黃蜀葵花、莖、葉多糖與黃酮含量比較

陳云香，劉國(guó)鋼，陳 敏 ，時(shí)維靜*， 王 茜， 竇金鳳

(1.安徽科技學(xué)院 食品藥品學(xué)院，安徽 鳳陽 233100；2.杭州藝福堂茶業(yè)有限公司，浙江 杭州 310051)

黃蜀葵花、莖、葉多糖與黃酮含量比較

陳云香1，劉國(guó)鋼2，陳 敏1，時(shí)維靜1*， 王 茜1， 竇金鳳1

(1.安徽科技學(xué)院 食品藥品學(xué)院，安徽 鳳陽 233100；2.杭州藝福堂茶業(yè)有限公司，浙江 杭州 310051)

目的:比較黃蜀葵花、莖、葉多糖和黃酮的含量。方法:采用UV法測(cè)定黃蜀葵花、莖、葉中的多糖和黃酮，采用HPLC法測(cè)定黃蜀葵黃酮中金絲桃苷的含量。結(jié)果:黃蜀葵花多糖浸膏得率26.0%，多糖含量17.0%；黃蜀葵莖多糖浸膏得率12.3%，多糖含量11.6%；黃蜀葵葉多糖浸膏得率19.0%，多糖含量14.8%。黃蜀葵花黃酮浸膏得率30.5%，總黃酮含量3.45%；黃蜀葵莖黃酮浸膏得率10.0%，總黃酮含量0.68%；黃蜀葵葉黃酮浸膏得率16.5%，總黃酮含量1.05%。黃蜀葵莖和葉未檢測(cè)到金絲桃苷，黃蜀葵花中金絲桃苷含量為1.86%，符合2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定。結(jié)論:黃蜀葵不同部位的多糖和黃酮含量存在較大差異，黃蜀葵莖和葉不可替代黃蜀葵花，但可以用于提取多糖。本試驗(yàn)為黃蜀葵的開發(fā)利用提供參考數(shù)據(jù)。

黃蜀葵;不同部位；多糖；黃酮

黃蜀葵Abelmoschusmanihot( L.) Medic.為錦葵科秋葵屬多年生草本植物，始載于宋代掌禹錫所著《嘉佑本草》[1]。黃蜀葵在我國(guó)大部分地區(qū)均有分布或栽培[2]。歷代本草多用其花入藥，其次是種子、根，莖和葉少用?，F(xiàn)代化學(xué)研究表明，黃蜀葵花主要含黃酮類成分，種子主要含氨基酸和不飽和脂肪酸，根中主要為多糖類物質(zhì)[3]。目前對(duì)黃蜀葵花和根研究應(yīng)用較多，以黃蜀葵花為主要原料的三類新藥“黃葵膠囊”已經(jīng)上市，用于治療腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。黃蜀葵根含黏質(zhì)(黃蜀葵多糖)可用作潤(rùn)滑藥，在食品工業(yè)中用作增稠劑和穩(wěn)定劑[4]。每年10月后栽培基地花采收后，根待來年再發(fā)，大量的莖和葉被拋棄。因黃蜀葵的主要活性物質(zhì)是黃酮和多糖，本文比較黃蜀葵花、莖、葉三個(gè)不同部位多糖和黃酮含量，為黃蜀葵的開發(fā)利用提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試藥與儀器

黃蜀葵試驗(yàn)材料于2015年10月25日采自安徽省黃山歙縣桂林鎮(zhèn)黃蜀葵生產(chǎn)基地，經(jīng)安徽科技學(xué)院食品藥品學(xué)院時(shí)維靜教授鑒定為秋葵屬黃蜀葵Abelmoschusmanihot( L.) Medic.的花、莖和葉。

金絲桃苷(批號(hào)1779-7058)購(gòu)自上海詩(shī)丹德生物技術(shù)有限公司；葡萄糖(批號(hào)116305-141045)購(gòu)自上海阿拉丁生化科技有限公司；蘆丁(100080-201207) 購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；甲醇、乙腈和磷酸均為色譜純；水為超純水；濃硫酸、重蒸酚、硝酸鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、正丁醇等均為分析純。

LC-20AT型分析半制備高效液相色譜儀(日本島津公司)；TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；CP225D準(zhǔn)微量天平(北京塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 黃蜀葵多糖提取 將烘干的黃蜀葵花、莖、葉粉碎，分別取其粉末30.0 g，料液比為1 ∶12.5，加熱回流提取3次，每次3 h，合并水提液并濃縮。加入95%乙醇，使溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為75%，置冰箱24 h。收集沉淀粗多糖，真空干燥箱干燥，計(jì)算得率，備用。

1.2.2 Sevage法除蛋白質(zhì) 分別取不同部位的黃蜀葵粗多糖5.0 g,以適量水溶解。按多糖水溶液體積1/4加入Sevage試劑(三氯甲烷-正丁醇4 ∶1)混合，充分振蕩后靜置，離心除去蛋白層，如此反復(fù)操作，至無游離蛋白為止。濃縮，干燥，計(jì)算得率，備用。

