劉詩柱++韓慶彬++王寶玉++江善祥

摘要：種公雞攜帶病原體傳遞給后代的問題由來已久，作為垂直傳播的一個途徑其危害不容小視，可致雛雞死亡率高、后代生長不良、疫病代代相傳、生產(chǎn)力低下，甚至給環(huán)境保護(hù)、可持續(xù)發(fā)展帶來挑戰(zhàn)。試驗(yàn)對新研發(fā)的一種精液保護(hù)劑進(jìn)行了評價。①通過兩種稀釋比例、經(jīng)過4個不同時間點(diǎn)，檢測了新型精液保護(hù)劑對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌的殺滅率，結(jié)果表明，新型精液保護(hù)劑對三種細(xì)菌的殺滅率分別達(dá)到99.99%、99.99%和100.00%；②對加入新型精液保護(hù)劑后的種雞精液在不同時間點(diǎn)進(jìn)行精子活力測定，結(jié)果各時間點(diǎn)的精子活力均明顯高于空白試驗(yàn)組。綜合表明，該新型精液保護(hù)劑不但可殺滅精液中的病原體，而且可以提高精子活力。

關(guān)鍵詞：新型精液保護(hù)劑；種雞精液；質(zhì)量；影響

中圖分類號：S814.3；S831 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2016）09-0009-02

種雞垂直傳播性疾病包括細(xì)菌性疾?。u傷寒、雞白痢、禽波氏桿菌病、禽奇異變形桿菌病等）、病毒性疾?。ㄇ莅籽?、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥、雞傳染性貧血、病毒性關(guān)節(jié)炎、禽傳染性腦脊髓炎、I型腺病毒感染、產(chǎn)蛋下降綜合征等）、其他微生物感染性疾病（支原體病、衣原體病等）。當(dāng)種雞感染某一種垂直傳播性疾病時，病原會隨著曾祖代—祖代一父母代一商品代而傳播，并且每只祖代雞會繁殖約70～80套父母代，父母代再將疫病傳播到商品代。種公雞攜帶病原體傳遞給后代的問題尤其嚴(yán)重，一只種公雞將病原傳播給其他雞的機(jī)會比母雞高得多[1]。作為垂直傳播的一個途徑其危害不容小視，其帶來的后果包括雛雞死亡率高、后代生長不良、疫病代代相傳、生產(chǎn)力低下，甚至給環(huán)境保護(hù)、可持續(xù)發(fā)展帶來挑戰(zhàn)。隨著傳代，疫病波及范圍不斷被擴(kuò)大，影響越來越嚴(yán)重。同時，種公雞如果攜帶垂直傳播疫病病原，就會經(jīng)交配或人工授精傳染給母雞。輕者會侵害雞的生殖系統(tǒng)、輸卵管感染、卵泡變性、壞死，造成產(chǎn)蛋率下降、孵化率降低、弱雛增多以及雛雞生長緩慢等一系列的問題；重者造成烈性傳染病的傳播和暴發(fā)，危害巨大。

針對上述情況，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理實(shí)驗(yàn)室研制了用于種豬場和種雞場的精液保護(hù)劑[2]。通過向品質(zhì)合格的精液中添加一定量的精液保護(hù)劑，以期達(dá)到凈化精液中的病原微生物，切斷疾病垂直傳播，同時延長精子受精能力及時間的目的[3]，從而使人工授精技術(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)揮更大的作用。

1 材料與方法

1.1 材料設(shè)備

精液保護(hù)劑（由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理實(shí)驗(yàn)室提供）100 mL；大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌（由商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物工程系微生物實(shí)驗(yàn)室提供）；恒溫培養(yǎng)箱， 高倍光學(xué)顯微鏡，細(xì)菌計(jì)數(shù)器，新鮮種雞精液（河南省商丘市宣武種雞場提供） 50 mL；低倍顯微鏡等。

