唐忠林++周國(guó)勤++茆健強(qiáng)++郭麗蕓++劉煒++尹紹武++張國(guó)松
doi:10.15889/j.issn.1002-1302.2016.10.087
摘要:在應(yīng)用精子保存方法的基礎(chǔ)上,采用濕法人工授精技術(shù)開(kāi)展黃顙魚(yú)(♀)×瓦氏黃顙魚(yú)(♂)雜交及黃顙魚(yú)自交的繁苗生產(chǎn)試驗(yàn)。結(jié)果顯示:當(dāng)雌雄配組比例分別為300 ∶1、600 ∶1時(shí),雜交組與自交組的受精率不存在顯著差異(P>0.05),表明黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)親本配合力較好、授精效率高;雜交繁殖的受精率隨著雌雄配組比例的升高而降低,在本試驗(yàn)條件下,適于規(guī)模化雜交繁苗生產(chǎn)的雌雄配組比例為(300~600) ∶1??偨Y(jié)繁殖技術(shù)經(jīng)驗(yàn),開(kāi)展規(guī)模雜交繁苗,采用161.6 kg黃顙魚(yú)雌魚(yú)及4尾瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)可成功雜交繁苗207.9萬(wàn)尾,平均受精率為 79.8%,平均出苗率為82.5%;單尾瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)配組黃顙魚(yú)雌魚(yú)量達(dá)40.4 kg,繁苗量達(dá)51.9萬(wàn)尾,實(shí)現(xiàn)了黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)的規(guī)?;s交繁殖生產(chǎn)。
關(guān)鍵詞:黃顙魚(yú);瓦氏黃顙魚(yú);雜交繁殖;規(guī)模化;受精率;出苗率
中圖分類號(hào): S961.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號(hào):1002-1302(2016)10-0303-02
收稿日期:2016-04-12
基金項(xiàng)目:江蘇省水產(chǎn)三新工程項(xiàng)目(編號(hào):D2013-2-1、Y2015-24)。
作者簡(jiǎn)介:唐忠林(1982—),男,湖南郴州人,碩士研究生,工程師,主要從事水產(chǎn)動(dòng)物育種研究。Tel:(025)86566708;E-mail:77439753@qq.com。黃顙魚(yú)(Pelteobagrus fuIvidraco)和瓦氏黃顙魚(yú)(Pelteobaggrus vachelli)均屬鲇形目鲿科黃顙魚(yú)屬,為底棲經(jīng)濟(jì)魚(yú)類,廣泛分布于我國(guó)各大水系。目前,黃顙魚(yú)雜交繁殖模式已取得一定技術(shù)突破,包括黃顙魚(yú)與瓦氏黃顙魚(yú)、黃顙魚(yú)與烏蘇里擬鲿、黃顙魚(yú)與粗唇等雜交繁殖技術(shù),但均以試驗(yàn)性研究為主,其規(guī)模性生產(chǎn)技術(shù)尚不成熟[1-5]。黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)的雜交屬于不同品種之間的近緣雜交,其規(guī)?;敝臣夹g(shù)研究較少,生產(chǎn)效率有待提高。
通過(guò)開(kāi)展黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)的雜交生產(chǎn)試驗(yàn),確定催產(chǎn)、授精、孵化等技術(shù)參數(shù),以提高黃顙魚(yú)規(guī)?;s交繁苗生產(chǎn)效率,實(shí)施黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)的規(guī)?;s交繁苗。
1材料與方法
1.1材料
