金 東 春

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院,吉林 延吉 133002)

LGG混懸液吊瓶灌腸療法和獸藥結(jié)合治療幼犬大腸桿菌感染性腹瀉

金 東 春

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院,吉林 延吉 133002)

為觀察鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus,LGG)對大腸桿菌感染性腹瀉療效，采用不同劑量的鼠李糖乳桿菌對幼犬吊瓶灌腸和獸藥治療方法結(jié)合，以臨床治療處方藥為對照，觀察治療5 d后細(xì)菌感染性瀉的止嘔時間、止瀉時間、糞便形成時間及治療后糞便中大腸桿菌和雙歧桿菌菌數(shù)變化和血常規(guī)變化。結(jié)果表明：治療Ⅲ組(1×108CFU/kg鼠李糖乳桿菌)比對照組明顯縮短止吐和止瀉時間，減少大便次數(shù)，且治療第3天后大便完全成形，WBC、RBC、LY#和GR#均恢復(fù)正常。由第4和5天糞便標(biāo)本中所含細(xì)菌菌屬檢測中發(fā)現(xiàn)，治療Ⅲ組雙歧桿菌菌數(shù)明顯多于觀察組幼犬糞便中雙歧桿菌(P<0．05)菌屬，且其治愈率97.97%(32/33)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組治愈率87.88%(29/33)(P<0．05)。由此可見，治療Ⅲ組(1×108CFU/kg鼠李糖乳桿菌)的治療效果最明顯。

鼠李糖乳桿菌；灌腸治療；大腸桿菌；腹瀉；雙歧桿菌

致病性大腸桿菌感染性腹瀉是人獸共患的外源致病性大腸桿菌侵入腸道，導(dǎo)致腸道微生態(tài)失衡引起消化道疾病癥狀，故致病性大腸桿菌感染性腹瀉的治療方法近年來越來越受到科研工作者的重視，尤其是微生態(tài)治療方法。因為微生態(tài)制劑在腸道內(nèi)不僅抑制外來侵襲，保護(hù)宿主，而且具有調(diào)節(jié)腸道內(nèi)平衡，提高機體免疫力的作用[1]。

鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus,LGG)為乳桿菌屬的革蘭氏陽性菌?，F(xiàn)階段研究證明，鼠李糖乳桿菌[2-3]，具有腸道黏著率高[4]、定植能力強、調(diào)節(jié)腸道菌群、預(yù)防和治療腹瀉[5]、排除毒素和增強機體免疫力等作用。很多研究報道LGG對大腸桿菌、沙門氏菌有很好的抑菌作用[6-9]。但少有LGG對腸道黏膜的黏附、定植方面的研究報道。

目前國內(nèi)關(guān)于治療致病性大腸桿菌感染引起的幼犬細(xì)菌性腹瀉的中西藥治療方法雖然很多，但高效，速效藥物較少，并且國內(nèi)很少有應(yīng)用鼠李糖乳桿菌的灌腸療法治療幼犬大腸桿菌感染性腹瀉的相關(guān)報道。

本試驗借鑒人醫(yī)治療方法和前人研究為理論依據(jù)，通過LGG配制成無菌生理鹽水細(xì)菌混懸液，采用吊瓶灌腸和獸藥治療結(jié)合的方法治療致病性大腸桿菌感染引起的幼犬細(xì)菌性腹瀉，并與獸醫(yī)臨床治療方法相比較，觀察LGG治療效果。

本文研究了幼犬致病性細(xì)菌感染性腹瀉臨床治療的新方法，為今后獸醫(yī)臨床工作提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1) 儀器 生物顯微鏡(OLYMPUS生物顯微鏡CX31，上海維翰觀點科技有限公司)、精密酸度計(PHS-3C，上海儀電科學(xué)儀器)、高臺式速離心機(HC-2062，安徽中科中佳科學(xué)儀器)、智能恒溫水浴鍋(HW.SY21-KP4 ，北京長風(fēng)儀器儀表廠)、細(xì)菌震蕩培養(yǎng)箱(SH2000-DX，深圳是維斯比生物科技發(fā)展有限公司)和C02厭氧培養(yǎng)箱。