1.2.3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液制備 精確稱取無水葡萄糖10.0 mg，蒸餾水溶解后定容到50 mL容量瓶中，配置成200 mg/L的葡萄糖儲(chǔ)備液。

1.2.4 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL葡萄糖溶液，分別定容至10 mL容量瓶中，移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各1 mL，分別置于10 mL具塞試管中，依次加入5%苯酚溶液1.0 mL,充分振蕩后迅速加入濃硫酸6.0 mL，搖勻，室溫下放置30 min，以蒸餾水為空白對(duì)照，在490 nm處測(cè)定吸光度[5]。

1.2.5 黃蜀葵多糖測(cè)定 精密稱取不同部位的黃蜀葵多糖浸膏各5 mg，置100 mL容量瓶中，加水充分溶解，定容至刻度。精密移取黃蜀葵多糖溶液各1 mL，按“1.2.4”項(xiàng)下方法測(cè)吸光度，計(jì)算出黃蜀葵花、莖和葉多糖含量。

1.2.6 黃蜀葵黃酮提取 將烘干的黃蜀葵花、莖、葉粉碎，分別取其粉末20.0 g，加入10倍量的60%乙醇，回流提取1 h，提取2次，過濾，合并上清液，回收乙醇，水浴濃縮至稠狀，于真空干燥箱干燥，計(jì)算得率，備用。

1.2.7 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品 10.0 mg，置 50 mL 量瓶中，用 70% 乙醇溶解，并定容至刻度，振蕩搖勻，配制成 200 mg/L 的對(duì)照溶液，備用。

1.2.8 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 吸取蘆丁對(duì)照品溶液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加5% 亞硝酸鈉溶液 0.3 mL，搖勻，放置 6 min，加10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min，再加 4%氫氧化鈉溶液4 mL，搖勻，用 30%乙醇定容至刻度，放置15 min后，在506 nm處測(cè)定吸光度[6]。

1.2.9 黃蜀葵總黃酮測(cè)定 精密稱取不同部位黃蜀葵黃酮浸膏0.1 g，定容到50 mL量瓶，各取1.0 mL置10 mL 量瓶中，按“1.2.7”項(xiàng)下方法操作檢測(cè)，計(jì)算出黃蜀葵花、莖和葉總黃酮含量。

1.2.10 測(cè)定金絲桃苷色譜條件 采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85)，流速：1.0 mL/min，理論板數(shù)按金絲桃苷峰計(jì)算不低于10 000[7]。記錄色譜圖譜。

1.2.11 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品0.3 mg，置于2 mL容量瓶中，用色譜甲醇定容，混勻，再精密吸取100 μL，置2 mL容量瓶中，甲醇定容，混勻，得對(duì)照品溶液。

1.2.12 金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 采用自動(dòng)進(jìn)樣精密吸取金絲桃苷對(duì)照品溶液4、6、8、10、12 μL，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，金絲桃苷的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.13 金絲桃苷測(cè)定 精密稱取總黃酮浸膏粉各10.0 mg，置于25 mL的容量瓶中，加入適量色譜甲醇，超聲30 min(60 ℃、250 W)，取出，放冷，加色譜甲醇至刻度，混勻，取續(xù)濾液，按“1.2.8”項(xiàng)下條件測(cè)定，進(jìn)樣量10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程與相關(guān)系數(shù)

采用UV法檢測(cè)多糖和黃酮，采用HPLC法測(cè)定金絲桃苷，各標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)與線性范圍見表1。

表1 各標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)與線性范圍

2.2 多糖測(cè)定結(jié)果

詳見表2，多糖浸膏得率在12.3～26%，總多糖含量在11.6～17.0%之間。

2.3 總黃酮結(jié)果

詳見表2，黃酮浸膏得率在10.0～30.5%,總黃酮含量在0.05～3.45%之間。

2.4 金絲桃苷含量

黃蜀葵莖和葉中金絲桃苷含量極少，達(dá)不到檢測(cè)線。黃蜀葵花中金絲桃苷含量符合2015版《中國(guó)藥典》含量>0.50%(見表2)。檢測(cè)圖譜見圖1。

A．金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品；B. 黃蜀葵花；1金絲桃苷峰

提取部位Extraction多糖浸膏得率Yieldofpolysaccharide總多糖含量Polysaccharidecontent黃酮浸膏得率Totalflavonoidsextractionrate總黃酮含量Totalflavonoidscontent金絲桃苷含量Hyperincontent黃蜀葵花26.017.030.53.451.86黃蜀葵莖12.311.610.00.68-黃蜀葵葉19.014.816.50.05-

從表2可以看出，黃蜀葵不同部位多糖含量花>葉>莖，黃蜀葵不同部位總黃酮花>莖>葉。金絲桃苷在莖和葉中未檢出，表明金絲桃苷是黃蜀葵花中黃酮的指標(biāo)性成分。