黃顙魚(yú)由南京市水產(chǎn)科學(xué)研究所黃橋?yàn)┟绶N繁育場(chǎng)自行培育,雌魚(yú)、雄魚(yú)的規(guī)格分別達(dá)0.1、0.2 kg。瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)購(gòu)自江蘇省溧陽(yáng)市前馬塘陳強(qiáng)特種水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司,規(guī)格達(dá) 0.45 kg,親魚(yú)體表無(wú)傷無(wú)病,發(fā)育情況良好。試驗(yàn)采用電子秤、移液槍、催產(chǎn)劑以及著卵網(wǎng)片、微孔增氧等孵化設(shè)施。
1.2催產(chǎn)
于人工授精前24 h對(duì)黃顙魚(yú)注射漁用催產(chǎn)劑,包括促黃體素釋放激素A2(LHRH-A2)、人絨毛膜促性腺激素(HCG)、馬來(lái)酸地歐酮(DOM)3種藥物,以促使其卵子成熟。藥物濃度分別為L(zhǎng)HRH-A2 50 μg/kg、HCG 2 000 U/kg、DOM 5 mg/kg。采用1針及2針注射方式,比較催產(chǎn)24 h前后時(shí)間段的雌魚(yú)成熟情況。1針注射:將全部藥物配制后一次性注射完畢。2針注射:第1針注射30 μg/kg LHRH-A2,第2針注射剩余藥物劑量;背部肌肉兩側(cè)各注射1針,時(shí)間間隔為12 h。于采精前12 h對(duì)黃顙魚(yú)雄魚(yú)及瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)背部肌肉各注射1針,劑量為雌魚(yú)的50%。
1.3精子采集與低溫保存[6]
于人工授精前2 h人工采集黃顙魚(yú)及瓦氏黃顙魚(yú)的精子。剖開(kāi)雄魚(yú)腹腔,用鑷子取出精巢(2~5 mg/尾),去除血絲,在培養(yǎng)皿中剪碎,紗網(wǎng)過(guò)濾,將雄魚(yú)的精液收集到精子保存液中,每尾魚(yú)使用30 mL保存液。黃顙魚(yú)精子保存液配方為NaCl 7.68 g、KCl 0.22 g、NaHCO3 0.25 g、Na2CO3 0.21 g、葡萄糖2 g、蒸餾水1 L。整個(gè)取精過(guò)程要快速完成,并避免精子與水接觸,于低溫下避光保存待用。
1.4擠卵與濕法授精
待95%以上的雌魚(yú)卵子成熟后進(jìn)行濕法人工授精,雜交組將黃顙魚(yú)雌魚(yú)卵與瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)精子混合授精,自交組將黃顙魚(yú)雄魚(yú)、雌魚(yú)的精卵混合授精。具體操作方法為:擠壓雌魚(yú)腹部,使魚(yú)卵排入無(wú)水的不銹鋼盆中,避免魚(yú)卵與水接觸;采用移液槍吸取保存的精液,加入到0.3%的鹽水激活后,迅速倒入卵盆中,人工攪拌均勻,使卵子和精子充分結(jié)合授精,準(zhǔn)備孵化。
取1 mL保存液精子,分別與10、20、30尾雌魚(yú)卵混合授精,比較雜交組與自交組在不同雌雄配組比例(300 ∶1、600 ∶1、900 ∶1)條件下的授精效果。
1.5孵化
將進(jìn)行人工授精后的魚(yú)卵均勻布置在著卵網(wǎng)片上,在充氣及流水條件下孵化,于10 h后觀察并計(jì)數(shù)受精卵,統(tǒng)計(jì)其受精率。檢查不同布卵密度下的受精卵發(fā)霉情況,統(tǒng)計(jì)出苗率。
1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
隨機(jī)抽取雜交組與自交組布卵網(wǎng)片各9片,每個(gè)雌雄比例組3片,每片隨機(jī)抽取3個(gè)面積約為12 cm2的區(qū)域,統(tǒng)計(jì)其受精率并計(jì)算各組平均值,采用SigmaPlot軟件分析各組數(shù)據(jù)的差異性。在黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)規(guī)?;s交繁苗過(guò)程中,統(tǒng)計(jì)平均受精率、總卵數(shù)、平游魚(yú)苗數(shù),計(jì)算平均出苗率。
受精率=(受精卵總數(shù)÷總卵數(shù))×100%;
出苗率=(平游魚(yú)苗數(shù)÷受精卵總數(shù))×100%。