2) 試驗動物 由延邊大學(xué)動物醫(yī)院臨床診斷為感染致病性大腸桿菌引起急性腹瀉的幼犬,3～6月齡(體重0.5～1.3 kg)左右的對照組33條和觀察組(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各33條)。治療環(huán)境為延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)院治療室，治療飼料為犬專用飼料。

3) 藥物 ①對照處方藥(臨床治療處方藥)：654-2(0.2 mL/kg)、穿心蓮注射液(0.3 mL/kg)、強力解毒敏im(0.3 mL/kg)、碳酸氫鈉iv(2.3 mL/kg)、止血敏(1.0 mL/kg)、高能保肝(0.5 mL/次)、V6(2.0 mL/次)、慶大霉素(0.5 mL/kg)、地塞咪松(0.5 mL/kg)、10%葡萄糖酸鈣3.0 mL/次)、VC(2.0 mL/次)、注入30 mL(0.9%)復(fù)方氯化鈉注射液(iv)。②觀察組：用0.9%無菌生理鹽水配制不同濃度(1×106、1×107、1×108CFU/kg)的鼠李糖乳桿菌(ATCC7469)細(xì)菌混懸液。

4) 臨床癥狀 開始吐白色的帶泡沫的黏液，弓背，口角流涎；觸診腹部有明顯的壓痛，空腸粗大，呈橡膠樣，不愿動。

5) 臨床檢測 ①測T:38.6 ℃(平均)、P:120(平均)、R:56；CDV、CPV檢測均為陰性；病歷幼犬血常規(guī)檢查血液分析儀(SYSMEx F．800，日本東亞公司)、WBC犬(7 300～18 000)×106/L～RBC(6.3～9.9)×1012/L)、LY#(2.2～5.4)、GR#(7.7～16.1)高于正常值。②實驗室檢查[10-11]：糞便采樣并于實驗室培養(yǎng)鑒定出大腸桿菌，但未發(fā)現(xiàn)其它細(xì)菌、病毒和寄生蟲，確診是大腸桿菌感染性腹瀉(大腸桿菌鑒定方法：糞便采樣經(jīng)乳糖發(fā)酵、EMB平板選擇性培養(yǎng)后，在 EMB平板上37 ℃細(xì)菌震蕩培養(yǎng)箱里培養(yǎng)24 h后，產(chǎn)生的圓形、邊緣整齊、隆起、光滑、黑色帶金屬光澤菌落，用革蘭染色和生物顯微鏡鑒定為大腸埃希菌)。

6) 觀察指標(biāo) 臨床療效判斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中藥新藥治療泄瀉的臨床研究指導(dǎo)原則》(2002年版)制定[12]。①治愈：大便性狀、次數(shù)恢復(fù)正常，尿、血常規(guī)恢復(fù)正常；②顯效：大便性狀及次數(shù)明顯好轉(zhuǎn)，全身癥狀明顯改善。大便次數(shù)(2～4次/d)，近似成形，或便溏而每日僅1次，大便常規(guī)及細(xì)菌培養(yǎng)復(fù)查基本接近正常；③有效：大便性狀、次數(shù)、血常規(guī)及細(xì)菌培養(yǎng)復(fù)查好轉(zhuǎn)；④無效：大便性狀、次數(shù)及全身癥狀均無好轉(zhuǎn)甚至惡化或均無改善。注：采用尼莫地平法計算療效指數(shù)進(jìn)行療效判斷。療效指數(shù)=[(治療前癥狀-治療后癥狀)/治療癥狀]×100%。

1. 2 方法

1.2.1 治療方法―灌腸療法[13](吊瓶灌腸法)

