng)，定性定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3.3 離子檢測(cè)參數(shù)的選擇及定量子離子的確定 氟蟲腈及其3種代謝物化學(xué)結(jié)構(gòu)中均含有-NH2等電負(fù)性較強(qiáng)的基團(tuán)，因此在負(fù)離子模式下易失去H得到[M-H]-峰，在本研究中，采用蠕動(dòng)注射泵將100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液注射入離子源，在負(fù)離子模式下分別進(jìn)行了一級(jí)全掃描和二級(jí)質(zhì)譜掃描，通過手動(dòng)調(diào)節(jié)碰撞能量，獲得不同碰撞能量下的子離子掃描圖，選擇母離子的豐度比約為5%時(shí)的碰撞能量作為實(shí)際測(cè)試用碰撞能量，選擇此碰撞能量下豐度最大的子離子作為定量子離子，本研究中的4種目標(biāo)化合物，均在HCD電壓為20 eV時(shí)獲得較為理想的子離子信息。

3.4 樣品前處理方法的選擇和優(yōu)化

3.4.1 鹽的選擇 本研究中考察了不同用量的氯化鈉和無(wú)水硫酸鎂對(duì)提取效果的影響。分別取陰性雞蛋和雞肉樣品，在加標(biāo)水平為1.0 μg/kg考察。結(jié)果表明，不加鹽時(shí)，氟蟲腈及其3種代謝物的回收率在25%～40%之間。而分別加入氯化鈉和無(wú)水硫酸鎂時(shí)，待測(cè)組分的回收率有了明顯提高，結(jié)果如圖3、圖4所示。圖表數(shù)據(jù)表明氯化鈉和無(wú)水硫酸鎂可以有效改變提取液中離子強(qiáng)度并起到除雜作用，提高4種待測(cè)物回收率，其中氯化鈉提高效率略明顯一些；但只加氯化鈉時(shí)，提取液中殘余的水分會(huì)延長(zhǎng)氮吹時(shí)間，因此，考察氯化鈉和無(wú)水硫酸鎂作為復(fù)合鹽析試劑時(shí)的回收率情況，結(jié)果見表6。結(jié)果表明，氯化鈉的加入量對(duì)目標(biāo)化合物的回收率影響不大，而當(dāng)氯化鈉的量恒定時(shí)，無(wú)水硫酸鎂加入量由1.0 g 增加到2.0 g時(shí)，4種化合物的回收率均有一定提高，說明此時(shí)無(wú)水硫酸鎂可起到除雜凈化的作用，減弱基質(zhì)抑制；但當(dāng)無(wú)水硫酸鎂的量繼續(xù)增加至3.0 g，部分目標(biāo)化合物的回收率有所下降，說明此時(shí)在復(fù)合鹽析試劑的共同作用下，吸附作用開始逐漸占優(yōu)。綜合考慮實(shí)驗(yàn)成本和回收率因素，最終選擇1.0 g氯化鈉和2.0 g無(wú)水硫酸鈉對(duì)樣品進(jìn)行進(jìn)化。

3.4.2 固相萃取方法的選擇與比較 本研究中涉及的雞蛋和雞肉兩種基質(zhì)，其中脂肪和蛋白含量較高，僅用乙腈提取和鹽析方法凈化樣品，對(duì)樣品的凈化程度不夠，不僅會(huì)對(duì)目標(biāo)物產(chǎn)生干擾，同時(shí)也對(duì)色譜及質(zhì)譜系統(tǒng)有一定損傷。常用的固相萃取方法一般需經(jīng)過活化、上樣、洗脫3個(gè)步驟，整個(gè)流程時(shí)間較長(zhǎng)，對(duì)于脂肪含量較高的基質(zhì)更是容易產(chǎn)生柱孔隙堵塞的現(xiàn)象。

本研究比較了不經(jīng)固相萃取、經(jīng)HLB柱凈化和PRiME HLB柱凈化3種方式的凈化效果。具體操作過程如下：分別取陰性雞蛋和雞肉樣品，在1.0 μg/kg水平下進(jìn)行回收率考察。①不經(jīng)固相萃?。喊礃悠非疤幚眄?xiàng)中乙腈提取，鹽析步驟操作后，精密移取2.5 mL上清液，50 ℃水浴下氮?dú)饬鞔蹈桑? mL復(fù)溶液溶解復(fù)溶，過膜進(jìn)樣；②HLB柱凈化：按樣品前處理項(xiàng)中乙腈提取、鹽析、離心后，精密移取2.5 mL上清液，加入8 mL水，混勻，作為固相萃取備用液。HLB小柱分別用3 mL甲醇、3 mL水活化后上樣，3 mL水淋洗，5 mL甲醇洗脫并收集，50 ℃水浴下氮?dú)饬鞔蹈桑? mL復(fù)溶液溶解復(fù)溶，過膜進(jìn)樣；③PRiME HLB柱凈化：按樣品前處理項(xiàng)下操作。具體結(jié)果見圖5、圖6所示。