3 討論

近年來，關(guān)于黃蜀葵多糖和黃酮化合物的研究越來越多，大部分集中在黃蜀葵花，對(duì)黃蜀葵莖和葉的研究則相對(duì)較少[8]。黃蜀葵中不同部位多糖和黃酮化合物的含量比較也未見報(bào)道。本試驗(yàn)比較了黃蜀葵花、莖、葉中的多糖和黃酮含量，并證明了金絲桃苷是黃蜀葵花中黃酮的指標(biāo)性成分。

本試驗(yàn)中紫外可見分光光度儀測(cè)定多糖和黃酮均采用文獻(xiàn)法，測(cè)定黃蜀葵中金絲桃苷采用2015版《中國(guó)藥典》中方法，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、經(jīng)典，所得數(shù)據(jù)可靠。結(jié)果表明，黃蜀葵花多糖浸膏得率26.0%，多糖含量17.0%；黃蜀葵莖多糖浸膏得率12.3%，多糖含量11.6%；黃蜀葵葉多糖浸膏得率19.0%，多糖含量14.8%。黃蜀葵花黃酮浸膏得率30.5%，總黃酮含量3.45%；黃蜀葵莖黃酮浸膏得率10.0%，總黃酮含量0.68%；黃蜀葵葉黃酮浸膏得率16.5%，總黃酮含量1.05%。黃蜀葵花中金絲桃苷含量為1.86%，符合2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定。黃蜀葵不同部位的多糖和黃酮含量存在較大差異，黃蜀葵莖和葉可以用于提取多糖，但不可替代黃蜀葵花使用。

[1]王茜，王啟之，時(shí)維靜，等．響應(yīng)面法與正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化黃蜀葵總黃酮閃提工藝比較[J]．安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，29(5)：24-31．

[2]章慶華．歙縣黃蜀葵高產(chǎn)栽培管理技術(shù)要點(diǎn)[J]．農(nóng)村經(jīng)濟(jì)與科技，2013，24(6)：177-178．

[3]溫銳，謝國(guó)勇，李旭森，等．黃蜀葵化學(xué)成分與藥理活性研究進(jìn)展[J]．中國(guó)野生植物資源，2015，34(2)：37-44．

[4]王雪梅，施文婷，吳迷迷，等．黃蜀葵膠中的糖分析[J]．食品科學(xué)，2011，32(6)：256-260．

[5]楊畢超，時(shí)維靜，章慶華，等．安徽省藥用菊花多類成分含量比較[J]．安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，27(5)：50-54．

[6]劉利軍，于艷，時(shí)維靜，等．安徽省3種藥用菊花總黃酮含量比較[J]．安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，26(4)：47-50．

[7]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:306.

[8]李春梅，王濤，張祎，等．中藥黃蜀葵花化學(xué)成分的分離與鑒定(Ⅰ)[J]．沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，27(9)：711-714．

(責(zé)任編輯：馬世堂)

Comparison of Polysaccharides and Flavones Content in Abelmoschus Manihot Different Parts

CHEN Yun-xiang1, LIU Guo-gang2, CHEN Min1, SHI Wei-jing1*, WANG Qian1，DOU Jin-feng1

(1.College of Food and Drug, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100, China;2.Hangzhou Efuton Tea Limited Company, Hangzhou 310051,China)

Objective: To compare polysaccharides and flavones content in Abelmoschus manihot different parts. Methods: Polysaccharides and flavones of Abelmoschus manihot flower, stem and leaf were determined by UV. Hyperoside of Abelmoschus manihot was determined by HPLC. Results: The polysaccharide extract yield of flowers is 26.0% and polysaccharide content is 17.0%. The polysaccharide extract yield of stems is 12.3% and polysaccharide content is 11.6%. The polysaccharide extract yield of leaves is 19.0% and polysaccharide content is 14.8%. The flavones extract yield of flowers is 30.5% and flavones content is 3.45%. The flavones extract yield of stems is 10.0% and flavones content is 0.68%. The flavones extract yield of leaves is 16.5% and flavones content is 1.05%. Hyperoside in Abelmoschus manihot stems and leaves was not detected. Hyperoside content in Abelmoschus manihot flowers is 1.86%. Conclusion: There is a big difference of polysaccharides and flavones content in Abelmoschus manihot different parts. This test provides reference for the development and utilization of Abelmoschus manihot.

Abelmoschus Manihot; Different parts; Polysaccharide; Flavonoids

2016-06-01

省級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(S10879CX33，108792015051)；滁州市科技局“高校發(fā)明專利技術(shù)研究項(xiàng)目”(201305)。

陳云香(1994-)，女，福建省泉州市人，在讀本科生，主要從事中藥及藥物制劑研究。*通訊作者：時(shí)維靜，教授，E-mail:shiwj@ahstu.edu.cn。

R927.2

A

1673-8772(2016)06-0050-04