灌藥前禁食(不禁水)16 h，將病犬兩后肢輕輕提起，前低后高式保定，將涂抹石蠟油的導(dǎo)尿管插入肛門內(nèi)(不同大小的犬，采用不同型號導(dǎo)管)，進(jìn)行深部灌腸。灌腸前先用6 ℃溫水灌腸清除積糞后，將已配制好的30 mL無菌生理鹽水LGG細(xì)菌混懸液輸液瓶高掛起來，打開流速閥，利用高低形成的壓力，使藥液緩慢注入腸內(nèi)。每天下午2點灌腸1次，LGG劑量分別為1×106CFU/kg(Ⅰ劑量組)、1×107CFU/kg(Ⅱ劑量組)、1×108CFU/kg(Ⅲ劑量組)

1.2.2 檢測大腸桿菌、雙歧桿菌總數(shù)

稱取1 g糞樣，加入1 mL稀釋液，制成震蕩混勻的原液。測雙歧桿菌、大腸桿菌的數(shù)量及細(xì)菌總數(shù)。具體測定方法如下：取100 μL勻漿液涂布接種于所需培養(yǎng)基[大腸桿菌數(shù)量測定采用山梨醇麥康凱瓊脂基礎(chǔ)(SMAC)培養(yǎng)基，雙歧桿菌數(shù)量測定采用雙歧桿菌(TPY)瓊脂培養(yǎng)基]，放入37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后，選取平均菌落數(shù)為30～300的稀釋度進(jìn)行菌落計數(shù)，即CFU/g(平均菌落數(shù) ×稀釋倍數(shù)×10)，結(jié)果用其對數(shù)值，即lg(CFU/g)表示。每個稀釋度在每種培養(yǎng)基上做3個重復(fù)，取其平均值。

1.3 統(tǒng)計分析

統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件處理，技術(shù)資料用2檢驗，2組間比較用t檢驗，以P<0.05 判斷為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 比較分析治療后2組致病性大腸桿菌感染性腹瀉臨床癥狀的變化

由表1可知，以獸藥治療為主的對照組治療2 d后開始止吐、止瀉，治療3 d后大便基本成形；觀察組(Ⅰ劑量組)臨床治療效果與對照組相比，縮短了止吐、止瀉和大便成形時間；觀察組(Ⅱ，Ⅲ)臨床治療效果優(yōu)于對照組,止吐、止瀉和大便成形時間明顯縮短(P<0.05)；觀察組(Ⅲ劑量組)臨床治療效果明顯優(yōu)于對照組(P<0.05)。

表1 對照組，觀察組治療后臨床癥狀變化

注：t檢驗，與對照組比較，*表示結(jié)果差異及顯著,P<0.05。

2.2 治愈后LGG對幼犬糞便中回收菌群數(shù)目的影響

1) 以獸藥治療為主的對照組治療5 d后，糞便中大腸桿菌總數(shù)為(6.98±0.15)×109,雙歧桿菌總數(shù)為(5.08±0.15)×106,少于正常值范圍細(xì)菌菌數(shù)。

2) LGG結(jié)合獸藥治療5 d后，觀察組(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)糞便中的大腸桿菌總數(shù)恢復(fù)到正常值范圍，而雙歧桿菌總數(shù)觀察組(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)高于對照組，統(tǒng)計學(xué)檢查差異顯著(P<0.05)(表2)。

表2 治愈后LGG對幼犬糞便中回收菌群數(shù)目的影響

注:108表示活菌數(shù)，平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。*表示結(jié)果差異極顯著,P<0.05。

2.3 對照組和觀察組(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)治療致病性大腸桿菌感染性腹瀉療效比較

由表3可知，觀察組(Ⅲ)總治愈率(97.97%)明顯優(yōu)于對照組總治愈率(87.88%)，且有顯著性差異(P<0.05)。

表3 對照組.觀察組的療效比較(n=33)