2結(jié)果與分析
2.1不同雌雄配組比例的授精效果比較
雌雄配組比例、精子保存及人工授精的方式均會(huì)直接影響人工繁殖的受精率。在雜交繁殖過(guò)程中,雌魚(yú)與雄魚(yú)親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近程度將直接影響人工繁殖受精率的高低,是決定雜交繁殖能否成功的關(guān)鍵因素[7]。由表1可知,當(dāng)黃顙魚(yú)親本雌雄配組比例為300 ∶1及600 ∶1時(shí),雜交組與自交組之間的受精率差異均不顯著(P>0.05),表明黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)親本之間配合力較好??梢?jiàn),在控制雌雄比例的條件下,江黃顙魚(yú)雄魚(yú)與黃顙魚(yú)雌魚(yú)可進(jìn)行正常且高效的授精過(guò)程,進(jìn)而開(kāi)展規(guī)?;s交繁苗生產(chǎn)。當(dāng)親本雌雄配組比例為900 ∶1時(shí),雜交組的人工繁殖受精率顯著低于自交組(P<0.01),可能的原因?yàn)楸驹囼?yàn)采用的精子保存液對(duì)瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)精子的保存能力相對(duì)較弱。
應(yīng)用精子保存方法,雜交組的受精率隨著雌雄配組比例的升高而降低,當(dāng)雌雄比為900 ∶1時(shí),雜交繁殖的受精率僅為50.2%,下降極為明顯。在本試驗(yàn)條件下,雜交繁苗生產(chǎn)的雌雄配組比例宜控制在(300~600) ∶1之間。
2.2黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)規(guī)模化雜交繁殖結(jié)果
生產(chǎn)性試驗(yàn)結(jié)果表明,通過(guò)應(yīng)用精子保存方法進(jìn)行人工授精,可實(shí)現(xiàn)黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)大規(guī)?;s交繁殖生產(chǎn)。統(tǒng)計(jì)生產(chǎn)試驗(yàn)中的繁苗數(shù)據(jù),結(jié)果(表2)顯示,人工催產(chǎn)161.6 kg黃顙魚(yú)雌魚(yú),共使用4條瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú),共繁殖出207.9萬(wàn)尾雜交水花苗,平均受精率為79.8%,平均出苗率為82.5%;單尾瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)配組黃顙魚(yú)雌魚(yú)量達(dá)40.4 kg,單組繁苗量達(dá)51.9萬(wàn)尾。在黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)規(guī)模化雜交繁苗過(guò)程中,瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)規(guī)格差別較大,精巢大小不一,質(zhì)量為2.4~6.0 g,單尾瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)可利用的精子數(shù)量差異較大,因此雜交繁苗的雄魚(yú)使用數(shù)量應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。
3結(jié)論與討論
3.1瓦氏黃顙魚(yú)(♂)對(duì)黃顙魚(yú)(♀)的親本配合力