1.2 方法步驟

1.2.1 精液保護(hù)劑對臨床常見病原菌的抑殺作用 分別取精液保護(hù)劑1.0 mL和0.5 mL各3份，各加入純化水200 mL，配成1∶200和1∶400的溶液，貯于6個錐形瓶中；然后從恒溫培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)有大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的試管，用滴管吸取各1 mL，加入上述錐形瓶中；分別于0、1、3、6、12 min時，通過高倍顯微鏡測定細(xì)菌數(shù)并計(jì)算殺滅率。

1.2.2 精液保護(hù)劑對種雞精子活力的影響 將生理鹽水與本品按1 000∶10混合后，再按照4∶1的比例與種雞精液稀釋，取A、B兩試管各加入稀釋后保護(hù)劑8 mL、新鮮精液2 mL。于10.5 h后用低倍顯微鏡測定精子活力，以后每1 h測定1次，共測定8次。B試管為重復(fù)試驗(yàn)，設(shè)空白對照組。

2 結(jié)果與分析

2.1 精液保護(hù)劑對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的殺滅效果

通過1∶200和1∶400兩種稀釋濃度的精液保護(hù)劑對三種細(xì)菌的抑殺試驗(yàn)可以看出，從1 min到12 min作用時間均呈現(xiàn)很好的殺菌效果（表1）。1∶400稀釋時，對大腸桿菌的抑殺效果最差，作用1 min時，殺滅率為98.07%；對銅綠假單胞菌效果最好，作用6 min時，殺滅率達(dá)到100%。1∶200稀釋時，對金黃色葡萄球菌抑殺效果最差，1 min時殺滅率為99.94%；對銅綠假單胞菌效果最好，作用1 min時殺滅率就達(dá)到100%。1∶200稀釋作用12 min時，對三種細(xì)菌的殺滅率均達(dá)到99.99%以上。

2.2 精液保護(hù)劑不同時間點(diǎn)對精子活力的影響

從加入精液保護(hù)劑10.5 h后每次間隔1 h、連續(xù)8次的測定結(jié)果來看，精液保護(hù)劑對精子有一定的保護(hù)作用（表2）。作用10.5 h時，加入精液保護(hù)劑的平均活率為0.925，比空白對照組的0.900高2.78%；之后5次測定，分別比對照組高20.6%、29.8%、31.4%、50.0%和67.5%。最后兩次因活率太低，利用的意義不大。

3 討論

（1）精液保護(hù)劑在本試驗(yàn)中對三種病原菌的抑殺作用均較為理想，但是還不能說明對所有的病原體都有理想的殺滅作用。畢竟精液中可能污染的病原有很多種，如正粘病毒、副粘病毒、皰疹病毒、呼腸孤病毒、白血病病毒、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒等，還有沙門氏菌、支原體、衣原體等，有待進(jìn)一步探討。

（2）精液保護(hù)劑對精子活力影響的試驗(yàn)。本試驗(yàn)從精子形態(tài)、活動性兩方面鑒定了該精液保護(hù)劑對精子非但沒有抑殺作用，還有一定的保護(hù)作用。但是最后的評定還要看其對孵化率、健雛率的影響，甚至要看對后代生長發(fā)育和繁殖有無影響。

（3）具有殺滅病原體作用的精液保護(hù)劑目前尚屬首例，研發(fā)雖然難度很大，但鑒于其在畜牧生產(chǎn)上的巨大作用，其意義重大。疫病垂直傳播的普遍性及其巨大危害目前仍是世界難題，精液保護(hù)劑從種公雞入手，是斬?cái)啻怪眰鞑サ囊粭l重要途徑，一旦研發(fā)成功會給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大財(cái)富。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李 湛.公雞精液品質(zhì)的鑒定及注意事項(xiàng)[J].今日畜牧獸醫(yī)，2011（11）：38

[2] 張兆旺.雞精液稀釋液設(shè)計(jì)及篩選方法學(xué)研究[D].蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[3] 王欣榮，李彥強(qiáng).保存條件對雞精子形態(tài)及畸形率的影響[J].黑龍江動物繁殖，2009，17（6）：5-6.