注：t檢驗，與對照組比較，*表示結(jié)果差異及顯著，P<0.05。

2.4 對照組和觀察組(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)治療后安全性檢查

對照組和觀察組(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)治療后，血常規(guī)檢測結(jié)果，WBC、RBC、 LY#和GR#均恢復(fù)正常。

表4 兩組治療后安全性檢測(n=33)

3 討論與結(jié)論

本研究結(jié)果表明，治療致病性大腸桿菌感染引起的幼犬細(xì)菌感染性腹瀉，經(jīng)LGG混懸液吊瓶灌腸療法和獸藥結(jié)合方法治療5 d后，觀察組(Ⅲ劑量組)總治愈率(97.97%)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組(87.88%)，療效也明顯優(yōu)于對照組，而且治愈的幼犬糞便采樣檢測細(xì)菌總數(shù)，觀察組的雙歧桿菌細(xì)菌總數(shù)[Ⅱ，Ⅲ分別為(6.26±0.18)×106和(6.36±0.08)×106]明顯高于對照組[(5.80±0.54)×106]，統(tǒng)計學(xué)檢驗差異顯著(P<0.05)，說明LGG能夠在幼犬腸道內(nèi)黏附定植和存活，并有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的作用。

在此研究基礎(chǔ)上，用LGG細(xì)菌混懸液、葡萄糖酸鈣鋅口服液和430 μg/mL煙酸同時灌腸，研究致病性大腸桿菌感染引起的幼犬細(xì)菌感染性腹瀉，結(jié)果止吐、止瀉和大便成形時間比對照組長1～2 d，但糞便成形后形態(tài)(含水比率)和精神狀態(tài)都優(yōu)于對照組，而且治愈率(96.31%)也遠(yuǎn)高于對照組(87.88%)。進(jìn)一步證實LGG能夠在幼犬腸道內(nèi)黏附定植和存活，并具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的作用。

綜上所述，LGG對治療致病性大腸桿菌感染引起的幼犬細(xì)菌感染性腹瀉有療效。深入研究LGG調(diào)節(jié)腸道菌群，增殖有益菌群，重建腸道生物屏障，抑制大腸桿菌感染性腹瀉的致病菌作用，可為臨床應(yīng)用提供堅實的理論基礎(chǔ)。

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The treatment of LGG suspension clysis combined with veterinary medicine on infectious diarrhea of Escherichia coli in puppies

JIN Dongchun

(AgriculturalCollegeofYanbianUniversity，YanjiJinlin133002,China)

In order to observe the effect of rhamnosus LGG (Lactobacillus) on the treatment of infectious diarrhea ofEscherichiacoli, different doses of LGG combined with the treatment of veterinary medicine was used. Clinical prescription drugs as control, the antiemetic time, antidiarrheal time, stool formation time of bacterial diarrhea, and count changes ofE.coliandbifidobacteriain feces, the changes of blood rountine after treatment of 5 days were observed. The results showed that the antiemetic and antidiarrheal time in the treatment group (1×108CFU/kg ofLactobacillusrhamnosus) was significantly shorter than the control group, stool frequency reduced, stool was fully formed on 3d after treatment, WBC, RBC, LY# and GR# were normal. The number ofbifidobacteriain feces of puppies of the treatment group III was significantly more than the control group on 4d and 5d (P<0.05), the cure rate was 97.97% (32/33) , it was higher than that of 87.88% (29/33) of control group (P<0.05). It showed that the effect of the treatment group III (1×108CFU/kgLactobacillusrhamnosu) was the most obvious.

Lactobacillusrhamnosus；enema therapy;Escherichiacoli; diarrhoea;bifidobacterium

2016-10-06

金東春(1969—)，男(朝鮮族),吉林和龍人，高級實驗師，博士，研究方向為動物營養(yǎng)與中獸藥開發(fā)。

1004-7999(2016)04-0337-05

10.13478/j.cnki.jasyu.2016.04.010

S858.292

A