結(jié)果表明，經(jīng)固相萃取方法凈化的樣品回收率明顯優(yōu)于不經(jīng)固相萃取方法凈化的樣品，并且方法的平行性及精密度較鹽析方法有較明顯的提高；而經(jīng)PRiME HLB小柱進(jìn)化的樣品，4種待測(cè)物回收率較HLB小柱凈化的更高，這與凈化過程的方式有關(guān)，PRiME柱的凈化方式在快速凈化的同時(shí)盡可能避免了損失，這種前處理方式無(wú)需活化和洗脫過程，上樣量小，速度快，整個(gè)凈化過程僅需5 min完成，能夠有效除去樣品中超過90%的磷脂和脂肪組分，最終回收率理想，基質(zhì)干擾在可以接受的范圍內(nèi)，大大縮短了前處理時(shí)間，適合大批量樣品的篩查工作。

本研究建立了雞蛋及雞肉中氟蟲腈及其代謝物(氟甲腈、氟蟲腈硫醚和氟蟲腈砜)LC-HRMS檢測(cè)方法，樣品經(jīng)提取、鹽析、PRiME HLB柱固相萃取凈化，LC-Q-Orbitrap MS測(cè)定，PRM模式檢測(cè)，本方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)，簡(jiǎn)便、高效，適用于雞蛋及雞肉中氟蟲腈及其代謝物的快速篩查、定性篩選和定量測(cè)定。

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[6] Commission regulations (EU) No 1127/2014 of 20 October 2014, amending Annexes II and III to Regulation (EC) No 396/2005 of the European Parliament and of the Council as regards maximum residue levels for amitrole, dinocap, fipronil, flufenacet, pendimethalin, propyzamide, and pyridate in or on certain products[S].

[7] 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部 中華人民共和國(guó)工業(yè)和信息化部 中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)部: 公告第1157號(hào)[S].

Ministry of Agriculture of the PRC, Ministry of Industry and Information Technology, Ministry of Environmental Protection: Announcement No. 1157[S].

[8] GB 2763-2016. 食品中農(nóng)藥最大殘留限量. 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[S].

GB 2763-2016. Maximum residue limits for pesticides in food. National Standards of the People’s Republic of China[S].

[9] 周 昱, 徐敦明, 陳達(dá)捷, 等. 固相微萃取-氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中氟蟲腈及其代謝物殘留[J]. 色譜, 2011, 29(7): 656-661.

Zhou L, Xu D M, Chen D J,etal. Determination of fipronil and its metabolites in tea by solid phase micro-extraction coupled with gas chromatography and gas chromatography spectrometry[J]. Chinese Journal of chromatography, 2011, 29(7): 656-661.

[10] 榮杰峰, 韋 航, 許美珠, 等. 氣相色譜-電子轟擊源質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中氟蟲腈殘留量[J]. 分析試驗(yàn)室, 2014, 33(1): 69-72.

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[11] Thirumalaiandi Ramasubramanian, Mariappan Paramasivam,Ramabhadran Jayanthi,etal. A simple and sensitive single-step method for gas chromatography-mass spectrometric determination of fipronil and its metabolites in sugarcane juice, jaggery and sugar[J]. Food chemistry, 2014, 150(1): 408-413.

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[15] European Community (EC) No 657/2002: Commission Decision of Implementing Council Directive 96/23/EC Concerning the Performance of Analytical Methods and the Interpretation of Results[S].

A method was established for the determination of fipronil and its metabolites (fipronil-desulfiny, fipronil sulfide and fipronil sulfone) residues in chicken egg and muscle by LC-quadrupole-Orbitrap MS. Chicken egg and muscle samples was exacted with acetonitrile, salted out by sodium chloride and anhydrous magnesium sulfate. Then the supernatant was quickly purified by PRiME HLB solid phase extraction prior to analysis by LC-HRMS. The matrix-matched calibration curve showed a good linear within the concentration range from 0.1 to 5.0 μg/kg. The average recoveries of fipronil and its metabolites at 3 levels of 0.1, 0.2 and 1.0 μg/kg ranged from 75% to 115%, and the relative standard deviations were less than 20%. The method was rapid and high sensitive, which provided an accurate and effective solution for the international incident of “poisonous eggs”.

fipronil and its metabolites; chicken egg; chicken muscle; LC-quadrupole-Orbitrap MS

2017-08-24

A

1002-1280 (2017) 10-0029-10

S859.84

劉善菁，理學(xué)碩士，從事獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)新技術(shù)新方法的研究。E-mail: liushanjing_1990@163.com

DeterminationofFipronilandItsMetabolitesResiduesinChickenEggandMusclebyLiquidChromatographyQuadrupole-orbitrap-highResolutionMassSpectrometry

LIU Shan-jing, LIU Yu-xin, LU Gui-ping, QU Bin, GENG Shi-wei

(JiangsuQualityInspectionandTestingCenterforAnimalProducts,Nanjing210036,China)

(編輯：侯向輝)