近緣雜交即種內(nèi)雜交,指同一物種的生物相互交配,包括同一品種內(nèi)不同個(gè)體之間的品種內(nèi)雜交以及同一物種內(nèi)不同品種之間的品種間雜交。由于親緣相近,近緣雜交一般不會(huì)出現(xiàn)不可交配性及雜種不育性[8],本試驗(yàn)結(jié)果與之相符。王衛(wèi)民等研究表明,黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)雜交組的受精率高于黃顙魚(yú)自交組,黃顙魚(yú)(♀)與瓦氏黃顙魚(yú)(♂)進(jìn)行雜交不存在繁殖障礙或繁殖障礙較小[5]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,當(dāng)雌雄配組比例為300 ∶1時(shí),雜交組的受精率高于自交組,而當(dāng)雌雄配組比例為600 ∶1及900 ∶1時(shí),雜交組的受精率低于自交組;當(dāng)黃顙魚(yú)親本雌雄配組比例為300 ∶1及600 ∶1時(shí),雜交組與自交組之間的受精率差異均不顯著。與黃顙魚(yú)自交組相比,瓦氏黃顙魚(yú)(♂)對(duì)黃顙魚(yú)(♀)的親本配合力相對(duì)較好,兩者無(wú)顯著授精障礙。
3.2精子保存技術(shù)在雜交繁殖中的應(yīng)用
瓦氏黃顙魚(yú)雄魚(yú)精巢呈樹(shù)枝狀結(jié)構(gòu),催產(chǎn)后仍很難擠出精液,須殺雄魚(yú)采精液以進(jìn)行人工授精。大規(guī)模生產(chǎn)過(guò)程中,雌魚(yú)、雄魚(yú)的發(fā)情時(shí)間很難控制同步,如果直接研碎精巢后進(jìn)行干法授精,則造成受精率較低、雄魚(yú)使用量大、勞動(dòng)量大等問(wèn)題[8]。已有研究表明,在4 ℃條件下應(yīng)用精子保存技術(shù),120 h內(nèi)黃顙魚(yú)精子可保持80%以上活力,壽命持續(xù) 168 h[9]。開(kāi)發(fā)應(yīng)用精子保存技術(shù)有助于提高瓦氏黃顙魚(yú)精子利用率、減少雄親魚(yú)宰殺量、穩(wěn)定苗種繁育量,從而提高經(jīng)濟(jì)效益[10]。本研究應(yīng)用了精子保存技術(shù)及濕法人工授精技術(shù),結(jié)果表明,在瓦氏黃顙魚(yú)(♂)對(duì)黃顙魚(yú)(♀)雜交繁殖時(shí),通過(guò)應(yīng)用精子保存技術(shù),單尾瓦氏黃顙魚(yú)與配組黃顙魚(yú)雌魚(yú)的適宜數(shù)量為300~600尾,與常規(guī)授精方法[雌雄比為(20~50) ∶1]相比,大幅提高了雜交繁殖中瓦氏黃顙魚(yú)的使用效率,極大降低了雄魚(yú)的使用數(shù)量,在規(guī)模雜交繁苗中可廣泛應(yīng)用本項(xiàng)精子保存技術(shù)。雜交繁殖的受精率隨著雌雄配組比例的升高而降低,當(dāng)雌雄比為900 ∶1時(shí),雜交繁殖的受精率僅為50.2%。分析認(rèn)為,通過(guò)優(yōu)化保存液配方、提高保存能力,可進(jìn)一步提升雄魚(yú)的使用效率,這有待后續(xù)深入研究。
3.3提高規(guī)模化雜交繁殖效率的措施
在分析本試驗(yàn)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上,總結(jié)催產(chǎn)、授精、布卵、增氧孵化等技術(shù)經(jīng)驗(yàn),得出以下可提高黃顙魚(yú)規(guī)模化雜交繁殖效率的措施。(1)應(yīng)用精子保存技術(shù),并進(jìn)一步優(yōu)化瓦氏黃顙魚(yú)精子保存液配方,可提升精子保存效率,提高雌雄配組比例,減少雄魚(yú)使用數(shù)量,提高受精率。(2)布卵均勻,將布卵密度控制在低于10粒/cm2, 提高孵化率及出苗率。(3)將2
針催產(chǎn)方式改為1針催產(chǎn),減少勞動(dòng)量、提高效率,并根據(jù)條件將催產(chǎn)前、中、后期的親魚(yú)分池,按先后順序進(jìn)行擠卵授精。(4)選用優(yōu)質(zhì)親本,瓦氏黃顙魚(yú)規(guī)格達(dá)0.6 kg/尾,精巢達(dá)4 g;黃顙魚(yú)規(guī)格達(dá)0.1 kg/尾,單尾懷卵量達(dá)2 000粒。(5)及時(shí)去除死卵,采用亞甲基藍(lán)預(yù)防水霉病的發(fā)生。(6)孵化過(guò)程中氣量要充足,保證溶氧量,出苗后及時(shí)減小氣量。
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